罗氏电化学发光

AxSYM
仪器类型 方法学 运行方式 测试方式 立式 三种技术
Elecsys
台式 单一技术
wk.baidu.com优势
符合现代实验室自动化需要 具有多种技术，可针对待测物质的理化性质的不 同选择采用不同的方法,获得最优化结果 真正第三代全自动仪器,符合实验室自然工作流程, 可任意增加样品,试剂和消耗品 根据待检物理化性质的不同灵活选择不同的检测 原理和测试方式加以组合以取得最佳实验结果 悬浮性好,试剂更均匀 速率法快且准确 根据不同被检物的特点设计不同冲洗次数,冲洗量, 全面彻底的清洗,避免非特异性反应和前带效应 根据待检物理化性质的不同灵活选择不同的反应 时间以取得最佳实验结果 提高工作效率 大量样品位,各种样品管类型,并可随时添加 大量试剂位,并可随时添加,适合大批量,多项目连 续运行 可连续进行大批量运行
AxSYM与Elecsys主要性能比较
AxSYM
线性范围(hCG) 0~200,000mIU/ml 光路系统
Elecsys
0~10,000mIU/ml
优势
AxSYM自动稀释功能同样可达极宽的线性范 围 汞灯和卤钨灯,寿命长,费 PMT和电极,寿命短,费用 二套光路系统,相互独立,读数时启动光源,寿命 用低 高 长,维修费用低,而PMT寿命短,且费用高,可达机 价一半 无 9分钟 Elecsys2010,一次性Tip 头 无 Elecsys1010无 Elecsys1010无 有,二维,只可仪器读 1条 提高工作效率 急诊更快速 增加隐含费用 用户使用更方便 更有效地操作方式 试剂随用随取，避免试剂蒸发而造成的结果不 准和浪费,并避免交叉污染 避免条码破损引起不能操作,Elecsys试剂盒条 码含标准曲线,一旦破损试剂盒就会报废 多条曲线同时可使用多个试剂盒,避免试剂盒 的浪费或操作不便
检测系统
系统控 制中心
机械抓手
TPA和洗液
蒸溜水
样品转盘
试剂转盘
反应管和 Tip头 固体废物
液体废物
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内置样品盘
外置样品盘
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样品转盘:30个位置
试剂转盘:18个位置, 15个试剂 位置(另外3个放预稀释液和预 处理液),运行时不能随意添加, 非冷藏温度
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试剂样品探针,使用一次性 Tip头,一个测试2~3只,仍 需蒸溜水请洗
混匀搅拌棒,蒸溜水清洗
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•反应杯架:60X3(最多5架) •Tip头架:120X3(最多5架) •孵育架:32个位置(有限) •机械抓手,容易机械故障
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乙肝
HBsAb 全部一步法检测
抗体 (HBsAg)
精密度 (HBsAg)
固相抗体:鼠单克隆
连接物抗体:羊单克隆 标准:6个panal,每个75份样品,每天4 次,每次3个复管,超过2天,3个批号试 剂. Intra-run<4.3CV% Inter-run<4.6CV%
固相和连接物都为鼠单克隆
Intra-assay样品数21份,Interassay样品数9份,2组质控品,无其 它任何说明 Intra-assay<6.9CV% Inter-assay<7.6CV%
冲洗方式—表面被动冲洗,如酶标板,有残留
蒸溜水探针清洗—高携带率 试剂混匀—搅拌棒,有携带
一次清洗—Hook效应
质控—只控制低值或中值区域 链霉亲和素-生物素包被技术—增加对样品的要求
Elecsys的干扰
•生物素 •链霉亲和素 •HAMA效应 •Hook效应 •流动池
AxSYM与Elecsys主要性能比较
工作电极
磁铁
ECL 应用技术
电极
TPA
光电倍增管
TPA TPA
测量池
电极
TPA
工作电极
磁铁
ECL 应用技术
电极
TPA
光电倍增管
TPA TPA
测量池
电极
TPA
工作电极
磁铁
ECL 应用技术
电极 光电倍增管
测量池
电极
工作电极
磁铁
Elecsys的弱点
流动读数池—高携带率
PMT和电极—寿命短(10万次),费用高 磁性颗粒—比重比水重,试剂不均匀
Saw, S.L., 2000. Hepatitis B surface antigen mutant detection on four immunoassay analysers. Clin. Chem. 46 Supl.: A53.
