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miR-7-5p/FGFR4轴与胆囊癌临床病理特征及预后的关系*陈正民① 李乃树① 刘子祥① 姚超① 孙发缔① 许兆龙① 【摘要】 目的：探讨微小核糖核酸-7-5p（miR-7-5p）/成纤维细胞生长因子受体4（FGFR4）轴与胆囊癌病理特征、预后的关系。
方法：选取蚌埠医学院第二附属医院2018年4月—2022年4月收治的胆囊癌患者108例为胆囊癌组，按照2∶1比例选取同期收治的良性胆囊疾病患者54例为良性组。
比较两组miR-7-5p mRNA、FGFR4 mRNA表达水平，分析二者表达与胆囊癌病理特征的关系。
以患者入院第1天作为随访起始日，截至2023年4月30日，记录随访期间的生存率，分析miR-7-5p mRNA、FGFR4mRNA表达与胆囊癌预后的关系。
结果：胆囊癌组miR-7-5p mRNA表达低于良性组，FGFR4 mRNA表达高于良性组，差异均有统计学意义（P<0.05），且胆囊癌患者miR-7-5p mRNA与FGFR4 mRNA表达呈负相关（P<0.05）。
临床分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤最大直径≥3 cm、有淋巴结转移、低分化患者的miR-7-5p mRNA表达水平均低于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤最大直径<3 cm、无淋巴结转移、中-高分化患者，差异均有统计学意义（P<0.05）。
临床分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤最大直径≥3 cm、有淋巴结转移、低分化患者的FGFR4 mRNA表达水平均高于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤最大直径<3 cm、无淋巴结转移、中-高分化患者，差异均有统计学意义（P<0.05）。
miR-7-5p mRNA高表达组生存率高于低表达组，平均生存期长于低表达组，两组生存曲线比较，差异有统计学意义（P<0.05）。
FGFR4 mRNA高表达组生存率低于低表达组，平均生存期短于低表达组，两组生存曲线比较，差异有统计学意义（P<0.05）。
COX回归分析提示，miR-7-5p mRNA表达增高是胆囊癌预后的保护因素，FGFR4 mRNA表达增高是胆囊癌预后的危险因素（P<0.05）。
鹿茸多肽通过SDF-1α/CXCR4轴调控PI3K/AKT信号通路促进下肢动脉硬化性闭塞症大鼠血管新生的作用机制丁爱国1,王雁彬2,李廷荃2,李子娟3,王继尧3,曹佳颖3摘要目的:探索鹿茸多肽通过基质细胞衍生因子(SDF-1α)/趋化因子受体(CXCR4)轴对磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B (AKT)通路促进下肢动脉硬化性闭塞症(PAD)大鼠血管新生的作用机制㊂方法:采用结扎并离断大鼠股动脉及分支造成肢体缺血㊁给予高脂饲料喂养制作大鼠下肢动脉硬化闭塞症模型㊂将100只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为10组,分别为空白组㊁模型组㊁假手术组,鹿茸多肽低剂量组㊁鹿茸多中剂量肽组㊁鹿茸多肽高剂量组㊁抑制剂LY294002组㊁鹿茸多肽低剂量+抑制剂LY294002组㊁鹿茸多肽中剂量+抑制剂LY294002组㊁鹿茸多肽高剂量+抑制剂LY294002组㊂将空白组㊁模型组及假手术组灌胃等容量蒸馏水㊂鹿茸多肽低㊁中㊁高剂量组+抑制剂LY294002组先行腹腔注射再灌胃,于造模完第1天开始给药,每日1次,28d后处死㊂采用流式细胞术检测给药后外周血㊁骨髓中造血干细胞(CD34+细胞)比例;免疫荧光法检测给药后患侧腓肠肌SDF-1α㊁PI3K的阳性细胞数比例㊂结果:造血干细胞(CD34+细胞)比例模型组均显著高于空白组(P<0.05);其中鹿茸多肽低剂量组较鹿茸多肽低剂量+抑制剂LY294002组阳性细胞比例升高,鹿茸多肽中剂量组较鹿茸多肽中剂量+抑制剂LY294002组阳性细胞比例升高,鹿茸多肽高剂量组较鹿茸多肽高剂量+抑制剂LY294002组阳性细胞比例升高(P<0.05);给药组SDF-1α㊁PI3K的阳性细胞数高于模型组及抑制组(P<0.05),鹿茸多肽中剂量组高于鹿茸多肽低剂量组(P<0.05),鹿茸多肽高剂量组高于鹿茸多肽高剂量组+ LY294002组(P<0.05)㊂结论:鹿茸多肽通过SDF-1α/CXCR4轴影响PI3K/AKT信号通路促进了内皮祖细胞的增殖及分化㊁PAD血管新生㊂关键词下肢动脉硬化性闭塞症;鹿茸多肽;内皮祖细胞;血管新生;实验研究d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2024.08.012The Mechanism of Antler Polypeptide Regulating PI3K/AKT Signaling Pathway through SDF-1α/CXCR4Axis Promotes Angiogenesis on Rats with Lower Extremity Arteriosclerotic ObliteransDING Aiguo,WANG Yanbin,LI Tingquan,LI Zijuan,WANG Jiyao,CAO JiayingShuozhou People's Hospital,Shuozhou036000,Shanxi,ChinaCorresponding Author WANG Yanbin,E-mail:****************Abstract Objective:To explore the effect of antler polypeptides on phosphatidylinoinosidine-3-kinase(PI3K)/protein kinase B(AKT) pathway through stromal cell derived factor(SDF-1α)/receptor(CXCR4)axis,and to promote angiogenesis on rats with lower limb arteriosclerotic obliterans(PAD).Methods:The rats model with lower extremity arteriosclerosis obliterans were established by ligation and severing of femoral artery and branches to construct limb ischemia and feeding with high fat diet.One hundred male SD rats were randomly divided into blank group,model group and sham operation group;antler polypeptide low dose group,medium dose antler polypeptide medium dose group,antler polypeptide high dose group,inhibitor LY294002group,LY294002+antler polypeptide low dose group,LY294002+antler polypeptide medium dose group,LY294002+antler polypeptide high dose group.The blank group,model group and sham group were gavaged equal volume of distilled water.LY294002+antler polypeptide low dose group,LY294002+antler polypeptide medium dose group,LY294002+antler polypeptide high dose group were first injected intraperitoneally and then gavaged with intragastric administration,once a day after modeling,and rats,were executed after28days.Flow cytometry was used to detect the proportion of hematopoietic stem cells(CD34+cells)in peripheral blood and bone marrow after administration.The proportion of SDF-1αand PI3K positive cells in gastrocnemius muscle was detected