紫外线对枯草芽孢杆菌诱变素材

[5]娄权，陈广平.浸矿微生物紫外诱变选育及浸矿机理研究[J].现代 矿业，2004（2）. 通过微生物的铜离子耐受性培养，选取可以浸出铜离子的酸性浸矿 微生物，并利用紫外线照射对微生物进行诱变培养，培育出一种可 以高效浸出铜离子的酸性浸矿微生物。同时探讨了微生物对铜离子 的耐受性培育和紫外线诱变在高效浸矿微生物选育中的应用，以及 浸矿微生物在矿山中的应用前景。 [6]丁学知，夏立秋.苏云金杆菌高毒力菌株4.0718的快速选育[J].中 国生物防治，2001,17（4）63-166. 不同生态区域的早作地、果园和稻田采集的858份土样中，分离筛 选出苏云垒杆菌30株 选取一株具典型苏云垒杆菌菌落特征和较高杀 虫毒力的菌株70为出发菌株，经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合 诱变，显微涂片染色镜检，发现菌体的伴孢晶体的形状、大小、数 量及芽孢与伴孢晶体的比倒与杀虫效力密切相关 以这些特征为参考 进行一佚速韧筛和毒力生测复筛，筛选出一株高毒力突变杀虫菌株 4．0718。该突变袜杀虫毒力与原始菌株相比提高了7．5倍，在6、 12和24h内供试小菜蛾三龄幼虫死亡率分别高达20％ 、97％ 和 100· 此菌株的高效速效杀虫毒力经连续l0代培养能稳定遗传。
[3]周德明，冯友仁，梁帅.木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶高产 菌株的诱变育种[J].中国林业科技大学学报，2009,10（5）. 利用低能N 注入，对产木质素过氧化物酶(Mnp)和锰过氧化物酶(Lip) 活力均较高的菌株N1023进行诱变，研究了不同能量和不同剂量N+离 子诱变后菌株的存活率与突变率、突变菌株的产酶活力及遗传稳定 性．结果表明：不同能量和不同N 离子剂量注入对菌株有显著影响， 诱变菌株Nlo23j产Mnp~11Lip双酶活力分别提高了27．29％和 22．58％，同时诱变菌株N1o23j有很好的遗传稳定性 。 [4]孟庆云，张鹏.环境参数变化对γ 射线诱变微生物的影响[J].微 生物学通报，2000,27（3）. 报告了在非自然环境中培养选育青霉菌苗株的一些结论。实验表明 随着辐射剂量的增加菌株的致死率也相应增加；当辐照剂量相同时， 与自然环境相比其致死率有所提高，且随着非自然环境参数值的增 加而增加。当电场强度为300kV／m、磁场强度为600G~时，正变率有 一极大值。
3诱变处理
用物理方法或化学方法，所用诱变剂种类及剂量的选 择可视具体情况决定，有时还可采用复合处理，可获 得更好的结果。本实验用紫外线照射的诱变方法。 (1)．紫外线处理 打开紫外灯预热20min。取5mL 菌悬 液放在无菌的培养皿中，同时制作5 份。逐一操作， 将培养皿平放在离紫外灯30cm(垂直距离)处，照射l min 后打开培养皿盖，开始照射，与照射处理开始进 行搅拌，即时计算时间，照射时间分别为15 s、30 s、 l min、2 min、5 min。照射后，诱变菌液在黑暗中保 存1～2h 然后稀释涂菌进行初筛。 (2)．稀释菌悬液 按10 倍稀释至10-6，从10-5 和106 中各取出0.lmL 加入到酪素培养基平板中(每个稀释 度均做3 个重复)，然后涂菌并静置，待菌液渗入培养 基后倒置，于30℃恒温培养2～3d。
百度文库训
