冰冻切片中常见问题分析ppt课件

冻头的温度不足：冷冻切片时要求冻头的温度保持在－ 25℃～－30℃左右，冻头的温度达不到要求时，组织很 快回软，也不能保证切片的完整。
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2、冷冻时间对制片的影响：
根据组织块的大小、性质，确定冷冻时间，一般13～17s （使用液氮者），若组织较大或脂肪组织时间可适当长些， 而甲状腺、脑组织和淋巴组织等冷冻的时间相对要短些。 冷冻时间要严格掌握，时间过长，切片易脆碎，其处理方 法是：切出完整平面后用戴乳胶手套的拇指按压回温，直 到切片完整为止，反之，时间过短，则需继续冷冻，直到 组织不粘刀片出现完整切片为基准。
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3 、冷冻箱体工作温度对制片的影响：
一般组织设定为－18～－20℃。但对一些较特殊的组织 标本，温度应适当调整，如脂肪成分较多的组织以－30～ －35℃为宜，纤维腺瘤，子宫等为－20℃，淋巴结，甲 状腺为－18℃，切片时，表面玻璃机器盖子不要打开过大， 以免箱体回温过快，影响制片。保持冻箱的温度，做到每 次做完冷冻切片应关好冷冻箱的盖子。
组织内含过多的脂肪或坏死组织：脂肪或坏死组织较一般 的组织冷冻的温度要低些，当活组织达到所需的温度时， 其还比较软，从而影响切片的完整性和拖延冷冻报告发出 的时间。
组织块过冷：组织冷冻过度易致切片破碎或呈粉沫状，不 能制作一张完整的切片。
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组织块冷冻不均匀：在配合使用液氮时，组织块放入液氮 时不能保持水平状态且液氮量不足的情况下，可产生此现 象。
定期磨刀。② 保持防卷板的清洁，每做一例冷冻切片，
均应将刀口及防卷板拭擦干净，防止切片的污染和切片皱
缩。③ 调整刀、防卷板的位置，保证两者平行，且防卷
板比刀锋前0.2㎜左右。④ 包埋组织应完全，没法切片者
再滴加包埋胶。
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7、切片脱落：
冷冻切片是利用温度差（即玻片与组织切片的温度差）将 切片粘贴在玻片上，然后进行固定、染色。下面几种情况 下可影响切片粘贴的牢固程度，而导致切片脱落：① 组 织内含过多的坏死组织。组织细胞坏死崩解后，局部的渗 透压升高，吸收水分，切片一经固定，水分逸出，坏死组 织失去支撑作用，染色时组织容易脱落。② 固定液浓度 过低，这是最常见的原因。③ 载玻片不干净。④ 切片太 厚。
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预防及处理方法：避免组织内带有坏死组织，条
件允许者重新取材；若没有组织可代替，切片固 定时间长些，经95％乙醇双重固定后，用电吹风 将切片吹干（温度不能过高，以防破坏组织结构） 然后再进行染色且动作应轻柔。② 定期更换固定 液。一般每周更换一次，例数较多者，适当增加 次数；另外，每次做完冷冻，应及时将盛固定液 的瓶盖盖好，以防固定液挥发而降低其浓度。③ 保持载玻片干净，平时应将玻片盖好，防止灰尘 或其它异物的污染。若新购买的玻片较脏，洗涤 过后才使用。④ 调好切片的厚度，切片厚度以 5～7um较为合适（脂肪组织可稍为厚些）。
此原因主要取决于组织含水量的大小，尤以组织细胞水肿， 淋巴结，纵隔肿瘤，卵巢肿瘤为甚，送检取材过程中接触 水源，速冻过程中使用的液氮时间尚未控制好，同是造成 冰晶形成的原因，其解决方法为，使用液氮时间上控制到 位，保证一次冻透标本，组织送检取材时，尽量避开水源， 如遇含水量高的标本时，应尽量用干纱布吸干水分后再行 冷冻，避免由于冰晶形成出现诊断上的失误。操作者的动 作应迅速。
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8、组织块脱落：
冷冻切片一般要求在30min内发出病理报告，以便手术医 生能尽快选择手术方式。但若组织块脱落，会拖延病理报 告发出的时间，而耽误病人的手术时间。常见原因有：① 冻头在冷冻机内放置时间过长，致使包埋胶还来不及渗到 冻头的底部便凝固了，导致包埋胶与冻头粘连不紧，稍受 外力的作用便脱落；② 冻头上的包埋胶冲洗不干净。
冰冻切片中 常见问题分析
1、组织取材对制片的影响
组织取材大小：组织块大小要适宜，冷冻切片机 内切片刀移动的范围有一定的限制，超出其范围 时，易致切片不全。一般情况下，冰冻切片的组 织大小为1.5×1.5㎝,厚2㎜。但卵巢肿瘤及脂肪组 织可稍微大些。组织块过大，切片时阻力过大， 易产生皱折，刀痕，组织易崩碎，增加制片难度， 影响诊断。如需在同一标本托上放大于两块组织 时，应尽量冻成一个平面，与刀锋平齐，以防切 片不完整，发生漏诊。若送检组织过小，请预先 速冻一冷台面，再行包埋，利于制片。另外，包 埋时，应将组织平放在Pa冻ge 2头的中央。
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4、染色对制片的影响：
尤以细胞核的染色最为关键，在寒冷的冬季，室温过低时， 影响核的着色，可适当加温，用以增色，苏木素的酸碱度 应适宜，经常观察其染液的ph值，过碱时应及时更换，盐 酸酒精分化适度，时间控制到位，否则易造成核着色不佳， 染色质不清晰，影响诊断的准确性。
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5、冰晶的形成对制片的影响：
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6、切片皱缩或卷缩：
这也是影响切片质量的重要因素之一。常见的原因有：① 刀锋变钝。② 防卷板粘有异物，防卷板的作用是防止切 片卷缩，但若粘有异物，切片时组织会被挤压而缩在一起。 ③ 防卷板与刀锋的位置不平行、不协调。④ 组织块包埋 不完全，缺乏支撑作用。
预防与处理的方法：① 注意检查刀具，及时更换刀口，
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总之，对于冰冻切片的质量因素主要 有以上几点。如果能正确对待以上几 方面的问题，冰冻切片的质量方可得 到保证，且能制备出一张质量优秀的 切片，为明确病理诊断提供较为便利 的客观条件。
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