为了庆祝国家兽用生物制品工程技术研究中心成立十周年，同时配合农业部和江苏省人民政府联合主办的“中国江苏·现代农业科技大会”，“第四届动物疫苗与免疫佐剂技术沙龙”12月2-3日在南京召开。参会代表408名，分别来自中国、美国、加拿大、德国的45个科研机构和85个兽用生物制品生产企业。
2日上午，会议在我院科技会堂隆重开幕。国家兽用生物制品工程技术研究中心主任、江苏省农业科学院院长易中懿研究员致开幕词，介绍了“中心”十年发展历程和我院基本情况。黄俊副院长出席开幕式。“中心”常务副主任侯继波研究员主持开幕式。
夏咸柱院士、刘秀梵院士、张改平院士和金宁一院士作主旨报告，国家兽用生物制品工程技术研究中心常务副主任侯继波研究员、中国兽医药品监察所长才学鹏研究员、农业部兽医药政处长谷红研究员、加拿大萨斯喀彻温大学Andrew Allan Potter教授、德国柏林自由大学Nikolaus Osterrieder教授、美国帕斯适宜卫生科技组织陈德祥研究员、复旦大学王宾教授、国家生化工程技术研究中心（北京）副主任杜昱光研究员、山东滨州牧医研究院长沈志强研究员、北京大北农集团赵亚荣博士、河北农业大学王家鑫教授、中国农业科学院兰州兽医研究所常惠芸研究员作专题报告。会议秉承“促进技术进步，加速产业升级”的宗旨，推进“产、学、研、用”合作互赢、共同发展，现场精彩纷呈、答疑互动气氛热烈。同期，召开国家兽用生物制品工程技术研究中心技术委员会会议和国家公益性行业（农业）科研专项项目“动物疫苗制剂及下游工艺技术研究与示范”研究进展交流与成果展示会。
畜禽具有大群饲养（封闭群体）、群体健康，经济性突出（干预的成本-效益分析，疫苗的价格和投放的支出）和生产饲养的阶段性三个特点，因此除了安全性和免疫效力外，新疫苗研发的早期就必须考虑：1、新疫苗是否适合大群投放，有没有相应的投放器具？2、新疫苗采用的生产工艺和流程，根据疫苗使用对象，经济上的可行性。3、新疫苗适合在畜禽生产的哪个阶段使用？例如禽用疫苗是否可在出壳前或出壳时使用？
研发更安全、更高效的新疫苗是我们的目标，要认识到：1、疫苗病毒在野外有返强的例子，如新城疫I系苗（Mukteswar株）和高致病性PRRS活疫苗株；
2、增添对疫苗免疫效力评价的新内容，除了考量临床保护效力外、增加疫苗免疫对强毒攻击后的消除能力（强毒载量和维持时间）；
3、通过疫苗种子，载体技术、佐剂和免疫调节剂等研发高效、持续时间长的疫苗；
4、研发多联或多价疫苗、广谱疫苗；
5、大力研发细菌性疫苗；
6、研发用于疾病根除计划、清除强毒
感染能力强的疫苗。
动物疫病免疫防控制剂的研究
世界动物卫生组织（OIE）列出的、2016年1月1日生效的最新法定动物传染病共118种，其中能感染多种物种的25种，牛病14种、羊病和马病各11种、禽病13种、猪病6种，人兽共患病共有69种。动物疫病防控关系到养殖业发展、关系到食品安全、关系到公共卫生安全、关系到国家生物安全、关系到社会和谐稳定，疫苗免疫是动物疫病防控的关键。
疫苗研制与检验是一项系统工程，包括菌/毒种选育与构建工程、免疫原高效培养制造工程、免疫原纯化与检验工程、佐剂与保护剂、疫苗制造与检验工程、免疫途径与程序和动物免疫安全与效力检验工程。其中，利用反向遗传学等技术，对病原体进行进一步改造，不断减低其毒力、提高免疫效果和交叉保护能力，同时筛选可在细胞高滴度生长的毒种是当前疫苗研究的方向，在禽流感、狂犬病、
口蹄疫等多种重大疫病疫苗研发上取得成功。
自1918年青岛商品检验局血清所成立至今，我国兽用生物制品发展已有百年历程，猪瘟疫苗、牛瘟疫苗的成功研制成为我国乃至世界兽用疫苗史上的典范。病原模式和危险模式识别理论为免疫佐剂研发指明方向，2011年诺贝尔生理医学奖明晰先天免疫启动的关键细胞-树突细胞，关键分子-TLR受体，开启了免疫佐剂研究的黄金时代。国家兽用生物制品工程技术研究中心先后研发出多种纳米颗粒佐剂，免疫保护效力、持续期和交叉保护显著提升，主要包括口蹄疫、禽流感、猪PCV2、PRV和PEDV等多种疫苗的免疫增强剂。
细胞悬浮培养、抗原纯化和耐热保护技术研究获得突破。Marc145、Vero和DF-1细胞的微载体悬浮培养工艺全面优化，PK15、MDCK、BHK21、ST和Sf9细胞实现自悬浮培养。抗原纯化GEM技术为原始创新，实现口蹄疫病毒、猪圆环病毒、猪蓝耳病毒、猪流行性腹泻病毒和猪瘟E2蛋白等抗原的一次低速离心分离纯化工艺。研制成功无明胶、无蛋白耐热冻干保护剂配方，应用真空泡沫干燥工艺，实现NDV和PRRSV活疫苗的常温保存（12个月以上）。
2016年我国兽用生物制品投产企业89家，生产线498条（其中悬浮培养生产线22条），生产总值146.52亿元，平均毛利率62.96%。近十年注册产品330个，其中疫苗213个，禽用制品133个，猪用制品84个，批准文号1826个。
技术发展层面，一是理论创新。重要动物疫病病原学、流行病学研究及信息库，深入研究慢性疫病的发病机理和动物生物制品创制的分子基础；二是关键技术创新。着重开展疫苗种毒和抗原设计构建及其制备技术，动物疫病诊断新技术，动物疫病免疫治疗技术，本动物攻毒效检的替代检验技术和免疫佐剂/增强剂等技术研究；三是产业化生产工艺技术创新。包括抗原表达工艺技术，生物合成技术，细胞改造工程技术，传代细胞大规模悬浮培养工艺技术，细菌发酵培养工艺技术，大规模抗原浓缩纯化工艺技术等；四是新产品研发。填补防疫空白的疫苗需要尽快改进，研发区别感染和免疫的标记疫苗，一针多防的多联多价灭活疫苗。
《兽药注册评审工作程序》发生显著变化，一是申报资料技术评审：在原来初审、复审基础上增加终审环节。评审中心对评审会议提出的评审意见进行审核并提出技术终审意见和结论；二是兽药质量标准复核：1、兽药质量标准复核前，评审中心以书面形式通知中监所和申请人。2、中监所根据评审意见，按照《兽药注册办法》等相关规定进行兽药质量标准复核，在规定时限内将检验报告报农业部兽医局，将质量标准复核意见报评审中心。3、中监所在收到评审中心复核检验通知后6个月内未收到复核样品或相关资料、材料不全导致无法开展检验的，应向评审中心说明具体情况，评审中心根据说明对该项注册申请按自动撤回处理；三是审批：农业部兽医局根据评审中心的技术评审终审意见和结论以及中监所的复核检验结论，经局务会集体审议，提出审批方案。建议予以批准的，报分管部领导审批。
GCP的政策解读。1、自2018年1月1日起，未经农业部监督检查或监督检查不合格的兽药安全性评价单位，其完成的研究、试验数据资料不能用于兽药注册申请。2、具备兽药安全性评价资质的单位既可以对本单位新制品进行评价，亦可承接外单位的委托评价。首次开展评价工作前需向农业部报告，并接受农业部的监督检查。3、兽用生物制品试验项目包括安全性试验和有效性试验。有效性试验包括：常规效力试验以及诊断制品的灵敏性、特异性等，免疫制品的临床免疫效力、治疗制品的临床疗效、体内诊断制品的临床检测试验。
新概念疫苗应以疫苗和动物协调的根本要求进行设计，遵循安全、高效和不浪费免疫能力的原则，达到精确极致（位点、结构、启动）、纯化和微量（微克级）。具体地说，抗原结构设计应最大限度诱导保护性免疫反应，最大限度降低无关反应；抗原表达和组装应最大限度保证其结构正确和构象正确；疫苗设计开始就应考虑简便、高效的纯化方案。应用水稻成功制备猪瘟超级疫苗，1/9粒米生产的抗原（0.5微克）免疫猪，提供3个月以上的免疫保护，充分体现超级微量、超级反应性、超级持续期、超级简化的免疫程序。