by immunofluorescence assay.Results:The proportion of hematopoietic stem cells(CD34+cells)in model group was higher than that in blank group(P<0.05).The proportion of positive cells in antler polypeptide low dose group was higher than that in LY294002+antler polypeptide low dose group,the proportion of positive cells in antler polypeptide medium dose group was higher than that in LY294002+antler polypeptide medium dose group,and the proportion of positive cells in antler polypeptide high dose group was higher than that in LY294002+antler polypeptide high dose group(P<0.05). The proportion of positive cell number of SDF-1αand PI3K in administration group was significantly higher than that in model group and inhibition group(P<0.05),the antler polypeptide medium dose group was higher than that in LY294002+antler polypeptide medium dose group group,and the antler polypeptide medium dose group was higher than that in antler polypeptide low dose group group(P<0.05),antler polypeptide high dose group was higher than LY294002+antler polypeptide high dose group(P<0.05). Conclusion:Antler polypeptide affected the PI3K/AKT signaling pathway through SDF-1α/receptor(CXCR4)axis thereby promoting the proliferation and differentiation of endothelial progenitor cells,and facilitating the angiogenesis of PAD.Keywords arteriosclerotic obliterans of lower extremity;antler polypeptide;endothelial progenitor cells;angiogenesis;experimental study基金项目国家自然科学基金委员会资助项目(No.81874474);山西省自然基金项目(No.20210302124563);国家中医药管理局中医药领军人才培养项目岐黄学者支持项目作者单位 1.朔州市人民医院(山西朔州036000);2.山西中医药大学附属医院(太原030024);3.山西中医药大学通讯作者王雁彬,E-mail:****************引用信息丁爱国,王雁彬,李廷荃,等.鹿茸多肽通过SDF-1α/CXCR4轴调控PI3K/AKT信号通路促进下肢动脉硬化性闭塞症大鼠血管新生的作用机制[J].中西医结合心脑血管病杂志,2024,22(8):1423-1428.