2.滴加液体石蜡时沿管壁倾斜加入，盖住液面即可。请添加小标题Please replace text, click add relevant headline, content to this directly. Please replace
酶动力学综合实验 实验（一）——碱性磷酸酶Km值的测定 【目的要求】 1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响 2.了解米氏方程、Km值的物理意义及双倒数作图求Km值的方法。 【实验原理】 1、碱性磷酸酶： 碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官
酶动力学综合实验 实验（一）——碱性磷酸酶Km值的测定 【目的要求】 1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响 2.了解米氏方程、Km值的物理意义及双倒数作图求Km值的方法。 【实验原理】 1、碱性磷酸酶： 碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官
因、尼古丁吗啡海洛因（2）非竞性（Non-competitive)抑制无法形成产物抑制物Noncompetitiveinhibition（3）反竞争性（Uncompetitive ）抑制(三)可逆和不可逆抑制作用的鉴别1：反应体系不加Iv1
用这些数据求丝氨酸脱水酶的表观米氏常数。 解：1、v对[S]作图法:v丙 酮 0.3 酸Vm0.2 Vm 2 0.1Vmax=0.36 1/2Vmax=0.18 Km=3.210-7M/20min012345678 10-6 [S]解2、1
②HanesWoolf 法： 米氏方程可变形为C CS K C = m + S ，以 S ~ C S 作图，将得一直线， r r rmax rmax直线截距为Km 1 ，斜率为 ，据此计算 rmax 和K m 。此法在底物浓度很低时误差较小
为解释酶被底物饱和现象，Michaelis和 Menten做了大量的定量研究，积累了足够的实验 数据，提出了酶促反应的动力学方程：S E k1 ES k2 P ES Et ES k1ES [ES]生成速度：v1 k1Et E
A不形成三元复合物的动力学方程 Vmax[A][B] [A][B] + [B]KmA + [A]KmBBv=KmA，KmB分别为底物A和B的米 氏常数； KsA为底物A与酶结合的 解离常数A第二节 抑制剂对酶促反应动力学的影响一、基本概念和
类及反应条件有关，与酶的浓度无关。所以可以用于鉴定酶。 对于专一性不强的酶来说对于每一个底物都有一个相应的Km值.②. 判断酶的专一性或最适底物（天然底物）同一个酶催化不同底物时Km最小的底物称该酶的最适底物或天然底物蔗糖酶既可催化蔗糖水解
得到 平行直线: 增加第2底物的浓度, Km和Vmax同步增 加(对于第1底物)酶的抑制作用A.不可逆抑制✓ 抑制剂与酶以共价键结合 ✓ 不能用透析、超滤方法除去抑制剂 ✓ 酶的修饰抑制B.可逆抑制✓ 抑制剂与酶以非共价键结合 ✓ 能用透析
rS rmax即：或：( 3-16)rmaxt CS0 CSCS CS0 rmaxt当CS与Km的数量关系处于上述两者之间的范 围时，即符合米氏方程所表示的关系式。在 t=0时，CS=CS0，对（2-13）式积分得到：rmaxt
反应速度：V K3 [ES] K3 [E][S] K2 [S] K1 Vmax [S] KS [S]KS现在称为底物常数1925年Briggs和Haldane提出稳态理论米氏推导酶促反应速度公式时，认为[ES]的积累是快速 平衡的
第九章酶促反应动力学 （一）底物浓度对酶反应速率的影响 用反应初速度v对底物浓度[S]作图得P355 图9-6。 曲线分以下几段： （1）OA段：反应底物浓度较低时v与[S]成正比，表现为一级反应， v = k[S]。 根据酶底物中间络合物
ES + I Ki ESIE+P非竞争性抑制的双倒数方程：3. 反竞争性抑制作用• 抑制剂仅与酶和底物形成的中间产物(ES) 结合，使ES的量下降。这样，既减少从 ES转化为产物的量，也同时减少从ES解 离出游离酶和底物的量。• 特点：Vm
3. Km在实际应用中的重要意义（1）鉴定酶：通过测定可以鉴别不同来源或相同来源但 在不同发育阶段、不同生理状态下催化相同反应的酶是 否属于同一种酶。（2）判断酶的最佳底物：如果一种酶可作用于多个底 物,就有几个Km值，其中Km最小对应的底
k 1C E C S k 1C ES（1-2）即：k 1C ES C ES CE Km k 1CS CS（1-3） ——酶—底物复合物的解离常数 Km 式中：k 1 Km k 1根据假设（3），有：总酶量：C E 0 C E
当反应物系中存在与底物的结构相似的物质 ，这一物质也可能与酶的活性部位结合，形成非 活性的复合物，阻碍了酶与底物的结合，从而影 响酶促反应，这种抑制作用称为竞争性抑制。第二节均相的酶促 反应动力学1.1. 酶促反应的Michaelis-Me
6把反应速率与反应物浓度无关的反应叫做零级反应。v = k [A]0• 反应分子数和反应级数对简单的基元反应来说是 一致的，但对某些反应来说是不一致的。例如：Sucrase• Su
2. 激活剂对酶作用的特点（1）激活剂对酶的作用具有一定的选择 性 ；即一种激活剂对某种酶起激活作用， 而对另一种酶可能起抑制作用 （2）有时金属离子之间也可相互替代 （3）激活离子对于同一种酶，可因浓度 不同而起不同的作用，低浓度激活，高
抑制剂常常与底物分 子的化学结构完全不同 抑制作用不能通过增 加底物浓度来解除17(二)、可逆抑制和不可逆 抑制的动力学鉴别加入一定量的抑制剂，以V～[E]作图不可逆抑制剂：部分酶失活 原点右移， 斜率不变 当[E] 不可逆抑制剂浓度 时