550种哺乳动物中存在32万种病毒，疫苗在疫病防控中具有重要的作用。传统疫苗技术平台不断升级，新疫苗研究活跃，新疫苗品种不断上市，疫苗监督能力提升，国外疫苗迅猛涌入是中国疫苗研发的机遇和挑战。新型疫苗的研发包括遗传重组疫苗，免疫原性好；合成肽、亚单位、VLP疫苗，安全性好；基因缺失疫苗，复制能力、免疫应答和生产工艺与常规活疫苗相同；基因重组载体疫苗，载体容量大、稳定易操作。新型疫苗构建时要注意，病原特性与免疫保护、生命组学与构建优化、常规疫苗与新型疫苗的取长补短、免疫程序与有效免疫、载体免疫与安全性、生态环境与遗传操作等综合因素。
反向疫苗学和兽医疫苗新型制剂
反向疫苗学的基础是病原致病机理与功能、粘附与定植、毒力因子和免疫保护机制，优点是快速识别靶标抗原，避免抗原选择过程人为偏差，不需要微生物体培养和广泛存在的动物模型可依赖。以牛传染性胸膜肺炎（CBPP）亚单位疫苗的研发为例，应用生物信息技术筛查出985个相关基因，其中胞外蛋白271个，决定制备82个候选抗原(黏附率≥0.5)。根据出现频率、血清反应性、诱导IFN-α能力、交叉反应性进行排序分组，5个蛋白为一组进行免疫保护测试，目前已得到8个蛋白组成的疫苗，具有较好的保护性。在佐剂方面，研发成功三联佐剂，具备抗原递送、靶向和免疫刺激的功能。
密码子去优化构建新型高效的减毒活病毒疫苗
以鸡马立克氏病（MDV）的UL30基因为例，密码子去优化的研发思路是先把靶标基因平均分为三段，分别进行密码子去优化，密码子最优化和密码子中性化，构建了系列重组病毒。通过对获得的重组病毒的生长特性和对实验动物的致病力的研究，发现了密码子去优化对MDV的致弱作用。报告中分析了密码子去优化导致致病力下降的可能机理，对病毒致弱新方法拓展了新的思路。
兽用疫苗新型佐剂和配方：机遇与挑战
佐剂通过激活先天性免疫影响获得性免疫反应。1925年Gaston Ramon发现一些物质可以增强抗原的免疫反应，佐剂研究已有近百年历史。1926年Alexander Glenny发明铝胶佐剂，1937年Jules T. Freund发明油乳佐剂（CFA和IFA），上世纪80年代起发现分子佐剂，如TLR受体激动剂PolyI:C等。近十多年来研究成功不少佐剂，如基于角鲨烯的佐剂MF59、AS03和AF3等，也出现了一些联合佐剂，如铝胶和MPL组成的AS02，脂质体、MPL和QS21组成的AS01等。目前通过IL-4、IL-5调节Th2和IL-12、IFN-γ调节Th1机制的佐剂都已商品化，调节Treg、Tc1和Th17途径的佐剂尚处研发当中。新型佐剂研发方向：取代不可代谢的矿物油、粒径控制在50-100nm和dmLT。
佐剂用以促进免疫反应强度和质量，免疫应答不强造成免疫失败，其原因除抗原外，共刺激因子、细胞因子、负反馈等因素都与佐剂相关。理想人用免疫佐剂可选用临床药物（老药新用），其成本低、易在细胞和动物中评价。分别对Levamisole、Cimetidine、Praziquantel、Bupivacaine和Amiloride进行了佐剂效能进行了评价。成功应用GM-CSF促进DC细胞成熟，用于治疗性乙肝疫苗，显著促进了HBeAg和HBsAg的清除。
寡糖作为生物信息分子参与细胞粘附、免疫应答、信号转导、代谢调节一系列重要分子识别和细胞识别过程，寡糖的序列结构决定其生物学功能。多糖及其衍生物作为疫苗佐剂具备生物相容性和生物可降解性的优势。与多糖相比，寡糖分子量小、易溶于水、天然来源、易被机体吸收、结构清晰、易质量控制和良好的免疫增强能力，是天然糖类疫苗佐剂开发的趋势之一。甲壳素寡糖通过TLR4样受体使小鼠树突状细胞MHCⅡ、CD86表达增加，TNF-α表达量升高，促进CD4+T细胞增殖，抑制多种炎性介质对细胞造成的炎症损伤，具有显著的佐剂增强活性，值得进一步开发。不同结构的壳寡糖具有抑制菌膜活性，结合微流控芯片、等温扩增技术，用于户外病原快检仪器的研发。
黏膜免疫在抵抗外来病原入侵中占有极其重要的地位，黏膜免疫系统集中了整体免疫系统50%以上的淋巴组织和80%的免疫细胞，95%以上的动物疫病是通过呼吸道和消化道粘膜等感染的。将疫苗放入气溶胶发生器中雾化，雾滴吸入气管后爆裂成1-5个微米的微颗粒，粘膜附着率高，促进呼吸道黏膜产生粘膜免疫。畜禽呼吸频率15-30次/分钟，每次呼吸肺泡内气体的更新率为10-15%，喷雾免疫需持续1分钟左右。该免疫技术便于操作，避免了使用和处理针头和注射器的风险，省工省力省事省时。气雾免疫成功应用于多种活疫苗免疫，包括猪肺炎支原体活疫苗(RM48株)、猪链球菌活疫苗、巴氏杆菌活疫苗、大肠杆菌活疫苗、仔猪副伤寒活疫苗、流行性腹泻疫苗、伪狂犬病基因缺失疫苗、猪瘟活疫苗和猪蓝耳活疫苗。
全球动保市场约为100亿美元，其中伴侣动物用占33%、牛羊用占29%、猪用占26%、禽用占12%。我国畜禽养殖量居世界第一位，勃林格殷格翰（Boehringer-Ingelheim）、诗华（Ceva）、礼来（Eli Lilly and Company）、诺华（Novartis）、拜耳（Bayer）、硕腾（Zoetis）和默沙东（MSD）等跨国公司先后在中国建立研发中心，联苗、重组疫苗、自动化免疫设备等技术创新是未来的发展趋势。饲养管理水平提高、疫病爆发、大规模死亡罕见的规模化养殖模式，治疗性药物销售减少、预防用药和保健药品使用增加、疫苗市场急剧扩大的动物保健，工艺技术向国际看齐、诊断试剂尚需突破的产品研发是兽用生物制品行业新时代特征。“从猪场中来、到猪场中去”的本地（菌、虫）毒株、全球采购材料、现代化的GMP设施、人员技术国际化将把中国兽用疫苗的研发进入国际领先地位。
树突状细胞是FMDV抗原提呈的途径。甘露糖受体和清道夫受体是BMDC 识别并摄取FMDV抗原的主要模式识别受体。摄取抗原被Hsp90从内吞小体转运至细胞质基质，被蛋白酶体降解，启动抗原交叉提呈途径。溶酶体降解FMDV 抗原，促进T细胞分化为Th1和Th17效应细胞。内吞小体再循环是BMDC对T 细胞发挥旁位活化作用的重要机制。甘露糖受体和清道夫受体对VP1-VP4的识别抑制Th1应答。
肥大细胞在抗FMDV感染中的发挥重要作用。清道夫受体识别VLP引起肥大细胞脱颗粒，甘露糖受体、TLR2和TLR4识别VLP引起肥大细胞分泌蛋白质分子。 VLP活化的肥大细胞上清液直接启动脾脏初始B、T淋巴细胞增殖。
巨噬细胞参与FMDV模式识别与应答。早期IL-6 和 IL-10 的分泌受到抑制，后期通过SR识别FMDV被激活，分泌 IL-13、IL-15、IL-17、IL-17BR和G-CSF。巨噬细胞分泌大量IL-21和可溶性TNF-α受体，不利于DC成熟和Th1应答建立。巨噬细胞通过SR识别FMDV而所启动的免疫应答不利于免疫记忆建立。番泻苷可作为重组口蹄疫病毒蛋白疫苗的佐剂。