RHBsAg mutant sample @1ng/mL Architec t AxSym Elecsys Vitros ECi
随机,任意,持续,急诊 批式,随机,急诊 一步法,二步法,三步法 一步法,夹心法(大多为一 ,夹心法和竞争法 步法) 磁颗粒.2.8μ 终点法 固定,表面被动冲洗 固定(9,9,9分钟)
包被载体 高分子材料,0.5μ 信号检出方式 速率法和终点法 冲洗方式 灵活,立体主动冲洗 反应时间 检测速度 样本位 试剂位 消耗品 灵活
HBsAg subtype ‘ad’ Gln129-His Pro142-Ser + Gly145-Arg Met133-Leu Thr126-Ser Gly145-Arg Asp144-Ala + Gly145-Arg Thr126-Ser + Gly145-Arg Asp144-Ala Pro142-Leu + Gly145-Arg Wild type – adw2 HBsAg subtype ‘ay’ Neg Ctrl Units Reactive cut-off
固体废物:800个(反应杯和Tip 头),不能运行时更换
蒸溜水:2个探针,1个搅般棒 液体废物:不能运行时更换
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Elecsys 2010系统浏览
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样品和试剂探针 试剂搅拌棒
蒸溜水 TPA和洗液 样品和试剂转盘 废液桶
探针 系统控 制键盘
特设急诊位
标准品和质控
试剂和条码
二点定标
二点定标
二点标准品
ECL流动比色池
测量池
光电倍增管 磁颗粒结合的 标记物 计数电极
液流
激发区
磁铁
工作 电极
未结合 标记物
ECL 应用技术
电极 光电倍增管
测量池
电极
工作电极
磁铁
ECL 应用技术
电极 光电倍增管
TPA TPA TPA
测量池
电极
TPA
ECL 原理图
三丙胺(tripropylamine,TPA)
氧化 .+ CH3CH2CH2-N-CH2CH2CH3 CH3CH2CH2-N-CH2CH2CH3 电极 CH2CH2CH3 CH2CH2CH3 + e..
Ru(bpy)33+ 还原 Ru(bpy)32+
CH3CH2CH2-N-C-CH2CH3 H +H+ CH2CH2CH3 氧化 CH3CH2CH2-N-H + CH3CH2CHO CH2CH2CH3
AxSYM每个测试均在独立的反应空间内进行 ，互相之间没有干扰且利于同时使用不同的 检测方法。ECL采用流动池，测试之间存在 干扰，影响结果 仪器自动震荡混匀 搅拌棒混匀 避免污染 2~8℃尽效期,室温连续 2~8℃尽效期,室温累积20 雅培试剂不受试剂开瓶影响,并可长期上机,无 112~336小时,开瓶效期与 小时,开瓶效期12周(2~8 须冷藏,试剂更稳定 标贴效期一致 ℃) 稳定一个批号试剂 7~30天,Elecsys1010 3~7 试剂稳定性的表现 天,每个试剂盒 1,2和6点定标,可使用无限 2点,只能使用5个批号试剂, 提供用户多种选择,节省标准品的费用和试剂 不同批号试剂 开瓶12周,上机5小时 费用,并保证结果高质量 高,中,低三种,配L-J图 低,中二种,都在低,中范围 配合L-J图全面控制分析的整个线性范围 0.01uIU/ml(第三代) 0.014uIU/ml(第三代) 极好的功能灵敏度 批内<5%,批间<10%,采用 批内<4%,批间<7%,采用 雅培采用更严格的标准依然表现极佳的精密 NCCLS的EP5-T2标准 NCCLS的EP5-T标准 度 6 IU/L β -HCG交叉 6×10 因采用流动池设计，携带 Elecsys的多种项目因采用一步法并使用流动 测定于阴性标本时携带率 率较高，据报道，hCG， 池，具有较高携带率并有前带效应。也不符 ＜1μ IU/L；2g/L 重组 TSH，AFP，CEA有前带 合ATA、AACC对这些项目的推荐要求。 HBsAg交叉测定于阴性标 效应,特别1010,探针亦有 本时携带率＜0.1μ g/L 携带,肝炎假阳性高
ECL检测技术原理
二价的三联吡啶钌在电场的作用下,失去一个电子氧
