蔗糖酶活力测定-二硝基水杨酸法

七、注意事项 1、酶活力测定时，要控制好反应时间，各管的酶反应时间一定要一致，否则 会影响整体结果。 2、加各反应试剂的体积一定要准确，否则也会影响最终结果。
下次实验
实验五
蔗糖酶分离纯化产物的SDS－PAGE检测分 析
及蛋白质相对分子质量测定
预习参考资料 郭尧君 蛋白质电泳实验技术 科学出版社
蔗糖酶活力测定－二硝 基水杨酸法
三、实验材料与试剂 1、实验材料
蔗糖酶样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 2、实验试剂 ① 3,5－二硝基水杨酸试剂；
甲液：溶解6.9g 结晶酚于15.2ml 10％NaOH溶液中，并用水稀释至 69ml,在此溶液中加6.9g亚硫酸氢钠。
乙液：称取255克酒石酸钾钠加到300ml 10%NaOH溶液中，再加入 800ml 1%3,5-二硝基水杨酸溶液.来自百度文库
甲,乙二溶液相混合即得黄色试剂,贮于棕色瓶中备用,在室温放置7-10天以 后使用。 ② 1g/L葡萄糖标准溶液(葡萄糖相对分子量198.17）； ③ 5％蔗糖溶液； ④ 0.2mol/L乙酸缓冲液，pH4.5； 四、实验器材与仪器 1、恒温水浴（25℃、100℃）； 2、可见光分光光度计、1cm玻璃比色皿； 3、试管、试管架； 4、移液管； 5、微量移液器：200μl、 1000μl；
五、实验操作方法和步骤 (一) 蔗糖酶活力的测定 1、标准曲线的制作
按下表加操作：
以还原糖（mg数）为横坐标，A520值为纵坐标，制作葡萄糖浓度－吸光值标 准曲线。
2、蔗糖酶的酶活力测定 按下表加样：
（二）实验结果 1、蔗糖酶活力和比活力的计算： 2、蔗糖酶各步纯化样品的纯度比较
六、结果分析讨论