FMD多表位疫苗研究技术平台已基本成熟。猪FMD（O型）多表位疫苗已获得临床批件，正在进行临床试验。实现E.coli可溶性高效表达，中间试制产量是实验室的10倍左右，PD50为10以上，最小免疫剂量为25微克/头份。猪口蹄疫A型，牛羊口蹄疫A型、O型、Asia1型多表位疫苗及双价疫苗研发进展顺利。成功建立口蹄疫澜系标记研究技术，实现O、A型和3ABC-iPOCT抗体检测和O、A抗原检测；建立了口蹄疫抗体化学发光CLIA技术平台，实现口蹄疫3ABC-CLIA和口蹄疫3ABC+2C-CLIA，O型、A型抗体检测。
动物微生物与免疫期末答案 问：《自由引导人民》是作者对1830年法国发生的七月革命事件的真实写照。 答：× 问：下列关于华盛顿城市设计描述正确的是()。 答：属于多点辐射城市是一个政治色彩浓厚的城市 问：企业开展目标营销的第二个步骤是（）。 答：目标市场选择 问：林肯纪念馆和华盛顿纪念馆之间的广场有两个纪念碑,分别是()。 答：朝鲜战争纪念碑越南战争纪念碑 问：（）是设计公司的产品和形象，以求在目标顾客心目中占据一个独特位置的行动。 答：市场定位 问：对于渐进式肌肉放松法，下列注意事项正确的是（）。 答：每天做2次这样的练习在一个安静的空间中进行每块肌肉群2-3次对于特别紧张的部位可以多做几次 问：如下图所示的目标市场战略是（）。 https://www.doczj.com/doc/968954204.html,/star3/375_1024/ec0ecf6b06d24eeee8ffac1ad ef37f27.png 答：无差异市场营销 问：《楚辞》的形式是在（）时期。
答：汉代 问：现今常用的古筝型号是21弦S筝。 答：对 问：（）决定了烧制陶瓷的过程中窑变的效果。 答：B 问：8ECDIS的航行监控可提供偏航报警.转向点提醒等报警或警示，一般还能进行_____以外的报警或辅助计算。 答：油耗计算 问：古琴定型于东汉时期，后经演变而来的古琴有（B）根弦。 答：7 问：《大学》认为明德专属于君主。 答：错误 问：羊毫加健毛笔对于画（）类型的画没有优势。 答：A 问：模版和母版是同一回事 答：× 问：日本歌曲《樱花》应用的是（）音阶 答：都节 问：真正实现全球覆盖的是_____系统。 (130600:第6章 EPIRB-SART设备) (A-0,B-0,C-0,D-0,错误-0) 答：COSPAS/SARSAT 问：孙成要打什么酒？（） 答：老酒
《动物微生物及免疫学》复习题 一、多选题 1.中枢免疫器官有ABD A 胸腺 B 腔上囊 C 脾脏 D 骨髓 2.中枢免疫器官的特点有ACD A 胚胎早期出现 B 胚胎晚期出现 C 控制机体免疫反应 D 能诱导淋巴细胞分化 3.抗原具有BD A 特异性 B 免疫原性 C 专一性 D 反应原性 4.抗原按性质分为AC A 完全抗原 B 自身抗原 C 不完全抗原 D 异嗜抗原 5. 全菌抗原或整个病毒粒子抗原所制备的血清为C A 多联血清 B 单价血清 C多价血清D --- 6.免疫球蛋白的种类有ABCD A IgG B IgM C IgA D IgE 7.单克隆抗体的特点ABCD A纯度高 B专一性强 C 重复性好 D能在动物体内外持续产生同质性抗体 8.抗体具有亲细胞性质，能与下列细胞结合ABC A 肥大细胞 B T细胞 C B细胞 D 神经细胞 9. 血清学反应的类型有ABCD A 凝集反应 B 沉淀反应 C 中和反应 D 补体结合反应 10.沉淀反应的类型有ABC A 电泳 B 琼脂扩散试验 C 环状沉淀试验 D ELISA 11.试管凝集的特点有ACD A 方法简单 B 特异性不强 C 可定性 D 可定量 12.常用于检测炭疽病的实验方法是B A 琼脂扩散试验 B 环状沉淀反应 C 对流免疫电泳 D 血凝试验 13.间接凝集反应的类型有AD A 乳胶凝集 B 试管凝集 C 平板凝集 D 间接血凝 14.补体结合实验中，如果最终出现溶血现象，其结果应为C A 阳性 B 不确定 C 阴性 D A或B 15.血清学反应的一般特点 AC A 特异性强 B 特异性不强 C 抗原间血缘越近交叉程度越高 D 不会出现带现象 16.免疫原性:能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞的特性 17.下列有关非特异性免疫应答说法正确的有AC A 先天的,遗传的 B 作用慢,范围窄 C 为第一线防御作用 D 有再次反应的能力,有记忆 18.干扰素的特性有AC A 可溶性蛋白 B 对热不稳定 C 对酶敏感 D 对病毒种类有特异性 19.非特异性免疫的防御屏障有BD A 血脑屏障 B 皮肤 C 胎盘屏障 D 黏膜 20.影响非特异性免疫的因素有ABCD A 遗传 B 年龄 C 环境（温度、湿度） D 动物种类 二、名词解释
《动物微生物与免疫》课程试卷B卷及答案 一、名词解释（每题2分，共20分） 1.病毒凝集单位 2.异养菌 3.变态反应 4.抗体 5.灭菌 6.拮抗作用 7.干扰素 8.免疫 9.非特异性免疫 10.细菌的呼吸 二、填空题（每空1分，共25分） 1．细菌的特殊构造包括（）、（）、（）、（）。 2．有囊膜的病毒有三类形状，即（）、（）、（）。 3．外毒素主要由革兰氏（）性菌产生，毒性较（）。 4．布氏杆菌为革兰氏（）性菌，炭疽杆菌为革兰氏（）性菌。 5.。湿热灭菌法包括（）、（）、（）、（）。 6。生物制品可分为（）、（）、（）三大类。 7.细菌摄取营养的方式包括（）（）（）（）。 8.细菌的基本形态包括（）（）（）。 三、单选题（每题1分，共10分） （说明：将认为正确答案的序号填在每小题后面的括号内）
1．距土壤表面（）厘米深处，因为有丰富的营养物质，温度适宜，氧气较足，所以微生物较 多。 A 1-5 cm B 10-20cm C 50-80cm D 100-200cm 2．合成能力较强，能以简单的无机碳化物作为碳源，合成菌体所需的复杂的有机物质，这种菌叫（）。 A 厌氧菌 B 异养菌 C 需氧菌 D 自 养菌 3.结核杆菌属于（） A 专性需氧菌 B 兼性厌氧菌 C 厌氧菌 D 专性厌氧菌 4.下列哪种微生物没有细胞结构（） A 细菌 B 病毒 C 立克次氏体 D 真菌 5.大多数细菌生长繁殖所需要的PH值为（） A 8-9 B 4-5 C7.2-7.6 D 10-11 6. 下列不属于主动运输特点的是（） A 逆浓度 B 需要载体 C 不需能量 D 选择性 强 7. 制备培养基的最常用的凝固剂为（） A琼脂B明胶 C 硅胶 D纤维素 8. 干热灭菌法要求的温度和时间为（） A 105℃,2小时B1 21℃,30分钟 C 160℃,2小时 D 160℃,4小时 9. 遗传物质只是DNA或RNA一种核酸的微生物是（） A.细菌 B.支原体 C.立克次体 D.病毒 10. 关于IV型变态反应，下列哪项是正确的（） A 有补体参与 B 属于细胞免疫反应 C 接触变应原后30分钟内发生 D 机制涉及ADCC 四、简答题：（每题5分，共25分） 1．简述柯氏染色法的基本程序。它常用于什么菌的鉴别？ 2.病毒具有哪些基本特性？ 3.免役的功能有哪些？
