实验三 复方对乙酰氨基酚片的含量测定
一、目的要求
1、掌握复方片剂中各成分含量测定的基本原理和操作方法。
2、掌握复方片剂的分析特点。
二、基本原理
复方对乙酰氨基酚片中含有对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸和咖啡因三种主成分。
各成分之间性质差异大。
乙酰水杨酸为芳酸类药物，具酸性，K a ＝3.27×10-4，可用酸量法测定；对乙酰氨基酚为芳酰胺类药物，具酰胺基，呈中性，但具潜在芳伯氨基，可将其在酸性条件下水解后用重氮化法测定；咖啡因为黄嘌呤类生物碱，碱性极弱，K b ＝0.7×10-14，不能采用一般生物碱的含量测定方法，但可将其与碘发生定量沉淀以后，剩余的碘用硫代硫酸钠滴定从而求得咖啡因的含量。
反应式表示如下：
1、乙酰水杨酸的测定原理 COOH O C O
CH 3
+NaOH COONa O C O CH 3+H 2O
等当点时，由于生成物水杨酸钠的水解，溶液呈微碱性，所以选用碱性区域变色的指示剂--酚酞。
2、对乙酰氨基酚的测定原理
3、咖啡因的测定原理
N
N
O
O
H3C
CH3
N
N
＋2I+KI+H2SO4N
N
O
O
H3C
CH3
N
CH3
N
HI I4+KHSO4
CH
3
I2(剩余)+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6
三、实验方法
取本品20片，精密称定，研细备用。
（一）乙酰水杨酸的含量测定
药典规定每片检品中含乙酰水杨酸应为0.219 g～0.242 g。
精密称取上述细粉适量（约相当于乙酰水杨酸0.4g），置分液漏斗中，加水15ml，摇匀，用氯仿振摇提取4次（20 ml，10 ml，10 ml，10ml），提取氯仿液用同一分水10ml洗涤，合并氯仿洗液，置水浴上蒸干，残渣加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用0.1mol/L氢氧化钠液滴定，即得。
每1ml 0.1mol/L氢氧化钠液相当于18.02mg的C9H8O4。
按下式计算每片含乙酰水杨酸的克数
平均片重
称样量
片＝W
T
/⨯
⋅
⋅
W
f
V
g
其中：T－为滴定度；V－消耗滴定液体积；f-为滴定液浓度校正因子
（二）对乙酰氨基酚的含量测定
药典规定每片检品中含对乙酰氨基酚应为0.120 g ～0.132 g 。
精密称取上述细粉适量（约相当于对乙酰氨基酚0.25 g ），置锥形瓶中，加稀硫酸25 ml ，缓缓加热回流60分钟，冷却至室温，将析出的水杨酸滤过，滤渣与锥形瓶用盐酸液(1→2)40ml ，分数次洗涤，每次5m1，合并滤液与洗液，加溴化钾3g 溶解后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，在不低于20℃的温度下，用0.lmol/L 亚硝酸钠液迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管尖端提出液面，用少量的水将尖端洗涤，洗液并入溶液中继续缓缓滴定，至用细玻棒蘸取溶液少许，划过涂有含锌碘化钾淀粉指示液的白瓷板上，即显蓝色的条痕，停止滴定，5分钟后再蘸取少许，划过一次，如仍显蓝色的条痕，即达终点。
每lml 的0.l mol/L 亚硝酸钠液相当于15.12mg 的C 8H 9NO 2。
按下式计算每片含对乙酰氨基酚的克数：
平均片重称样量称平均片重片
W W M V W f V T g NaNO ⨯⨯⨯=⨯⋅⋅=1.001512.0/'2
式中：'2
NaNO M 为亚硝酸钠液的实际浓度，0.1为亚硝酸钠液的理论浓度
(三)咖啡因的含量测定
药典规定每片检品中含咖啡因应为27.0～31.5mg 。
精密称取上述细粉适量(约相当于咖啡因50mg)，加稀硫酸5ml ，振摇数分钟使咖啡因溶解，滤过，滤液置50ml 容量瓶中，滤器与滤渣用水洗涤三次，每次5m1，合并滤液与洗液，精密加0.l mol/L 碘液25 m1，用水稀释至刻度，摇匀，在约25℃避光放置15分钟，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25m1置碘量瓶中，用0.05mol/L 硫代硫酸钠液滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。
每lml 的0.1 mol/L
碘液相当于5.305 mg 的C 8H 10N 4O 2·H 2O 。
按下式计算每片含咖啡因的mg 数
平均片重称样量片W W f
V T
mg I ⨯⋅⋅⨯
=22/ ()平均片重称样量样空W W M V V T O S Na ⨯⨯⋅-⋅⨯=202'3
22
四、预习提要
1.采用三种方法分别测定乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚、咖啡因含量的原理及有关问题讨论。
2.测定乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚、咖啡因时，各自的取样量如何计算?
3.画出乙酰水杨酸提取及洗涤的装置草图。
4.画出对乙酰氨基酚水解回流的装置草图及滴定装置图。
5.测定乙酰水杨酸时，加入中性乙醇的作用是什么？如何配制?
