凯氏定氮法检测N含量
凯氏定氮原理：
测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐（消化炉SBS800），然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定，就可计算出样品中的氮量（凯氏定氮仪D4000）。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。
蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。整个过程可以使用德国OMNILAB凯氏定氮系统进行检测。
反应化学方程式：
1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4作用下，硝化生成（NH4）2SO4反应式为：2NH2+H2S04+2H＝(NH4)2S04（其中CuSO4做催化剂）
2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3溶液中反应式
为:(NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O
3.用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量
反应式为：(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3
凯氏定氮仪操作说明书
Food ALYT D4000
1、开机前准备：蒸馏水容器、NaOH溶液容器、H3BO3溶液容器。自来水管或冷却水循环水
器。32%氢氧化钠溶液，2%-4%的硼酸溶液。
2、开机前连接好NaOH进样管、H3BO3进样管、稀释水进水管、蒸汽水进水管、废液出水管、
冷却水进水管和冷却水出水管。
3、开机前确认各进样管已连接好。
4、开机前，打开自来水水管头或冷却水循环水器。打开凯氏定氮仪电源开关，仪器开始运行。
显示屏会显示steam generator heating（蒸汽发生器加热中，同时显示屏下方会出现沙漏计时器），蒸汽发生器加热完毕后进入开始界面，显示如下：
5、程序编辑：旋转操作界面的旋钮，将黑色条带旋转至PROGRAM，按下旋钮进入程序旋转界面，通过旋转旋钮旋转不同的程序。例：选择程序2，出现下图
“==>>”继续“<<==”返回
旋转旋钮至==>>按下旋钮，进入程序编辑。如下图
DIL,H2O是稀释水添加量，NaOH是氢氧化钠溶液添加量，DIST,TIME是蒸馏时间。溶液添加量以及蒸馏时间都是以S为单位。稀释水加入速度是16ml/s，氢氧化钠加入速度是10ml/s，蒸馏时间一般选择在300-360s。稀释水和氢氧化钠的加入量根据蒸馏样品的多少而定。确定好溶液加入量以后，选择旋钮至==>>，选择继续，然后出现如下界面
REAC,TIME是蒸馏延迟时间即加入NaOH后到开始蒸馏的时间。POWER是蒸汽发生率，蒸汽量的大小。DRAIN SAMPLE是废液排放时间。通过旋转旋钮来确定合适的时间和蒸汽发生率。蒸馏延迟时间根据样品量的多少选择，时间以S为单位，蒸汽发生率一般在70%左右。废液排放时间为仪器默认值即可。设置好参数以后，旋转旋钮至==>>，选择继续，然后出现如下界面
H3BO3是硼酸加入量，以S为单位，硼酸加入速度是14ml/s。到此程序编辑完毕。旋转旋钮至<<==，按下旋钮返回开始界面。
6、开始蒸馏程序：程序编辑完毕，选择编辑好的程序，在主界面按下STAR即可开始蒸馏
程序。
7、在每次蒸馏前需要对凯氏定氮仪的内部管道进行润洗。在开始界面，旋转旋钮至
OPTIONS，按下旋钮确定，进入OPTIONS菜单，会出现如下界面
旋转旋钮至MANUAL ENTRY，按下旋钮确定，进入MANUAL ENTRY菜单，会出现如下界面
将黑色条带旋转至NaOH，长按旋钮直到消化管中有液体进入，持续到消化管中液面大概1CM 左右停止，旋转旋钮至==>>，确定进入下一步，如下如下界面：
将黑色条带旋转至DRAIN SAMPLE，长按旋钮直至排废液管排出空气为止。这样NaOH管道清洗完毕。将黑色条带旋转至H3BO3，长按旋钮，直到锥形瓶中出现蒸馏水，液面高度大概1CM左右，这样H3BO3管道清洗完毕。然后返回上一界面，将黑色条带旋转至STEAM，按下旋钮，打开蒸馏功能。仪器开始长生蒸汽，持续蒸馏5min左右完成对蒸馏管道的清洗。以上是开始检测样品前的润洗工作。
8、DEVICE菜单：进入DEVICE菜单后会出现如下界面：
LANGUAGE是语言选择，通过旋转旋钮选择不同的语言。CONTAINERS是指如果使用F-KS 40过滤罐是，需要将CONTAINERS切换至ON，默认设置为OFF。TIME是设置时间，通过旋钮来设置一天的时间。以上菜单设置完毕后选择下一步出现如下界面：
COOL,WATER是控制是否接冷却循环水器的，默认设置是OFF，如果需要接冷却循环水器需将COOL,WATER切换至ON。设置完以后下一步进入对日期年月日的设置，通过控制旋钮来编辑日期。
9、仪器的维护：每天用户仪器后需要对仪器的管道进行清洗，仪器管道的清洗很简单，准备一桶蒸馏水，将NaOH和H3BO3进样管放入蒸馏水中。安装测试仪器之前对管道的润洗步骤进行操作即可完成对仪器的清洗（即步骤7）
德国OMNILAB凯氏定氮仪中国区域总代理
北京天翔飞域仪器设备有限公司