疫苗佐剂综述 近三十年来，人用疫苗佐剂发展迅速，已经研发出了能诱发更强，更持久的人用疫苗佐剂。但是还存在一些不足之处，理想的疫苗佐剂应该更适于临床应用，毒副作用更小。本文总结了当前疫苗佐剂的发展状况，其中包括疫苗佐剂的监管建议，理想佐剂的标准，以及详细介绍了诸如矿物盐类佐剂，毒素类佐剂，微生物衍生物类佐剂，油乳剂，细胞因子佐剂，多糖类佐剂，以及核酸佐剂。同时本文还讨论了最近新发现的Toll样受体的生物学作用以及在免疫激活中发挥的作用。 关键词：疫苗；佐剂；Toll样受体； 1 引言 免疫接种的目的就是要获得对疾病持久的免疫保护反应。与弱毒疫苗不同，灭活疫苗或亚单位疫苗通需要疫苗佐剂的参与才能更好的发挥作用【1】。“佐剂”一次来自于拉丁语“Adjuvare”一词，为“帮助”或“辅助”之意【2】。免疫佐剂的生物作用包括：（1）抗原物质混合佐剂注入机体后，改变了抗原的物理性状，可使抗原物质缓慢地释放，延长了抗原的作用时间；（2）佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表面积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬；（3）佐剂能刺激吞噬细胞对抗原的处理；（4）佐剂可促进淋巴细胞之间的接触，增强辅助T细胞的作用；（5）可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体。故免疫佐剂的作用可使无免疫原性物质变成有效的免疫原；（6）可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴变；（7）改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应，并使其增强。人们正是因为观察到疫苗接种位点处形成的脓肿协助机体产生了针对特异性抗原更强的免疫反应，从而形成了疫苗佐剂的理念。更有甚，与接种抗原不相关的物质形成的脓肿坏死也能增强疫苗的特异性免疫反应【3,4】。 1926年，通过吸附于铝盐类化合物的白喉类毒素首次证明了铝盐类佐剂的免疫增强作用。至今，铝盐类佐剂（主要指氢氧化铝和磷酸铝）依然是唯一人用疫苗佐剂。其原因是什么呢？尽管大量事实证明，弗氏完全佐剂和脂多糖类佐剂具有更强的佐剂活性，但由于其能引发局部和全身性的毒副作用而不适于人用。这也正是铝盐类佐剂作为人用疫苗佐剂80余年的原因所在。在今后的80年中，铝盐是否依然是人用的唯一疫苗佐剂？答案是肯定的。自批准铝盐作为人用疫苗佐剂以后，管理部门对人用疫苗佐剂的要求提高了很多。而且，用于评价疫苗佐剂安全性的后期临床试验花费日益昂贵。一旦通过200至500人安全性和效用性实验后，在疫苗佐剂审批注册之前还需要进行5000至25000人数的临床试验。正因为如此，在接下来的10至20年之间，几乎没有哪种佐剂能通过疫苗佐剂审批。 2 理想的疫苗佐剂 免疫接种时需要考虑以下几点：抗原种类，接种动物种类，免疫途径，以及可能产生的免疫副作用【10,11】。理想的佐剂半衰期长，生物体内可以降解，生产成本低，能诱导产生合适的免疫反应（也就是根据感染病原的不
动物微生物检验及免疫检测技术 牧医1302李光明 微生物概念 及分类 微生物是广泛存在于自然界中的一群肉眼看不见的 必须借助光学显微镜观察或电子显微镜才能观察到的微小生物总称 分 类 形态 球形菌 杆菌 螺旋菌 基本结构 细胞壁 细胞膜 细胞质 核质（核区） 细胞质 特殊结构 荚膜（ 抵抗吞噬 增强侵袭力 提供营养 水分 用于鉴定 具有抗原性） 鞭毛 （运动）牙孢（抵抗外界不良环境的休眠体）菌毛的作用 普通菌毛粘附力 性菌毛 传递质粒 耐药性有关 革兰氏染色把细菌分为革兰氏阳性（蓝紫色）阴性（红色） 病毒概念 及 特点 寄生于活细胞内的非细胞型微生物 形态微小 能通过细菌滤器 需借助电子显微镜观察 只有一种核酸(DNA 或RNA) 只能寄生于活细胞内 繁殖方式复制 对抗生素不敏感 对干扰素敏感 单位nm 纳米 光学显微镜 10乘以100能看清细菌 细菌单位微米μm 光学 真菌400倍 免疫概念 是机体识别 自身 于非自身物质 消灭非自身物质的一种生理机能 免疫的功能 （基本生理机能） 1抵抗感染2免疫监视 3自身稳定 中枢免疫器官 免疫细胞分化成熟的场所 B 细胞 骨髓中分化成熟 T 骨髓 或法氏囊 （禽 免疫活性细胞包括 T 淋巴细胞 B 淋巴细胞 完全抗原 同时具有免疫原性 和反应原性的 物质称完全抗原 抗原构成的条件 1异源性((异物性) ①异种物质②同种异体物质③自身组织 2分子大小 3化学组成和成分结构的复杂性 \ 4抗原的物理状态 抗原的特异性由决定簇决定
抗体概念 抗体是有抗原进入机体后刺激B细胞分化增殖为浆细胞进而合成并分泌的一类能与相应抗原发生特异性结和并产生免疫效应的免疫球蛋白 根据免疫球蛋白的化学结构及其抗原性差异可分为 免疫应答过程 识别阶段 抗原进入机体后被巨噬细胞吞噬加工处理呈递给T 细胞 B细胞 反应阶段 T胞活化增殖一小部分分化为t记忆细胞绝大部分分化为致敏T 细胞最终产生直接杀伤性细胞和淋巴因子 B细胞活化增殖一小部分化为B细胞绝大部分分化为浆细胞最终产生抗体 效应阶段 直接杀伤性细胞在淋巴因子帮助下杀灭抗原 抗体和抗原结婚激活K NK 细胞（或补体）消灭 血清学实验概念 抗原和与相应的抗体无论在体内还是体外均能发生特异性结合反应并表现出特定的现象 人工主动免疫注射疫苗 细菌吸收营养物质的方式 被动扩散 促进扩散
动物实验的基本操作技术 实验动物 实验动物(experimental animals)是指经过人工饲养、繁育，对其携带的微生物及寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，应用于科研、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。这些个体具有较好的遗传均一性、对外来刺激的敏感性和实验再现性。 一、常用实验动物的种类和特点 （一）狗(dog)属于哺乳纲、食肉目、犬科动物。其嗅觉、视和听觉均很灵敏，对外界环境的适应能力强。消化、循环和神经系统均发达，且与人类很相似。适用于各类实验外科手术学的教学和临床科研工作，是复制休克、DIC、动脉粥样硬化等动物模型首选的动物之一，由于其价格较昂贵，教学实验中不如某些中小动物常用。 （二）家兔(rabbit) 属于哺乳纲、啮齿目、兔科、草食类动物。品种有：青紫蓝兔（livor blue rabbit）、中国白兔（china white rabbit）、新西兰白兔和大耳白兔（maximus ear white rabbit）等。具有性情温顺，对温度适应敏锐和便于静脉注射等特点，是教学实验中最常用的动物之一。可用于血压、呼吸、泌尿等多种实验，还可用于体温实验和热原的研究与鉴定。 （三）大白鼠(rat) 属哺乳纲、啮齿目、鼠科类动物。其性情凶猛、喜欢啃咬、繁殖周期短、抗病能力较强、心血管反应敏锐。用于水肿、休克、炎症、心功能不全、肾功能不全和应激反应等实验。大鼠不能呕吐，故不能做催吐实验。 （四）小白鼠(mouse) 属哺乳纲、啮齿目、鼠科类动物。具有繁殖周期短、产仔多、生长快、体型小、温顺易捉、易于饲养等特点。广泛应用于各种药物的毒理实验、药物筛选实验、生物药效学实验，以及癌症研究、营养学、遗传学、免疫性疾病研究等项实验。 （五）豚鼠(cavy) 属哺乳纲、啮齿目、豚鼠科类动物。又名天丝鼠、荷兰猪。其性情温顺，嗅觉和听觉较发达。对某些病毒反应敏锐，易引起变态反应。适用于药理学、营养学、各种传染病的实验研究。细菌、病毒诊断学研究、过敏、变态反应性实验研究和内耳及听神经疾病研究。也常用于离体心脏实验研究。 （六）蛙和蟾蜍(frog and toad ) 均属两栖纲、无尾目类动物。常用于教学实验。其心脏在离体后仍可有节律地跳动。常用于心脏生理、药理和病生实验。蛙舌与肠系膜是观察炎症和微循环变化的良好标本。此外，蛙类还可用于水肿和肾功能不全的实验研究。 二、常用实验动物的品系