6.测定乙酰水杨酸时，为什么要提取？
7.测定对乙酰氨基酚时，加入KBr 的作用是什么?如何控制到达近终点的一次滴定量?
8.外指示剂指示终点的原理、方法及缺点。
如何尽可能克服这一缺点？
9.咖啡因能否采用一般含氮碱的方法测定之，为什么?
10.咖啡因含量测定时，为什么要在滴定近终点时才加入淀粉指示液?过早加入会出现什么现象?如何掌握近终点?
11.测定过程中如何防止碘 (I 2)的挥发?
12.计算三成份测定时的滴定度。
13.请比较乙酰水杨酸的中国药典法即直接酸量法 (原料)和两步滴定法 (片剂)与本法提取酸量法的优缺点。
附:复方对乙酰氨基酚片处方
乙酚水杨酸 230 g
对乙酰氨基酚 126 g
咖啡因 30 g
制成 1000片
实 验 指 导
复方对乙酰氨基酚片为一复方制剂。
所谓复方制剂指含有二种或二种以上主成份的制剂。
在分析复方制剂时，既应考虑赋形剂等附加成份的影响，又要考虑主成份之间的相互影响。
复方对乙酰氨基酚片中含有三种主成份，乙酰水杨酸、对乙酰氨基酚和咖啡因 。
乙酰水杨酸为酸性，对乙酰氨基酚为中性，含潜在芳伯氨基，咖啡因为弱生物碱。
由于性质差异大，可以采用酸量法、水解后重氮化法、碘量法分别测定三者的含量，相互之间互不干扰。
通过本实验，应掌握复方制剂分析的特点及三种方法的原理和操作技能。
一、乙酰水杨酸的含量测定
(一)提取酸量法
乙酰水杨酸为酸性物质，采用酸量法测定时对乙酰氨基酚、咖啡因对它无干扰，但是处方中加入酒石酸或枸椽酸为稳定剂影响测定，故用氯仿提取以消除稳定剂的影响。
由于乙酰水杨酸易水解成水杨酸和醋酸，要多消耗氢氧化钠，所以应在中性乙醇中进行分析，并控制滴定温度在5~15℃，以防水解。
(二)操作要点与技能训练
本实验进一步加强提取分离的技能训练。
1.片剂的取样方法
(1) 取样量计算 平均片重取样量W W 23
.04.0
(2) 粉末制备及称量
取15片或20片置称量纸或干燥洁净的小烧怀 (预先称重)里精密称重 (求得平均片重)，置研钵中研细，不允许有大颗粒存在。
按取样量的±10%为范围精
密称定粉末量。
2.定量提取
①检查分液漏斗并检漏
在提取前，首先要检查分液漏斗，注意漏斗塞及活塞是否严密、配套，尤其要注意上口活塞边上有无放气的小孔。
然后用少量提取溶剂振摇，检漏。
活塞用甘油淀粉糊润滑，因为与活塞直接接触的是与水不溶的有机溶剂氯仿。
②振摇方法
参见实验三有关内容。
如有少量液体冲至漏斗玻管部分，应用少量氯仿冲洗使之回入漏斗中。
如果上口活塞有放气孔，只需将两孔对齐即可放气，然后错开两孔，再轻轻旋摇或振摇。
③分层
将分液漏斗置分液漏斗架上，静置待分层后，打开玻塞(或对齐上口小孔)，用少量水冲洗玻塞瓶口。
旋转活塞，缓缓放出下层液至接收器中(如下层液体需进一步用溶剂提取或洗涤时，可用另一分液漏斗接收之)。
因尽量将两相恰好分离。
分得的两相必要时可经过过滤或洗涤。
④提取次数及用量
提取4次，氯仿用量依次为20 m1, 10 m1, 10 m1, 10 m1。
⑤提取及洗涤方法
a. 提取－洗涤过程中，不能让水层长时间地接触活塞部分，以免甘油淀粉糊被溶解而发生渗漏。
b. 每次提取液都置第2只分液漏斗经同一份水洗涤，洗涤液收集入锥形瓶，并合并洗涤液。
即经过四次提取，四次洗涤，然后将4次提取--洗涤液合并入同一锥形瓶中。
3.蒸除溶剂
在水浴上蒸馏回收，蒸馏所得氯仿液应收集于磨口锥形瓶中，不能敞口蒸馏或敞口接收馏液。
4.所加中性乙醇，是用酚酞为指示剂调配的。
5.滴定温度控制在5~15℃，终点粉红色应保持30秒不褪。
二、对乙酰氨基酚的含量测定
（一） 解释两个问题
l. 复方对乙酰氨基酚片粉的水解
对乙酰氨基酚、阿斯匹林在酸性中水解，生成的产物有对氨基酚
（ OH
N H 2） 和水杨酸 （ COOH
OH ）,在酸性条件下，水杨酸不溶于水而
沉淀析出。
2.加入KBr 的作用
在盐酸条件下，重氮化反应过程为:
NaNO 2十HCl →HNO 2+NaCl
HNO 2十HCl →NOCl 十H 2O Ar NH 2NO +Cl -Ar N H NO Ar N N OH 慢快Ar N +N NCl -
快