化成三价的三联吡啶钌
同时,在电场作用下,三丙胺也失去一个电子被氧化,
然后脱氢成三丙胺自由基
三丙胺自由基传递一个电子给三价的三联吡啶钌使
之进入激发态
激发态的三联吡啶钌不稳定,以发射一个波长为
620nm的光子的形式释放能量而回到基态三联吡啶 钌不被消耗,即发光标记物可循环发光
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6个试剂位置,手工开盖,不能 放同种试剂 66个样品位置,2个急诊位置 不能随时加样和试剂
反应杯位置128个 不能随时添加 手工加入和清除
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样品探针与搅拌棒在同一臂上, 影响检测速度
反应液探针,蒸溜水清洗— 污染
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质控1
15~25 8.37~15.5
质控2
64~96 47~87
质控3
140~210 无
人类绒毛膜促性腺激素(HCG)
范围 雅培 罗氏 0~1000 0.1~10000 质控1 20~30 6.45~13.1 质控2 120~180 20.7~41.1 质控3 600~900 无
罗氏不是标准品定标范围,而是可检测范围
罗氏电发光
ECL1010/2010/E170
罗氏(Roche)Elecsys系列
Elecsys有三种系列产品,1010/2010和E170 前身为德国宝灵曼产品 与日本日立公司联合开发其Elecsys系列
Elecsys1010为Roche自己设计生产
Elecsys2010和E170为日本日立公司OEM产品 配套试剂使用ECL技术,为另一家美国IGEN公司 的专利技术
可检测度 (HBsAg)
检测2052份献血员样品,835份住院 N/A 病人样品,222份乙肝病人样品,分 别为0.15%,0.60%和100%
特异性 (HBsAg)
99.95%
99.84%
*摘自各厂家试剂说明书
雅培与罗氏质控品的比较
甲胎蛋白(AFP)
范围
雅培 罗氏 0~350 0.605~1210
自动转测 有 第一出结果时间 8分钟 吸样方式 探针 组合配套 有,随意无限 触摸屏 有 试剂盒自动开盖 有 试剂条码 标准曲线数 有,一维,可手工输入 4条不同批号曲线
雅培与罗氏肝炎试剂比较(1)
雅培 罗氏
种类
定量项目 检测步骤
甲,乙,丙肝炎
HAV-IgG,AUSAB,HBe 一步法(HAV,CORE),二步法 (HBsAg,AUSAB,HBe, Anti-HBe, HCV)三步法(HAV-IgM,CORE-M)
80~120T/h 60~90T/h 一次60~90个,随时添加 30,66,75个不等 20个,随时添加 6,15个,不可添加 可随时添加 有条件限制
AxSYM与Elecsys主要性能比较
AxSYM
反应区 每个测试独立反应区
Elecsys
流动池结构
优势
试剂混匀方式 试剂稳定性 定标周期 标准品 质控 灵敏度(TSH) 精密度 携带率
+Ru(bpy)32+
ECL的测定模式
ECL其它技术特点
标记物三联吡啶钌分子量小,可标记任何
抗原,抗体及核酸,水溶性,高稳定,确保反 应的高效和稳定,无噪音干扰
链霉亲和素-生物素包被技术
聚苯乙烯直径2.8微米的磁性微球
电化学发光标记物--三联吡啶钌 N羟基琥珀酰胺(NHS)酯
磁性微粒子固相
*摘自各厂家试剂说明书
雅培与罗氏肝炎试剂比较(2)
雅培
灵敏度 (HBsAg) 6组纯化的HBsAg ad/ay亚型panal, 每组panal每天测3次,测2天 ad/ay的灵敏度为0.23ng/ml,最低可 达0.17ng/ml
罗氏
样品用人HBsAg阴性血清样品进 行系列稀释,无其它任何说明 ad/ay的灵敏度为<0.04U/ml(PEI) 约0.4ng/ml
直径2.8微米
亲和素- 生物素
亲和素- 生物素
ECL的优势
灵敏度高(10-12~10-18) 检测线性宽(7个数量级)
注:试剂表现不仅仅表现在灵敏度和宽线性,还有特异性, 重现性,线性回归,携带率,准确性和临床符合性等多种表现
Elecsys 2010系统浏览
样品和试剂探针
试剂搅拌棒
探针