动物微生物与免疫试题 （参考答案） 一、名词解释 1. 细菌L型 答：L型细菌细胞壁缺损，但在一定的条件下仍能够生长和分裂者称为细菌L型。 2. 消毒 答：杀死物体上的病原微生物，但不一定杀死全部微生物的方法。 3 类毒素 答：外毒素在0.4%的甲醛溶液作用下，经过一段时间可以脱毒，但仍保留原有的抗原性，称为类毒素。 4. 芽孢 答：某些细菌在一定环境条件下，能在菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，称为内芽胞或芽胞。 5. 菌落 答：单个细菌繁殖成一堆肉眼可见的细菌集落，称为菌落。 6. 鉴别培养基 答：利用各种细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物，观察细菌在其生长后分解底物的作用如何，从而鉴别细菌。 7. 炭疽杆菌“串珠反应” 答：在含有0.5IU/ml的培养基中，幼龄炭疽杆菌因细胞壁的肽聚糖合成受到抑制，形成原生质体相互连接成串，称为“串珠反应”。 二、填空
1. 细菌按其外形分为__________ 、__________ 和 __________ 三种类型及某些其他形态。 球菌，杆菌，螺菌 2. 细菌细胞的基本结构包括________ 、________ 、 ________ 、________ 和________ 。 细胞壁，细胞膜，细胞质，染色质，核糖体 3. 用于消毒灭菌的物理因素有________ 、________ 、 ________ 和________ 等。 温度，辐射，干燥，滤过 4. 细菌培养基按其营养组成和用途不同可以分为________ 、________ 、________ 、________ 、________等。 基础培养基，增菌培养基，选择性培养基，鉴别培养基，厌氧培养基 5 细菌细胞除了与其生命活动密切相关的基本结构外，某些细菌还具有________ 、________ 、________ 、________ 等特殊的功能结构。 荚膜，菌毛，芽胞，质粒 6. 病毒按其核酸类型分为____________ 和____________ 两大类。 DNA病毒，RNA病毒 三、选择题（单选或多选） 1. 广义的细菌包括下列那些微生物？A、B、C、D、E。 A、细菌 B、衣原体 C、支原体 D、螺旋体 E、立克次体 2. 细菌的基本结构包括：ACDE A、细胞壁 B、荚膜 C、细胞膜 D、细胞质 E、核质
动物实验基本操作一（固定、性别判定、标识） 【实验目的】在做动物试验时，为确保给药、实验顺利进行，防止被动物咬伤、准确辨别动物性别、准确标识动物，要学会用正确方法捉拿实验动物、掌握辨别动物性别的方法以及掌握标识动物的方法。 【实验对象】SD大鼠，KM小鼠，雌雄各半，体重180-250g。 【实验器材和药品】 器材：鼠笼、大小鼠固定器、方木板、美式图钉、细绳、防护手套 药品：苦味酸80%~90%酒精饱和溶液、20%乌拉坦 【实验步骤】 一、小鼠的捉拿 1、徒手固定：用右手提起尾巴中部，放在鼠笼盖或其他粗糙面上。向后上方轻拉，此时，小鼠前肢紧紧抓住粗糙表面。左手拇指和食指迅速捏住小鼠颈背部皮肤，再置小鼠于左手心，并以左手掌心和中指夹住小鼠背部皮肤，无名指压住小鼠尾根部，将其固定于手中。右手可行注射或其它操作。 2、固定器固定：尾静脉注射或给药时，将小鼠放进固定器中或者大小和重量适当的容器（如烧杯），只露出尾巴，该类容器能够压住尾部，避免其活动。勿固定过紧造成窒息死亡。进行腹腔手术或心脏采血时，先准备一个15-20cm的方木板，边缘钉入五颗钉子。将小鼠四肢分别用20-30cm的线绳捆绑，线的另一头分别绑在方木板的钉子上，并且在头部上颚切齿牵引一根线绳，也固定在钉子上，达到完全固定。 二、大鼠的捉拿
4-5周内的大鼠，方法同小鼠。周龄较大的，则：1、首先戴好防护手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上。3、左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取保定。三、性别判定 小鼠、大鼠性别判定 （1）幼鼠外生殖器与肛门间隔短的是♀，外生殖器与肛门间隔长的是♂。 （2）成年动物可直接肉眼辨认，雄性有膨起的阴囊和阴茎，雌性动物有阴道口。四、动物的标记 小鼠的短期标记法：苦味酸80%~90%酒精饱和溶液（黄色），标出属于自己的编号【注意事项】 1、实验人员要有精神准备：掌握方法，胆大心细，做好防护。 2、动物兴奋的时候不要抓取，待其安静下来。 3、根据受试动物的给药部位或采血方法的不同，事先选择徒手固定还是固定器固定。 4、固定时把握好力度，过分用力会使小鼠颈椎脱臼或窒息死亡，若用力过轻头部能反转过来咬伤实验者的手。 【思考题】 1.在固定实验动物时如何才能快、准、稳？
四川农业大学 动物微生物及免疫学（实践教学） 实验报告 组长：********** 组员：********** 二零一二年四月
一、实验目的 （一）掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，熟悉一般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。 （二）掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法和革兰氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。（三）掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。 二、实验用品 （一）器材 量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平 皿、刻度吸管、pH试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎 绳、放大镜、包装纸、洗耳球、酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪 刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培 养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜 （二）试剂及材料 肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、0.01%结晶紫水溶液、 0.5%中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐 酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏 三、实验步骤 （一）培养基的制备 （所有用到的器皿都已121℃高压灭菌15~30min，倾注平板在无菌操作台内完成，并放在无菌操作台内） 1、麦康凯培养基 （1）组成：蛋白胨17g、肘胨3g、猪胆盐5g、氯化钠5g、琼脂17g、乳糖10g、0.01%结晶紫水溶液10ml、0.5%中性红水溶液5ml、蒸馏水1000ml