反应速度取决于慢反应的一步即第一步。
根据质量作用定律，反应速度=K[Ar 一NH 2]·[NO +]，亦即增大Ar 一NH 2和NO +的浓度，都能加速反应。
由于反应物OH
N H 2是一个具斥电子基的化合物，所以使氮上电子云密度增大，碱性增强，成盐性增强，游离原形浓度下降，会使反应速度下降。
为了加快反应速度，那么势必要增加另一个反应物NO +的浓度，为此在溶液中加入KBr ，
KBr+HCl →HBr+KCl
HBr+HNO 2→NOBr + H 2O
产生NOBr 的平衡常数比产生NOCl 的平衡常数要大300倍，亦即加入KBr 后，溶液中NO +的浓度大大增加了，从而有效地增加了反应速度。
(二)操作要点及技能训练
1. 取样量计算 平均片重取样W W ⨯=
126
.025.0 2. 水解
水解完全是本实验的关键。
如果水解不完全，轻者含量偏低，重者致使快速滴定失效。
为确保水解完全，应在直火上(2000瓦电炉)加热回流40分钟，若用3000瓦以上的电炉，则应加石棉网，以免加热太猛烈使回流液冲出。
3. 滤过及滤渣洗涤
(1)在此条件下对乙酰氨基酚水解产物对氨基酚溶于稀硫酸中，而乙酰水杨
酸的水解产物水杨酸不溶于酸而析出。
将回流液放冷至室温或用自来水冲洗外瓶壁使之冷却，冷却过程中轻轻旋摇，以生成有利于过滤的大针形结晶。
(2)过滤时可采用上倾法过滤，即将上层液体置入漏斗，滤渣及锥形瓶用盐酸液 (1→2)40m1分数次洗涤，仍用上倾法过滤并将洗液并入滤液中，以免样品损失。
4.滴定
(1) 在200或250m1的烧杯中进行，烧怀置搅拌器上，在烧杯中加搅拌子一粒
或二粒。
(2) 在酸式滴定管前加一小段滴管，用乳胶管连接。
(3) 按下限预先计算近终点加入量。
(4) 将滴定管尖端插入液面下约2/3处，不低于20℃的温度下，用0.lmol/L 亚硝
酸钠液迅速滴定，边滴边搅拌。
当滴至按下限计理论量前1~2m1，即至近终点时，将滴定管尖端提出液面;并用少量水将尖端上的样液洗净并入。
(5) 此时，应缓缓滴定，逐滴滴入并不断搅拌，因为这个反应为分子反应，尤其
是近终点时反应物浓度小，速度更慢。
(6) 在白瓷板上滴一滴碘化钾淀粉指示液，用细玻棒头蘸取反应液少许，划过指
示液，如立即显蓝色，则应停止滴定，搅拌反应3分钟后，再试之，若仍显蓝色，即达终点，否则视为假终点，是由于局部浓度过浓引起的。
这里还应强调显色要立即。
过后显色不能算达终点。
因为指示剂置于空气中一段时间后，空气将指示剂中KI 氧化为I 2而使淀粉变蓝色。
(7) 外指示剂指示终点最大的缺点是样品易损失。
为了减少这一损失，可预先做
一份求得大概含量，然后再准确测定，另外蘸取试验时取量一定要少。
三、咖啡因含量测定的操作要点及注意事项
1. 取样量计算 平均片重取样W W ⨯=30
50 2. 加稀硫酸溶解咖啡因，但乙酰水杨酸、非那西丁、滑石粉等不溶。
搅拌5~6分钟以控制咖啡因的溶解程度。
3. 定量过滤并转移是本法的关键。
4. 标准碘液和咖啡因的反应可置于暗处进行，时间为15分钟左右。
5. 剩余碘溶液的量取
遵循斩头去尾的原则，将初滤液置于一洗净并干燥的烧杯内，荡洗烧怀，全部弃去;再将续滤液接收入该荡洗过的烧怀内，移液管用该液荡洗三次，才能取该续滤液进行分析，以确保浓度的一致性。
6. 滴定
指示剂不能过早加入，否则由于碘量太多，遇淀粉形成蓝黑色，碘被包裹，终点不明锐，导致终点迟到。
当溶液滴至淡黄色(可置于白瓷板上观察)时即可加淀粉指示液。
7. 样品和空白试验应遵循平行原则，即同时加试剂，同时反应，同时过滤等等。
四、实验后思考
1.在制剂分析和原料药分析中，取样量的描述不同。
以乙酰水杨酸为例，原料药分析中：取本品约0.4克，精密称定，……；片剂分析中：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于乙酰水杨酸0.4克），……。
请回答下列问题：
（1）0.4克是怎样求得的？这里的“约”和“精密称定”是否矛盾？为什么？（2）片剂分析中取样量为何如此规定？能否直接精密称定约0.4克的粉末进行分析，为什么？
2. 通过本实验试讨论复方制剂分析的特点。
