亲和层析的运用

通用性配体亲和层析法

第五章 亲和层析

亲和层析

一、亲和层析基本知识亲和层析法是利用生物大分子与某些对应的专一分子特异识别和可逆结合的特性而建立起来的一种生物大分子纯化方法，也叫做生物亲和或生物特异性亲和色谱。这种特异可逆结合的物质很多，如抗原与抗体、底物与酶、激素与受体等，他们间的这种

81% 78% 93% 89% 92%在很多应用( 50-100 目 ) 及酶纯该介质对含有如氨基 硫醇 羟能对蛋白质这种介质应用专利的聚合及衍卓越的大孔结构使其能与大的配位体结合以分离纯化大分子其他含有麦芽糖结合蛋环氧化物树脂能在我们提供

亲和层析法

洗脱液pH值离子强度梯度洗脱（2）特殊洗脱：当蛋白吸附紧密或上述方法洗脱 会引起失活，可用专一的化学方法裂解配基与载 体的连接键，再用透析或凝胶层析法去除配基。断键方法：硫酯键、偶

亲和层析的应用Chitin几丁质Trypsin胰岛素CHOM鸡蛋粘多糖蛋白亲和层析法分离胆固醇氧化酶 季文明,陈毅力等 江南大学生物工程学院亲和层析法分离胆固醇氧化酶 胆固醇氧化酶

此产生亲和基质间隔臂：用于克服空间位阻从而促进配体和靶分子的结 间隔臂：合封闭： 封闭：用亲水性低分子量化合物如乙醇胺来封闭残留的活化基团亲和层析操作1、样品预处理 、 2、柱的填

5．用离心管收集洗脱液，每管收集0.2ml。 6．PBS 缓冲液洗柱子3遍，关闭出口。 7．用分光光度计测定每一管的吸光度值，记录读数，绘制洗脱曲线。8．将读数最大的一管用于SDS

五：亲和层析载体的性质与选择亲和层析载体的选择(selection of vectors)1：多孔的立体网状结构，能使被亲和吸附的 大分子自由通过。 2：颗粒均匀，具有良好的流速。

Cu2+、Ni2+、Zn2+、Co2+等过渡金属离子可与N、S和O等供电原子 （electron donor atom）产生配位键，因此可与蛋白质表

亲和层析介质一般保存于溶胀状态，保存温度4～ 8℃，不可冷冻，否则会破坏凝胶的珠状结构。在保存溶 液中加入20％的乙醇或0．02％的硫柳汞以防止长菌。活 化的rhiol-Sepha

凝胶浓度越低 结构越疏松 机械强度越低（4）聚丙烯酰胺凝胶 特点：物理化学性质稳定 抗微生物侵蚀能力比琼脂糖强 可供化学反应的酰胺基较多（5）多孔玻璃 特点：不受微生物的侵蚀耐酸、

.4ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ亲和层析的基本特点1、纯化过程简单、迅速，且分离效率高 2、特别适用于分离纯化一些含量低、稳定性差的生物大分子 3、纯化倍数大，产物纯度高 4、必须针对

亲和层析技术（一）原理亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中

2016/8/27 7二、亲和层析载体（一）、亲和层析对载体的要求：• • • • • （1）充分功能化，与配基进行共价连接。 （2）有较好的理化稳定性和生物惰性。 （3）具有高度

溴化氰 环氧氯丙烷 双环氧乙烯 丁二烯砜 亚氨二乙酸 用其活化的基质与配体偶联，或用其把基质和配 体螯合起来。前两种适合于含氨基的配体，后三 种用于非生命分子的配体如重金属等，但

二、亲和层析的特点• 分辨率很高 • 分离速度快 • 操作简便 • 对设备要求不高 • 亲和吸附剂通用性较差 • 洗脱条件较苛刻与其他层析技术比较• 吸附层析、凝胶过滤层析、离子交