（2）方法：将蛋白胨、肘胨、猪胆盐和氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，调节pH至7.2。将琼脂加入600ml蒸馏水中，并加入乳糖，加热熔化。将两 液混合，分装于烧瓶内，用纱布、扎绳等捆好后，121℃高压灭菌 15~30min。待冷却至50 ~ 55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。 注：结晶紫和中性红水溶液配好后需经高压灭菌。 2、血清平板 （1）组成：营养琼脂、牛血清 （2）方法：将灭菌的营养琼脂加热熔化，冷却至45~50℃时，加入牛血清，并混匀，倾注平板。 注：不得将牛血清一并加入后再灭菌。 3、LB培养基 （1）组成：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、琼脂15g （2）方法：在950ml蒸馏水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、琼脂和氯化钠，调节pH至7.4，加热熔化，分装于瓶中，用纱布、扎绳等捆好后，121℃高压灭菌15~30min。待冷却至50 ~ 55℃时，倾注平板。 4、液体培养基（在LB培养基的基础上，装入大试剂瓶中，不加琼脂，不分 装） （二）病料取材 在病猪死亡后，首先用显微镜检查其末梢血液膜片中是否有炭疽杆菌存 在，未发现，则立即用消毒的器械对其进行生理解剖，观察其病理特征 现象，取出病猪的十二指肠、胃、肝脏三处的组织物，并注意组织的完 整性，用储物袋密封保存。 （三）细菌粗培养
动物微生物及免疫学本科复习题及答案 一、多选题 1.中枢免疫器官有ABD A 胸腺 B 腔上囊 C 脾脏 D 骨髓 2.中枢免疫器官的特点有ACD A 胚胎早期出现 B 胚胎晚期出现 C 控制机体免疫反应 D 能诱导淋巴细胞分化 3.抗原具有BD A 特异性 B 免疫原性 C 专一性 D 反应原性 4.抗原按性质分为AC A 完全抗原 B 自身抗原 C 不完全抗原 D 异嗜抗原 5. 全菌抗原或整个病毒粒子抗原所制备的血清为C A 多联血清 B 单价血清C多价血清D --- 6.免疫球蛋白的种类有ABCD A IgG B IgM C IgA D IgE 7.单克隆抗体的特点ABCD A纯度高B专一性强C 重复性好D能在动物体内外持续产生同质性抗体 8.抗体具有亲细胞性质，能与下列细胞结合ABC A 肥大细胞 B T细胞 C B细胞 D 神经细胞 9. 血清学反应的类型有ABCD A 凝集反应 B 沉淀反应 C 中和反应 D 补体结合反应 10.沉淀反应的类型有ABC A 电泳 B 琼脂扩散试验 C 环状沉淀试验 D ELISA 11.试管凝集的特点有ACD A 方法简单 B 特异性不强 C 可定性 D 可定量 12.常用于检测炭疽病的实验方法是B A 琼脂扩散试验 B 环状沉淀反应 C 对流免疫电泳 D 血凝试验 13.间接凝集反应的类型有AD A 乳胶凝集 B 试管凝集 C 平板凝集 D 间接血凝 14.补体结合实验中，如果最终出现溶血现象，其结果应为C A 阳性 B 不确定 C 阴性 D A或B 15.血清学反应的一般特点AC A 特异性强 B 特异性不强 C 抗原间血缘越近交叉程度越高 D 不会出现带现象 16.免疫原性:能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞的特性 17.下列有关非特异性免疫应答说法正确的有AC A 先天的,遗传的 B 作用慢,范围窄 C 为第一线防御作用 D 有再次反应的能力,有记忆 18.干扰素的特性有AC A 可溶性蛋白 B 对热不稳定 C 对酶敏感 D 对病毒种类有特异性 19.非特异性免疫的防御屏障有BD A 血脑屏障 B 皮肤 C 胎盘屏障 D 黏膜 20.影响非特异性免疫的因素有ABCD A 遗传 B 年龄 C 环境（温度、湿度） D 动物种类 二、名词解释 1. 凝集反应：抗体与颗粒性抗原（细菌）反应(1.5分)所出现的肉眼可见的凝集现象表现出来的凝集反应(1.5分) 2. 沉淀反应:抗体与可溶性抗原反应所出现的肉眼可见的沉淀带(2分)，一般可在琼脂板上进行。(1分) 3. ELISA:标记抗体仍具有与抗原结合的能力(1分)，当结合有酶的免疫复合物遇到相应的底物时即可催化底物显色(1分)，根据底物显色的深浅进行测定(1分)。 4. 抗原:凡能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞(1.5分)，并能与之结合引起特异性反应的物质称为抗原(1.5分) 5. 抗原决定簇:在空间位置上的一些化学机团(1.5分)，即同抗体结合的部位(1.5分)
实验动物手术基本操作技术 1. 动物实验手术常用的器械或设备 手术刀:准备不同型号的手术刀和手术刀柄。用于切开皮肤和脏器。 外科剪:准备直剪和弯剪。用于软组织剪断和组织分离。 手术镊:准备有齿镊和无齿镊。用于挟持皮肤、筋膜、肌腱等较坚硬组织或血管、神经、黏膜等脆弱组织。 止血钳:准备直、弯、蚊三种。用于夹住浅层血管止血或分离组织、牵引缝线等,或者夹住深部组织或内脏的血管出血点或者用于精细的止血和组织分离。 注射器:准备不同容量的注射器。用于补充麻醉或药物注射。 持针钳:用于缝合致密组织或深部组织。 缝合针:准备不同长短、粗细、弯度、针尖圆形或菱形的缝合针。 用于缝合不同的组织。 缝合线:准备丝线、肠线、金属线等不同种类缝合线。用于不同组织的缝合。 医用监护仪:准备呼吸、心跳、脉搏、血压及温度等医用监护仪。用于手术的操作监护。 医用气体:准备氧气、压缩空气、二氧化碳等医用气体。用于动物实验手术的应急需要。 2.动物实验手术器械的消毒方法 消毒对于防止手术伤口感染和保证伤口愈合极为重要,可以减少手术并发症和提高手术愈合效果,主要包括手术环境和手术器械的消毒。其中手术器械的消毒方法如下。 煮沸法:该法适合于金属、玻璃器械、缝合材料或橡皮手套等的灭菌,一般煮沸时间为20～30min。注意金属器械应在沸水时放入以防生锈,玻璃器械应在冷水时放入以防爆炸。 高压蒸汽灭菌法:该法适合于布类、敷料、手术衣帽及器械的灭菌, 灭菌条件为121OC、15min 。注意敷料包装应松紧适宜,待冷却后取出。 化学药品消毒法:主要的化学消毒液灭菌流程有三合液(甲醛2Oml+碳酸钠15g+石碳酸3g+蒸馏水100Oml)浸泡30min;新洁尔灭溶液(0.1%新洁尔灭100Oml+亚硝酸钠5g)浸泡1h;酒精溶液(70%酒精)浸泡1h;来苏水溶液(3～5%)浸泡1h；石炭酸(3%)浸泡1h;福尔马林(2%主要用于缝合线的消毒)浸泡30min;酒精溶液(75%主要用于缝合线的消毒)浸泡30min。 3.动物手术部位的消毒 实验动物手术部位处理一般包括除毛、皮肤消毒、手术部位隔离三个步骤。消毒顺序为:除毛→2%来苏水洗刷手术部位皮肤及周围皮肤→灭菌纱布擦干→70%酒精脱脂→5%碘酊擦抹→75%酒精脱碘→手术部位隔离→手术。 4. 手术人员手臂的消毒
