ＲAW２６4、７细胞株得相关信息
ATCC：美国模式培养物集存库(Aｍｅrican tｙｐe ｃulｔure cｏllｅcｔion)得简写
收到冷冻管细胞得处理方式
1、收到细胞株包裹时，请检查细胞株冷冻管就是否有解冻情形, 若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养,或立即冷冻保存(置于–70℃,隔夜后，移到液氮)。
2、收到T25 flask细胞得处理方式
于寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡,Ｔ２5 fｌasｋ均加满培养基。
２、1、检查flａsk 外观，并于显微镜下观察细胞生长状况与有无污染现象,若有任何问题，不要打开盖子，请立即通知细胞实验室。
２、２、将原封之Ｔ25 fｌask 静置于３７℃, 5% CO２培养箱中,使细胞回温至３7℃，并让运送过程中少数脱落得细胞可再附着生长.
２、3、隔天后，于无菌操作箱内取出flask内之培养基，（取出之培养基可以再使用）,
仅留约5—10ml 培养基于flask 内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中,或细胞已长满盘, 则将细胞做传代培养。
ＲAW2６4、7细胞株得ＣelｌCuｌｔure
一、RAW２64、7细胞培养得特点
1、RＡW2６4、7细胞一般为圆形或椭圆形,功能活跃时，可呈多突形。细胞核为圆形或椭圆形,染色较深。贴壁特别牢固。
２、RＡW264、7具有很强得吞噬能力,当吞噬抗原后,细胞会释放趋化因子,进一步促进细胞伸出伪足，增强粘附攀爬能力。细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会促进该细胞呈现梭形、长梭形,镜下会瞧到具有细长伪足得小细胞被类似上皮得梭形大细胞取代。
3、每次传代都很难消化下来.用力过大则对细胞损伤较大,这种细胞传代时接种密度要大,否则容易使巨噬细胞向终末细胞分化,细胞变成长形，并且不能回复,这就是培养这种细胞时最需要注意得问题。
４、对于ＲAW264、7细胞她得声场时喜欢结伴。正常生长状态应该就是一小片一小片得生长,片片之间不连接，等到长到更多更密得时候会连成大片,并且会叠加成层。所以,要很好地控制好细胞得生长速度，不要等到叠加成层得时候再传代。
５、RAW２６4、7细胞传代后贴壁时间较短，半小时就能贴很多，刚贴壁就是细胞呈圆形,折光度很好，镜下观察如小珍珠状一个个地散落于瓶底面。生长一段时间后,部分细胞会变成类似四角形,伸出伪足之类得．这个时候就就是提醒您注意传代了,这部分细胞如再不传代，很容易就老化掉．
二、RＡＷ2６4、7细胞传代
1) 将培养瓶内旧得培养液弃掉, 然后用Ｄ—Hanｋs液洗两次，（一定要洗干净，以免影响胰酶得消化作用）
2) 加入０、2５％胰酶—EＤＴＡ消化,２5cｍ培养瓶加0、4mｌ, 37度消化5miｎ,镜下瞧到细胞变圆，间隙增大.(值得注意得就是该细胞对机械损伤比较敏感)
3）立即加含1０%FＣＳ得培养液终止消化，用细胞刮刀轻刮，注意,这时候用吸管吹不下来,但就是刮刀却很容易刮下来,而且对细胞得损伤极小
4）离心,弃上清,加新得培养液(10％ＦCＳ),小心吹匀,分装入新得培养瓶
三、ＲAW2６4、７细胞冻存及复苏
（一）细胞冻存
１、配制冻存培养液；(通用得为培养基:血清：ＤＭＳO＝7:２：１,但其中得血清可进行调整,如上面得仁兄用得４：５：１，比例过高)
2、取对数生长期得细胞（冻存前一天换液），用胰蛋白酶把单层生长得细胞消化下来，悬浮生长得细胞则直接将细胞移至1５ml离心管中；
3、离心1０00rpm,５miｎ;
4、去除胰蛋白酶及旧得培养液,加入适量配制好得冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数,调节冻存液中细胞得最终密度为５×106／ml~1×107/mｌ；
5、将细胞分装入冻存管中,每管1~１、5 ｍl(不超过冻存管容量得80％);
6、在冻存管上标明细胞得名称,冻存时间及操作者；
7、冻存:标准得冻存程序为降温速率—1~-2℃/ mｉn；当温度达-25℃以下时,可增至—5℃~—10℃/ｍin;到—1００℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞得冻存管放入－20℃冰箱2ｈ ,然后放入-7０℃冰箱中过夜,取出冻存管，移入液氮容器内.（具体操作为4°Ｃ 2０miｎ,—2０°C30mｉn,－７0℃过夜,转入液氮中）
(二) 细胞复苏
１、从液氮容器中取出冻存管,直接浸入3７℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。（1m ｉn以内溶解完毕，不能将口进入水面下）
2、从3７℃水浴中取出冻存管,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加1０倍以上培养液,混匀;
3、离心，１0０0rpm,5ｍｉn;
4、弃去上清液,加入含1０％小牛血清培养液重悬细胞,计数，调整细胞密度，接种培养瓶,3７℃培养箱静置培养;（复苏时细胞密度稍大,可提高复苏效率)
５、次日更换一次培养液,继续培养．(可更换一半培养液,避免跨度太大，影响细胞状态)
（三）接种
四、ＲAＷ264、7细胞形态不好时得处理方法
1、倒掉旧得培养基，加入3ml新得培养基（有无血清得都可）洗涤一次,用滴管吸走,然后再加入３mｌ得培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍,然后吸走。这时侯再开始正式得消化、吹打。ﻫ
2、把吹打下来得细胞悬液加入到新得培
养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。１０分钟观察一次,２0分钟,30分钟观察一次.选择一个时间点,已经有部分细胞贴壁得情况下,重新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中得培养基,加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养.后续观察细胞生长情况以及形态。我称之为“二传”。
3、如果一次效果还不理想,可重复多次.直到找到细胞完美形态。其中要注意,结合细胞喜欢得生长情况。喜欢多一点数量长得好得细胞就等贴壁细胞比较多点得时候再传。反之亦然。
不明之处：培养之前,一切与细胞接触得玻璃器皿与器具都要进行过去热源处理。(2００-250℃烘烤4—6h)??
ＲAW２64、7细胞株CelｌＣulture得材料
（一)仪器
1、净化工作台
2、离心机
3、恒温水浴箱
４、冰箱(4℃、－20℃、—70℃）
5、倒置相差显微镜
6、培养箱
7、液氮冰箱
(二)玻璃器皿
1、吸管（弯头、直头）
２、培养瓶
３、玻璃瓶(２5０ml、100ml）
4、废液缸
(三）塑料器皿
１、吸头
２、枪头
3、胶塞
４、移液管(10ｍl)
5、１5ｍｌ离心管
6、冻存管（1～2ml)
（四)其她物品
1、微量加样枪
2、红血球计数板
3、记号笔
