12小麦成熟胚愈伤组织诱导

有机营养： 碳源：蔗糖、葡萄糖、果糖 氮源：氨基酸类 活性物质：维生素、肌醇等
植物激素： 生长素类：2,4-D 、IAA、NAA、IBA等 细胞分裂素类：6-BA 、激动素、玉米素等 其它类：赤霉素、脱落酸、乙烯
支持物： 琼脂等
激素配比模式
• 生长素与细胞分裂素的比例决定着外植体的发育方 向，是形成愈伤组织、长根还是长芽。 大量实验结果表明，大多数植物组织或器官的
培养基
➢ 培养基：是植物组织培养的重要基质。
➢ 没有一种培养基能够适合一切类型的植物组 织或器官，在建立一项新的培养系统时，首 先必须找到一合适的培养基，培养才有可能 成功。
➢ 培养基的种类：MS, B5, N6, White, KM-8P 等。
MS培养基的组成
无机营养： 大量元素：N、P、K、S、Ca、Mg 微量元素：Fe、Mn、Cu、Co、Mu、B等
②生长周期短，繁殖率高
往往20-30d为一个周期。所以，虽然植物组织培养需要一 定设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数繁殖生产， 故总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或 脱病毒种苗。
③管理方便，利于工厂化生产和自动化控制
植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温 度、光照、湿度、营养、激素等条件，既利于高度集约化和 高密度工厂化生产，也利于自动化控制生产。
培养基的配制、消毒与分装
10倍大量元素母液 (100ml)
100倍微量元素母液 (10ml)
100倍铁盐母液(10ml)
100倍有机物质母液 (10ml)
2,4-D 2mg/L 6-BA 0.5mg/L
蔗糖３０g
培养基
高压灭菌 分装（每瓶30ml) 琼脂粉６g溶解
定容到1000ml
调pH到5.8
实验材料与药品
• 小麦籽粒 • MS培养基+2mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA • 70%酒精 • 2.5%NaCLO • 无菌水
愈伤组织
利用外植体能培养出完整植株
完全在于高等植物细胞具有全能性
➢ 从高等植物的幼胚、根、茎、叶、花和果实等不同器官的组织中分离的单 个细胞，经过特殊培养形成愈伤组织，并可进一步诱导生成完整的植株。
蝴蝶兰
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 蝴蝶兰
虎头兰
红豆杉
植物组织培养特点
①培养条件可以人为控制
摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影 响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周 年培养生产。
• 母液应保存在冰箱中备用，保存时间不可过长，当 母液出现沉淀或霉菌团时，则不能使用。
培养基的制备——母液的配制和保存
(1)大量元素母液 可配成浓度10倍母液。 (2)微量元素母液 可配成浓度100倍的母液。 (3)铁盐母液 可配成100倍的母液， (4)有机物母液 可配成100倍的母液。 (5)激素母液的配制 每种激素必须单独配成母液，
浓度一般配成0.2mg／ml。用时根据需要取用。因 为激素用量较少，一次可配成50ml或100ml。
MS培养基母液的配制
配制母液时的注意事项
• 1).各化合物必须充分溶解后才能混合。 • 2).混合时注意先后顺序，特别要将钙离子与
硫酸根离子，磷酸根离子错开，以免产生硫 酸钙、磷酸钙等不溶性化合物沉淀。 • 3).混合时要慢，边搅拌边混合。
突变育种 组织培养可以直接诱变和筛选出具抗病、抗盐、高赖 氨酸、高蛋白等优良性状的品种。中国林科院获得了耐盐的杨 树株系。
基因工程 基因工程主要研究DNA的转导，而基因转导后必须通 过组织培养途径才能实现植株再生。
生物制品 如抗癌首选药物-紫杉醇等。近年国内在红豆杉组织 培养中获得生长量很高的细胞系，每升细胞培养物中紫杉醇的 产量可达0.25mg。
实验十二 小麦成熟胚愈伤组织诱导
• 实验目的 • 实验原理 • 实验材料与药品 • 实验方法 • 注意事项 • 实验作业
实验目的
• 掌握无菌操作技术，了解组织培养的一般 程序，将小麦成熟胚培养成愈伤组织。
实验原理
植物组织培养
指通过无菌操作分离植物体的一部分 （外植体explant），接种到培养基上， 在人工控制的条件下（包括营养、激 素、温度、光照、湿度）进行培养， 使其产生完整植株的过程。
应用领域
快速繁殖 一株葡萄一年繁殖到3万多株，一株兰花一年繁殖到 500万株左右。
种苗脱毒 通过组织培养可以培育出大量的无毒种苗。已取得成 功的有马铃薯、草莓、香蕉、葡萄等等。
远缘杂交 利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功， 从而育成一些罕见的新物种。比如辽宁果树研究所利用这种方 法获得苹果与梨的杂交种。
再生作用符合器官分化的植物激素控制理论， 即当生长素与细胞分裂素的比例高时， 愈伤组织仅形成根；生长素与细胞分裂 素的比例小时则产生苗；而两种激素的 比例适中时，则产生无结构的愈伤组织。
培养基母液配制
• 为了使用方便和用量准确，常将大量元素、微量元 素、铁盐、有机物类和激素类分别配制成比培养基 浓度大若干倍的母液。当配制培养基时，只需按预 先计算好的量吸取母液稀释即可。
• 脱分化：已分化好的组织细胞在人工诱导条件下， 恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。或 者说是由高度分化的植物组织或器官产生愈伤组 织的过程。
• 再分化：脱分化后具有分生能力的细胞再经过与 原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官 的过程。或者说是由愈伤组织再生出小植株的过 程。
• 植物体的任何一个细胞都具有全能性。分 化了的植物根、茎、叶等组织器官在一定 的条件下进行离体培养，给于一定的营养 和激素，可以脱分化为愈伤组织。愈伤组 织在不同的营养和激素的作用下，又可以 再生出完整的小植株。植物的脱分化和再 分化培养，证明分化了的植物细胞仍具有 形成完整植株所需要的全套基因。
植物细胞全能性：
任何具有完整细胞核的植物细 胞，都拥有形成一个完整植株所必须 的全部遗传信息和发育成完整植株的 能力。
• 外植体：从植物体上分离下来的用于离体培养的 那部分材料。
• 愈伤组织：原指植物在受伤之后于伤口表面形成 的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程 中形成的具有分生能力的一团不规则薄壁细胞， 多在植物体切面上产生。