常用实验动物的实验基本操作技术 第一节常用实验动物的生物学特征 1．蛙（或蟾蜍）的生物学特点是什么？主要用于哪些实验？ 属于两栖变温动物，皮肤光滑湿润，有腺体无外鳞。蛙的心脏有两个心房，一个心室，心房与心室区分不明显，动静脉血液混合，有冬眠习性。生存环境比哺乳动物简单，在机能学实验中有多种实验选择该动物。如：①离体蛙心实验，常用来研究心脏的生理功能及药物对心脏活动的影响。②蛙的腓肠肌和坐骨神经可用于观察外周神经及其肌肉的功能，以及药物对周围神经、骨骼肌或神经肌肉接头的影响。③缝匠肌可用于记录终板电位。脊休克、脊髓反射、反射弧分析、肠系膜微循环等。在临床检验中，可用雄蛙作妊娠反应实验。 2．小白鼠的生物学特征是什么？主要用于哪些实验？ 小白鼠性情温顺，易于捕捉，胆小怕惊，对外来刺激敏感。它胃容量小，不耐饥渴，随时采食。在机能学实验中常选用该动物。故适用于大量的实验动物，如：某些药物的筛选实验、半数致死量（LD50）测定、药效比较、毒性实验、妊娠期20天左右，常用于避孕药实验及抗癌药实验。 3．大白鼠的生物学特征是什么？主要用于哪些实验？ 大白鼠性情温顺，行动迟缓，易于捕捉，但受惊吓或粗暴操作时，会紧张不安甚至攻击人。大鼠嗅觉发达，对外界刺激敏感，抵抗力较强。大鼠无胆囊，肾单位表浅，肝再生能力强。大鼠的血压反应比兔稳定，可用它作血压实验，也可用于慢性实验、抗炎、降脂、利胆、子宫实验及心血管系统的实验。药典规定该动物为催产素效价测定及药品指控中升压物质检查指定动物。 4．豚鼠生物学特征是什么？主要用于哪些实验？ 豚鼠性情温和，胆小，饲养管理方便，可群养。豚鼠耳蜗管发达，听觉灵敏，存在可见的普赖厄反射（听觉耳动反射），乳突部骨质薄弱。豚鼠对组织胺、人型结核杆菌很敏感。能耐受腹腔手术，使用于肾上腺机能的研究。其自身不能制造维生素C，是研究实验性坏血症的唯一动物。 5．家兔生物学特征是什么？主要用于哪些实验？ 家兔属于草食性动物，性情温顺但群居性差，听觉、嗅觉十分灵敏，胆小易惊，具夜行
实验三实验动物基本操作技术 学习目标 ●熟悉大鼠、小鼠及家兔的捉拿与固定；熟悉小鼠腹腔注射、家兔耳 缘静脉注射的方法与技术；熟悉动物的编号方法。 ●了解其他动物实验技术。 大多数药理实验是以动物为实验对象的，常用实验动物有青蛙与蟾蜍，小白鼠，大白鼠，豚鼠，家兔，猫，狗等，实验前了解其特点，掌握常用的动物实验基本操作技术，有利于学生动手能力的培养。本节重点介绍青蛙与蟾蜍，小白鼠，大白鼠，豚鼠，家兔的实验基本操作技术。 一、实验动物的编号 为了分组和辨别的方便，实验时常需对实验动物进行编号。常用的编号方法如下： 1．染料标记法 （1）常用染料：红色染料：5％中性红或品红液；黄色染料：3％～5％苦味酸溶液；咖啡色染料：2％硝酸银溶液；黑色染料：煤焦油的酒精溶液。 （2）标记规则：根据实验动物被毛颜色的不同选择不同化学药品涂染动物。 A.家兔等动物的标记方法：一般用毛笔蘸取不同颜色的染料溶液直接在动物背部涂写。若用硝酸银溶液涂写，则需在日光下暴露1min。 B.大鼠、小鼠的标记方法：通常在动物不同部位涂上有色斑点来表示不同的。如需要对数只实验动物编号，将小白鼠背部划分为前肢、腰部、后肢的左、中、
右部九个区域，从右到左标记。 2．穿耳打孔法用专门的打孔器在动物耳朵的不同部位打孔表示。 3．挂牌编号法此法常用于狗、猴、猫等大动物的编号。将牌固定于动物的颈圈或耳上。 4．人工针刺法先将动物被毛去除，用针在动物皮肤上刺出，再用酒精墨汁涂染即可。 二、实验动物的捉拿与固定方法 1．蛙和蟾蜍用左手握住动物，以食指按压其头部前端，拇指按压背部。 2．小白鼠捉拿法有二种，一种是用右手提起尾部，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，向后上方轻拉，此时小鼠前肢紧紧抓住粗糙面，迅速用左手拇指和食指捏住小鼠颈背部皮肤并用小指和手掌尺侧夹持其尾根部固定手中；另一种抓法是只用左手，先用拇指和食指抓住小鼠尾部，再用手掌尺侧及小指夹住尾根，然后用拇指及食指捏住其颈部皮肤。 3．大白鼠捉拿时，右手抓住鼠尾基部（因抓尾尖动物会扭动易使其尾部的皮肤脱落，影响实验的进行）将大鼠放在粗糙面上，左手戴上防护手套或用厚布盖住大鼠，抓住其整个身体并固定其头部以防咬伤。捉拿时勿用力过猛，勿捏其颈部，以免引起窒息。 4．豚鼠捉拿时以拇指和中指从豚鼠背部绕到腋下抓住豚鼠，另一只手托住其臀部。体重小者可用一只手捉拿，体重大者捉拿时宜用双手。
1. 微生物：指存在于自然界中一类形体微小、结构简单、繁殖快、分布广、种类多、数量大、肉眼看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大后才能看到的微小生物。 2. 3. 细菌：是一类具有细胞壁的单细胞原核微生物。 4. 5. 荚膜：某些细菌能分泌黏液状物质包围于细胞壁外，形成一层和菌体界限分明、不易着色的透明圈。主要由多糖组成，少数细菌为多肽。其主要的功能是抗吞噬作用，并具有抗原性。 6. 7. 鞭毛：是从细菌细胞膜伸出于菌体外的细长弯曲的蛋白丝状物，是细菌的运动器官，见于革兰阴性菌、弧菌和螺菌。 8. 9. 菌素：某些细菌能产生一种仅作用于近缘关系细菌的抗生素样物质，其抗菌范围很窄。 10. 11. 纯培养：对单纯的一种细菌进行的培养，多由平板上单个菌落分离出来。 12. 13. S-R 变异 : 是指细菌菌落有光滑型到粗糙型的变异，它是由细菌在人工培养基中多次传代，其脂多糖失去 O 特异性侧链或 O 侧链与核心多糖粘附，仍保有非特异性核心多糖结构造成。此变异出现时，表示细菌毒力、抗原性等也同时发生变异。 14. 15.
生长曲线：在培养基中以培养的时间为横坐标，以细菌增长对数为纵坐标得出的曲线。 16. 17. 防腐：防止、抑制体外细菌生长繁殖方法，细菌一般不死亡。如食品中的化学添加剂。 18. 19. 无菌操作：指防止微生物进入人体或其它物品的操作方法。医疗中的手术、介入治疗 20. 21. 毒力：是指病原微生物的不同菌株或毒株的不同的致病能力。 22. 23. 半数致死量：在一定时间内能使半数动物于感染后发生死亡所用的活微生物量或毒素量。 24. 25. 外源性感染/ 交叉感染：是指动物遭受非自身存在的各种病原体侵袭而发生的感染。包括从病畜或带菌者到外界环境及饲养工作人员带入的感染。 26. 27. 隐性传染：机体有抑制病原微生物的作用，进入机体的病原微生物不造成机体明显素损害，这种无症状的传染称之。 28. 29. 类毒素：是外毒素经0.4%的甲醛溶液在37℃下处理一定时间，使其脱毒，并保持很强的抗原性而制成。 30. 31.
