实验一粮食、水果和蔬菜中有机磷农药测定的气相色谱法
Experiment 1 Determination of Organophosphorus Pesticide Residues in Foodstuff, Fruits and Vegetables by Gas Chromatographic Method
1.方法原理
样品中有机磷农药残留在加入无水硫酸钠后，用有乙酸乙酯提取、过滤、浓缩、定容，用气相色谱氮磷检测器(NPD)或火焰光度检测器(FPD)检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
2.方法适用范围
本法规定了粮食(大米、小麦、玉米)、水果(苹果、梨、桃等)、蔬莱(黄瓜、大白菜、西红柿等)中速灭磷(mevinphos)、甲拌磷(phorate)、二嗪磷(diazinon)、异稻瘟净(iprobenfos)、甲基对硫磷(parathionmethyl)、杀螟硫磷(fenitrothion)、溴硫磷(bromophos )、水胺硫磷(isocarbophos)、稻丰散(phenthoate)、杀扑磷(methidathion)等多组分残留量的测定。
3.仪器与试剂
3.1 试剂
无水硫酸钠：分析纯，650℃灼烧4h，冷却后贮于密闭容器中备有。
丙酮：分析纯，重蒸馏。
乙酸乙酯：分析纯，重蒸馏。
所需有机磷农药标准溶液：纯度≥98.0%。
3.2 仪器与设备
气相色谱仪：配FPD或NPD
高速组织捣碎机
微量注射器：5μL，10μL。
梨形瓶：200mL
具塞刻度试管：10mL。
鸡心瓶：100mL。
4. 样品处理步骤
4.1 提取和净化
称取试样25.0g置于组织捣碎机中，加入25.0g无水硫酸钠和50.0mL乙酸乙酯，高速匀浆3min，提取液经铺有无水硫酸钠的漏斗过滤，残渣用10mL乙酸乙酯洗涤2次，合并滤液于梨形瓶中，用旋转蒸发器在45℃水浴减压浓缩后定容至5.0mL，采用GC测定。在分流/不分流进样口的玻璃衬管中填入0.5cm高的石英棉，进样70次后，更换石英棉。
4.2 测定
4.2.1 色谱条件
(1) 色谱柱：BP-10石英毛细管柱(25m×0.22mm×0.35μm)
(2) 色谱柱温度：60(2min)→10/min →200(0.2min) →2/min →250℃℃℃℃℃
(3) 进样口温度：270℃
(4) 检测器温度：270℃
(5) 载气和尾吹气：N2≥99.99%，0.5mL/min ，尾吹气：35mL/min
(6) 氢气(FPD)：40mL/min ；空气(FPD)：120mL/min
(7) 进样方式：不分流进样
4.2.2 色谱测定
根据样品液中有机磷含量情况，选择峰高相近的标准工作液。标准工作液和样液中有机磷农药的响应值均应在仪器的检测线范围内。对标准工作液和样液等体积穿插进样测定。在上述条件下对硫磷保留时间约为28.54min 。
4.2.3 空白试验
除不加试样外，按上述测定步骤进行。
4.2.4 结果计算
m
h A V c h A X s s s ×××=
)()( 式中：X ：试样中农药残留量，mg/kg
A(h )：被测农药的峰面积(峰高) As(h s )：标准工作液中被测农药峰面积(峰高)
c s ：标准工作液中被测农药浓度，μg/mL
V ：样液最终定容体积，mL
m ：样品量，g
4.2.5 检测限和回收率
对硫磷检测限：0.01mg/kg ；
对硫磷回收率：浓度在0.01～1.00mg/kg 范围内，回收率为89.0%～94.3%。
实验二畜产品中氯霉素残留的ELISA检测
Experiment 2 Determination of Chloramphenicol Residue in Animal
By-Products by ELISA
1.方法原理
采用直接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预先包被氯霉素抗体，样品中残留的氯霉素和酶标氯霉素抗原竞争微孔条上预包被的抗体，经3,3',5,5'-四甲基联苯胺(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine,TMB)底物显色，样品吸光值与其残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可计算样品中氯霉素的含量。
2.方法适用范围
可定性、定量检测动物组织(含水产品)、牛奶、蜂蜜、饲料、鸡蛋等样品中氯霉素的残留量。
3.仪器与试剂
3.1 试剂
乙酸乙酯、正己烷、氯化钠、去离子水，以上试剂均为分析纯。氯霉素检测试剂盒(商品)
3.2 仪器与设备
酶标仪、离心机、水浴锅、天平、旋转蒸发仪、微量移液器等
3.3 试剂配制
按试剂盒说明配制
4. 样品处理步骤
4.1 牛奶样品处理
(1) 室温4000rpm/min，离心15min，去上层脂肪(脱脂奶可省此步);
(2) 取4.0mL除去脂肪的牛奶于50.0mL离心管中，加入8.0mL乙酸乙酯，振荡混
匀1min；4000rpm/min，离心15min
(3) 移取上层乙酸乙酯4.0mL至另一玻璃试管中，于60℃氮气流下吹干；
(4) 向玻璃试管中加入2.0mL正己烷，振荡混匀；
(5) 加入2.0mL稀释后的样品稀释液强烈振荡1min；室温4000rpm/min，离心
5min；
(6) 取下层液70μL检测。
4.2 组织样品处理
(1) 称取2.0±0.05g去脂肪并匀浆样品于50.0mL离心管中，加入4%NaCl溶液
4.0mL，振荡均匀后，加入4.0mL乙酸乙酯振荡5min；