下肢动脉硬化性闭塞症(peripheral artery disease in the lower extremity,PAD)是我国老年人的常见病㊁多发病[1]㊂研究表明,有症状的PAD是全身血管系统硬化的重要标志,在早期以肢体发凉㊁怕冷及间歇性跛行为主[2-3],发展到后期常出现肢体末端坏疽而面临截肢,其病理特点往往表现为动脉粥样硬化导致的动脉狭窄㊁闭塞㊁局部缺血,所以该病治疗集中在缺血部位的血管再通和血管新生方面[4]㊂鹿茸能够补肾㊁填精㊁益髓,其核心成分是鹿茸多肽,探究鹿茸多肽调控内皮祖细胞(EPCs)动员㊁归巢及促进PAD缺血区血管新生的机制意义重大㊂本课题组前期动物实验已经证实,鹿茸能够改善内皮细胞,通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路调控EPCs的动员及归巢,促进PAD大鼠的血管新生[5-7]㊂鹿茸主要成分是鹿茸多肽,鹿茸多肽对成纤维细胞及表皮细胞有显著促进增殖作用,可以加速疮面的愈合,促进其血管内皮细胞增殖分化及迁移[8],对EPCs的特征和鹿茸多肽信号传导途径的充分理解更有利于研究PAD的分子生物学机制㊂本研究旨在分析鹿茸多肽通过基质细胞衍生因子(SDF-1α)/趋化因子受体4(CXCR4)轴对PI3K/AKT通路的影响,探讨促进PAD大鼠血管新生的作用机制㊂1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物100只2月龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,清洁级,体质量250~300g,由山西省中医药研究院提供,实验动物合格证号:1103221911003889[9]㊂1.1.2饲料制备高脂饲料:80.3%基础饲料+15%猪油+0.5%淡黄色胆酸钠+0.2%丙硫氧嘧啶+4%胆固醇㊂1.1.3药物与试剂鹿茸多肽采用马鹿茸多肽,鹿茸多肽冻干粉购于陕西斯诺特生物科技技术有限公司,储存于室温,鹿茸多肽冻干粉溶于去离子水,配置为浓度4.5mg/mL的溶液,置于EP管中,储存在2~6ħ冰箱中[9];PI3K 抑制剂LY294002采购于美国辉瑞公司,用非质子溶剂二甲基亚砜(DMSO)配置母液(10mg PI3K抑制剂溶于6.5075mL二甲基亚砜中)在-20ħ冰箱保存,每日所配置的当日所需工作液由10%母液+40% PEG300+5%Tween-80+45%生理盐水组成,即用即配[9];维生素针剂D3购于哈尔滨摩天农科兽药有限公司;造血干细胞CD34抗体及同型对照抗体购于BD公司;SDF-1α㊁PI3K购于英国Abcam公司㊂1.1.4仪器德国EPPENDORF移液器;电子天平购于瑞士METTER公司;中国中衫金桥有限公司微量加样吸头;法国Froilabo烘箱;日本OLYMPUS显微镜;脱水机㊁包埋机及冻台购于武汉俊杰电子公司;病理切片机购于上海徕卡科技公司;烤箱㊁微波炉及冰箱购于美的电器制造有限责任公司;流式细胞仪购于美国贝克曼库尔特公司;恒温水浴箱购于江苏太仓医用仪器厂;高速搅拌器为德国Fluko公司㊂1.2实验方法1.2.1分组按随机数字表法将100只大鼠分为10组:空白组㊁模型组㊁假手术组㊁给药组(包括鹿茸多肽低剂量组㊁鹿茸多肽中剂量组㊁鹿茸多肽高剂量组㊁鹿茸多肽低剂量+抑制剂LY294002组㊁鹿茸多肽中剂量+抑制剂LY294002组㊁鹿茸多肽高剂量+抑制剂LY294002组)㊁抑制剂LY294002组,每组10只㊂1.2.2PAD模型制作将SD雄性大鼠,腹腔麻醉(5%水合氯醛溶液7mL/kg),取平卧位,固定于手术台中央,左腹股沟区域碘消毒,纵向切口约1.5cm,暴露血管鞘,分离其股动脉及其分支,齿镊钳夹约30s,结扎并离断左侧股动脉的分支;用0号线缝合皮肤及皮下组织,在SD大鼠背部皮下注射生理盐水10mL补液抗休克治疗,观察大鼠各项生命体征,平稳后放回鼠笼;肌肉注射30ˑ104U 青霉素3d,预防感染;饲料为高脂饲料并且喂养12周[8-9];给予维生素D3(30ˑ104U/kg),右下肢肌肉注射,每月1次[10]㊂1.2.3给药方法鹿茸多肽低㊁中㊁高剂量组分别灌胃给药0.143 g/(kg㊃d)㊁0.286g/(kg㊃d)㊁0.572g/(kg㊃d)㊂抑制剂LY294002组腹腔注射LY2940021mg/(kg㊃d);空白组㊁模型组和假手术组灌胃等容量蒸馏水;鹿茸多肽低中㊁高剂量+抑制剂LY294002组先进行腹腔注射然后再灌胃;在造模后的第1天给药,连续28d,每日1次,28d后处死大鼠[9]㊂1.2.4采集标本及处理方法将大鼠麻醉,用小镊子摘去其中一只眼球,收集外周血到微量离心管(EP)管中;取大鼠结扎及分离后术侧的下肢股骨,用注射器抽吸磷酸缓冲盐溶液(PBS)反复冲洗下肢股骨骨髓腔,过滤㊁离心及吹打后制成密度均匀的骨髓悬液,收集到EP管中,温度调至-70ħ冻存[9]㊂1.2.5检测指标1.2.5.1 一般状态观察SD 大鼠的一般状态,包括大鼠的精神状态和毛色,大鼠的皮温和活动灵敏度等㊂1.2.5.2 