微生物：指存在于自然界中一类形体微小、结构简单、繁殖快、分布广、种类多、数量大、肉眼看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大后才能看到的微小生物。 细菌：是一类具有细胞壁的单细胞原核微生物。 荚膜：某些细菌能分泌黏液状物质包围于细胞壁外，形成一层和菌体界限分明、不易着色的透明圈。主要由多糖组成，少数细菌为多肽。其主要的功能是抗吞噬作用，并具有抗原性。 鞭毛：是从细菌细胞膜伸出于菌体外的细长弯曲的蛋白丝状物，是细菌的运动器官，见于革兰阴性菌、弧菌和螺菌。 菌素：某些细菌能产生一种仅作用于近缘关系细菌的抗生素样物质，其抗菌范围很窄。 纯培养：对单纯的一种细菌进行的培养，多由平板上单个菌落分离出来。 S-R 变异 : 是指细菌菌落有光滑型到粗糙型的变异，它是由细菌在人工培养基中多次传代，其脂多糖失去 O 特异性侧链或 O 侧链与核心多糖粘附，仍保有非特异性核心多糖结构造成。此变异出现时，表示细菌毒力、抗原性等也同时发生变异。 生长曲线：在培养基中以培养的时间为横坐标，以细菌增长对数为纵坐标得出的曲线。
防腐：防止、抑制体外细菌生长繁殖方法，细菌一般不死亡。如食品中的化学添加剂。 无菌操作：指防止微生物进入人体或其它物品的操作方法。医疗中的手术、介入治疗 毒力：是指病原微生物的不同菌株或毒株的不同的致病能力。 半数致死量：在一定时间内能使半数动物于感染后发生死亡所用的活微生物量或毒素量。 外源性感染 / 交叉感染：是指动物遭受非自身存在的各种病原体侵袭而发生的感染。包括从病畜或带菌者到外界环境及饲养工作人员带入的感染。 隐性传染：机体有抑制病原微生物的作用，进入机体的病原微生物不造成机体明显素损害，这种无症状的传染称之。 类毒素：是外毒素经0.4%的甲醛溶液在37℃下处理一定时间，使其脱毒，并保持很强的抗原性而制成。 厌氧性细菌：是一类必须在无氧或氧化还原电势低的环境中才能生长的细菌。 垂直传播（vertical transmission）：病毒通过胎盘或产道直接由亲代传给子代的传播方式。 免疫：是指机体对外源性或内源性的异物进行识别、排斥和清除的过程，即"识别异己”和"排斥异己”的反应，以维持机体内外环境相对平衡和稳定。
动物微生物与免疫学课程试卷 A 一．名词解释（每题2分，共20分） 1．CPE：细胞病变就是某些病毒接种培养的单层细胞后导致的细 胞损伤。 2．外毒素：细菌在生长过程中产生的分泌到外围环境中的物质。 3．半抗原：具有反应原性而无免疫原性。 4．超敏感反应：指曾经接触过Ag的动物，当再次接触相同Ag 时，可发生对机体有损伤作用的异常的免疫反应。 5．Inclusion body：包涵体，指某些病毒感染动物后，在细胞 内出现有染色反应的斑块，用光学显微镜可检查。 6. 灭菌：杀死特定环境中所有的微生物，包括芽胞和孢子，灭 菌的方法多采用物理法。 7．SPF动物: 无特殊病原菌动物动物,在无菌动物基础上建立的，在胎儿取出和育成的最初阶段与GF动物相同，以后喂 普通的配合饲料，仅是建立起无某一特定病原菌动物用 于育种，畜群的净化，制作免疫预苗和诊断液。 8．单克隆抗体：指由克隆化的杂交瘤细胞产生的具有针对单一 抗原决定簇的同质性抗体。 9．正常菌群：集聚在动物体与外界相能部位，正常情况下对机 体无害而有益(相互作用相互依赖，相互制约，其组成 和数量都处于不断变化的动态平衡之中的一组细菌。在
一定条件下正常菌群也可能致病。 10.ADCC作用：依赖抗体的细胞介导的细胞毒性作用NK细胞和 巨噬细胞通过其Fc受体（如CD16）间接识别并杀伤 被抗体包被靶细胞的过程。 二．判断题（每题1分，共10分。对“√”，错“×”） 1．能利用无机碳和无机氮化物合成菌体的细菌为自养菌（√） 2．健康动物肠道的主要常在菌是革兰氏阳性球菌（×） 3．破伤风梭菌产生内毒素可以引起肌肉强直。（×） 4．病毒对抗生素有不同程度的敏感。（×） 5．大肠杆菌在麦康凯培养基上发酵乳糖，菌落为红色。（√） 6．抗体分子的抗原结合部位存在于FC端（×） 7. 炭疽杆菌病料涂片，瑞特氏染色可见带竹节状芽胞的菌体（√） 8.是疫（菌）苗都必须在低温下冻结保存（√） 9. 细菌内毒素是外毒素经甲醛灭活后制成的（×） 10. 切除雏鸡的法氏囊将影响雏鸡的细胞免疫（×） 三．选择题：（每题1分，共15分，在所选项前打“√”）1．使用牛痘苗预防天花的第一位医生是 A a．琴纳(Jenner) b．巴斯德(Pasteur) c．郭霍(Koch) d．伯纳特(Burnet) 2．无胸腺的胎儿可出现 C a．细胞免疫、体液免疫均缺陷b．细胞免疫、体掖免疫均正 常 c．细胞免疫缺陷、体液免痊正常d．细胞免疫正常、体液
试题一 一、名词解释（每题3分，共30分） 1、动物微生物学 2、培养基 3、革兰氏染色 4、灭菌 5、传染 6、热原质 7、抗毒素 8、抗原 9、天然自动免疫 10、变态反应 二、填空题（每题3分，共30分） 1、凡、、、、的生物称为微生物。 2、微生物的共同特点是、、、、、。 3、微生物的种类包括、、、、、、、等八大类。 4、细菌的生长繁殖需要、、、、条件。 5、高压蒸气灭菌通常用压力，温度达0C维持分钟，可以杀死全部细菌及其芽孢。 6、常见的微生物变异现象有、、、。 7、构成抗原的条件是、、、。 8、构成微生物侵袭力的因素有、、、。 9、机体的中枢免疫器官包括、、、外周免疫器官包括、，免疫活性细胞包括、。 10、免疫学在定践中的用途包括、、。 三、判断题（10分） 1、细菌的呼吸就是将营养物质分解，从中取得解量。（） 2、大部分病原菌属于异养菌营养类型。（） 3、病毒是专性细胞内寄生菌。（） 4、放线菌是介于细菌和真菌之间的一类微生物。（）
5、胸腺依赖淋巴细胞简称B细胞。（） 6、免疫对机体都是有利的（） 7、真菌对人没有任何有益之处。（） 8、传染和免疫互不相关（） 9、人工自动免疫就是自然感染了某种传染病痊愈后所产生的免疫。（） 10、噬菌体是寄生在细菌细胞内的病毒。（） 四、问答题（每题10分，共30分） 1、细菌的基本构造有哪些？各有什么功能？ 2、影响机休产生抗体的因素有哪些？ 3、简述机体的免疫反应过程？ 试题二 一、填空（每题3分，共30分） 1、凡、、、、的生物称为微生物。 2、微生物与人类的关系是、、、、。 3、细菌可分为、、、、四种呼吸类型。 4、细菌的合成产物有、、、、、、、。 5、高压蒸气灭菌通常用压力，温度达0C维持分钟，可以杀死全部细菌及其芽孢。 6、常用的消毒剂有、、、、、、、、、等十大类。 7、病毒的复制，可分为、、、四个时期。 8、病原微生物引起传染的必要条件有、、、。 9、机体的中枢免疫器官包括、、、外周免疫器官包括、，免疫活性细胞包括、。 10、免疫学在兽医实践中的应用包括、、。 二、名词解释（每题3分，共30分） 1、动物微生物学 2、革兰氏染色 3、消毒 4、培养基
动物实验的基本知识和操作技术
第二章动物实验的基本知识和操作技术 第一节实验动物 药理学实验常用的动物有蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猫和犬等。常根据实验目的和要求选用不同的实验动物。由于不同的动物具有不同的特点，故所选用的动物应能较好地反映试验药物的选择性作用，并符合节约的原则。 （一）、实验动物的选择原则 1、尽量选择与人体结构、机能、代谢及疾病特征相似的动物； 2、选用的实验动物的解剖、生理特点应符合实验目的； 3、根据人与实验动物对同一刺激的反应差异，选用具有明显反应的动物； 4、根据生物医学研究必须达到的精确度，选用结构功能简单又能反映研究指标的动物； 5、选用患有人类类似疾病的近交系或突变系动物； 6、选用与实验设计、技术条件、实验方法等相适应的标准化动物； 7、在不影响实验目的与结果的前提下，选择最易获得、最经济、便于操作管理的动物； 8、供实验用的动物应具备质量合格证。 （二）、常用实验动物的特点 1、蛙和蟾蜍
离体心脏能较持久地有节律地搏动，常用于观察药物对心脏的作用；坐骨神经和腓肠肌标本可用来观察药物对周围神经、神经肌肉或横纹肌的作用；蛙的腹直肌还可以用于鉴定胆碱能药物的作用。 2、小白鼠 是实验室最常用的一种动物。易于大量繁殖，且价廉，适用需要大量动物的实验，如药物筛选、半数致死量测定、药物效价比较、抗感染、抗肿瘤药物及避孕药物的研究等。 3、大白鼠 与小白鼠相似。一些在小白鼠身上不便进行的实验可选用大白鼠，如药物抗炎作用的实验常选用大白鼠踝关节制备关节炎的模型。此外，也可用大白鼠直接记录血压、作胆管插管，或用大白鼠观察药物的亚急性或慢性毒性。大白鼠的血压和人相近，且稳定，现常用于抗高血压药物实验。 4、豚鼠 是实验室常用动物之一。对组织胺很敏感，容易致敏，常用于平喘药和抗组胺药的实验。对结核菌亦敏感，故也用于抗结核药的研究。此外还用于离体心脏及平滑肌实验，其乳头肌和心房常用于电生理特性及心肌细胞动作电位实验，研究抗心律失常药物的机理。 5、家兔 温顺、易饲养，常用于观察药物对心脏、呼吸的影响及农药中毒和解救的实验。亦用于研究药物对中枢神经系统的作用、体温实验、热原检查及避孕药实验。 6、猫