1：实验操作提前准备 材料及器材。 2：无菌操作时严格 按照无菌操作 技术操作。 3：紫外线诱变处 理时注意黑暗 培养。 4：遇到不会的要 及时询问，不能 自己随便做。
参考文献：
[1]李豪，车振明.微波诱变微生物育种的研究[J]. 山西食品工业，2005,6（2）. 简要概括了国内外微波诱变育种领域的研究新进 展，对微波的生物学效应及诱变微生物的机 理进行了总结和讨论，在此基础上探讨了微波诱 变微生物育种的应用性研究。最后，对本领域的 发展进行了展望。 [2]孙金旭.乳酒酵母紫外诱变原生质体制备研究[J]. 酿酒科技，2008（6）. 在乳酒酵母原生质体形成率和再生率影响单因素 研究的基础上，对菌龄、酵解温度、酵解时间、 酶浓度、稳渗剂采用L16（4）5正交试验，评价 各因素的影响程度，得出适宜该菌原生质体制备 的条件。
4稀释涂平板
取未照射的菌悬液(作为对照)和照射 过的菌悬液各0.5 mL 进行不同程度的稀释。 取最后3 个稀释度的稀释液涂于淀粉培养 基平板上，每个平板加稀释液0.1 mL，用 无菌玻璃刮棒涂匀，培养48 h(用报纸包好 平板)。注意在每个平板背后要标明处理时 间、稀释度。 注：枯草芽孢杆菌诱变前：稀释至10-8， 10-7,10-6，生理盐水 枯草芽孢杆菌照射1min稀释至10-8,107,10-6，生理盐水 枯草芽孢杆菌照射2min稀释至10-8,10-7， 10-6，生理盐水 枯草芽孢杆菌照射3min稀释至10-8，10
技术路线：
材料器具准备
紫外线诱变处理
菌悬液制备
平板制作 稀释涂平板
计算存活率 及致死率
稀释菌悬液
操作步骤
1.菌悬液制备 将枯草芽孢杆菌接种在牛肉膏蛋白胨培养基上， 37℃培养20h，使其活化，取已培养20 h 的活 化枯草芽孢杆菌斜面一支，用10 mL 生理盐水 将菌苔洗下，倒入离心管中，离心(3000 r/min)15min，弃上清液，将菌体用无菌生理盐 水洗涤2 次，最后制成菌悬液，用血球计数板 在显微镜下直接计数。调整细胞浓度为108/mL。 2. 平板制作 将培养基熔化后，冷至45℃左右倒平板。
实验目的：
学习微生物诱变育种的基本操作方法
实验内容：
1：对枯草芽孢杆菌出发菌株进行处理 制备菌悬液。 2：对紫外线进行诱变处理。
实验材料和用具 1 菌种:枯草芽孢杆菌 2 培养基:淀粉培养基。 3 主要药品:牛肉膏、蛋白胨、 Nacl、可溶性淀粉、碘液，生理盐 水。 4主要器皿:试管、移液管、锥形瓶、 量筒、烧杯、紫外灯、离心机、培 养皿等。
存活率 将培养48 h 后的平板 取出进行细胞计数。 根据平板上菌落数， 计算出对照样品1 mL 菌液中的活菌数。
同样计算用紫外线处 理1、2、3min 后的存 活细胞数及致死率。
注
1：紫外线照射时注意保 护眼睛和皮肤。 2：诱变过程及诱变后 的稀释操作在无菌下进行并黑暗中培养。
意 事 项
实验结果分析
实验结论： 实验失败
失败原因分析：细节决定成败
1：制作牛肉膏蛋白胨培养基时，没有调到合适的 PH。 2：培养基灭菌处理没有处理好，导致杂菌没有 灭干净。 3：接种过程中由于在酒精灯上灼烧时间长且 没有完全冷却就进行接种导致菌种被烫死。 培养基培养时没有长出实验中所需菌落。
失败原因
4：紫外线诱变过程及诱变后的稀释操作没有在无菌下进行 在黑暗中培养时间过短。 5：涂平板时离酒精灯远进，导致杂菌进入，最后 菌落没有长出，且其他杂菌生长旺盛。 6：由于以上所有操作都应无菌操作进行，但实际操作没有 做到无菌操作，最后导致平板上菌落较杂，分不清枯草芽 孢杆菌菌落无法计数。