大鼠血脂水平分别于手术后第6周㊁12周时测量与记录空白组和给药组大鼠体质量,用乙醇棉球擦拭固定好的大鼠尾部,将尾静脉血抽取作为标本,用生化分析仪检测空白组和给药组低密度脂蛋白(LDL )㊁总胆固醇(TC )㊁三酰甘油(TG )水平[9]㊂1.2.5.3 采用流式细胞术检测外周血㊁骨髓中CD 34+细胞比例将每只大鼠各设置5个测定管,2个单染管及同型对照管,另加1个三染测定管,在抗凝管中加入红细胞裂解液5mL ,放入37ħ恒温水温箱中,避光孵育10min ,1500r/min 离心5min ,弃上清,在抗凝管中加红细胞裂解液5mL ,再次放入37ħ恒温水温箱中避光孵育10min ,1500r/min 离心5min ,弃上清后加PBS 350μL ,将每个样品分装到5个1.5mL 的离心管中,每管给予50μL ,按CD 34检测㊁CD 34对照及三色检测顺序标明各管,将各管中加入所对应的抗体,放入4ħ恒温水温避光孵育20~25min ,各管加1mL PBS 缓冲液洗涤1次,再以1500r/min 离心5min ,弃上清液,加入PBS 缓冲液定容至500μL ,样本按CD 34检测㊁CD 34对照㊁三色检测移至流式管中备用,最后将样品重悬,按CD 34检测㊁CD 34对照㊁三色检测顺序上机检测,软件分析各管双阳性细胞所占比例[12]㊂1.2.5.4 免疫荧光技术检测下肢腓肠肌中SDF -1α㊁PI3K 的阳性细胞数将样本涂片后用多聚甲醛固定10min ;PBS 溶液微振荡洗涤5min ˑ2次,加0.4%裂解缓解液T riton -X100破膜5~10min ,然后用PBS 微振荡洗涤3min ˑ3次;再用1%PBS 溶液封闭30min 至1h ;给予0.5%PBS 溶液稀释一抗,比例为1ʒ100;4ħ过夜;冰箱取出后需37ħ复温45min ;或在室温下2~3h ;或37ħ1h ,用0.5%PBS 溶液稀释二抗,比例为1ʒ400;室温30min 至1h ;孵育后洗涤5min ˑ3次;荧光染料DAPI 原液为1g/mL ,将其稀释为1ʒ1000浓度,快速染色10s ,再用蒸馏水冲洗和用防淬灭的封片剂封片,在荧光显微镜高倍视野下观察[9]㊂1.3 统计学处理应用SPSS 25.0软件进行统计分析,定量资料符合正态分布且方差齐时用独立样本t 检验,以均数ʃ标准差(x ʃs )表示;不符合正态分布时用秩和检验,方差不齐时用校正t 检验㊂以P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结 果2.1 大鼠一般状态空白组和假手术组大鼠毛色光泽,活动灵敏,下肢温度正常;模型组和给药组大鼠毛色暗淡,活动欠灵敏,下肢温度降低㊂2.2 空白组与给药组大鼠血脂水平变化空白组的LDL ㊁TC ㊁TG 在实验第6周与第12周比较,差异均无统计学意义(P >0.05)㊂给药组各时期TC 及LDL 与空白组比较,差异有统计学意义,LDL第12周较第6周上升(P <0.05)㊂详见表1㊂表1 空白组与给药组TG ㊁TC ㊁LDL 水平比较(x ʃs )单位:mmol/L组别只数 LDL 第6周第12周TC 第6周第12周TG 第6周第12周空白组100.21ʃ0.050.23ʃ0.030.65ʃ0.061.95ʃ0.230.62ʃ0.030.65ʃ0.06给药组100.46ʃ0.03①0.91ʃ0.02①②1.55ʃ0.20①2.86ʃ0.35①1.84ʃ0.053.26ʃ0.54①注:与空白组同期比较,①P <0.01;与同组第6周比较,②P <0.05㊂2.3 流式细胞术检测给药后外周血和骨髓中CD 34+细胞比例与空白组比较,模型组外周血和骨髓中CD 34+阳性细胞比例升高;与鹿茸多肽低剂量+抑制剂LY294002组比较,鹿茸多肽低剂量组㊁鹿茸多肽中剂量组㊁鹿茸多肽中剂量+抑制剂LY294002组㊁鹿茸多肽高剂量组㊁鹿茸多肽高剂量+LY294002组外周血和骨髓中CD 34+阳性细胞比例升高;鹿茸多肽中剂量组较鹿茸多肽中剂量+抑制剂LY294002组外周血和骨髓中CD 34+阳性细胞比例升高;鹿茸多肽高剂量组㊁鹿茸多肽高剂量+抑制剂LY294002组较鹿茸多肽中剂量+LY294002组外周血和骨髓中CD 34+阳性细胞比例升高;鹿茸多肽高剂量组较鹿茸多肽高剂量+抑制剂LY294002组外周血和骨髓中CD 34+阳性细胞比例升高;与模型组比较,假手术组㊁给药组外周血和骨髓中CD 34+阳性细胞比例升高㊂详见表2㊂表2各组大鼠外周血和骨髓中CD34+阳性细胞比例比较(xʃs)组别只数外周血骨髓空白组10 1.93ʃ0.470.97ʃ0.24假手术组10 1.97ʃ0.24⑤0.98ʃ0.13⑤模型组10 2.87ʃ0.06① 1.57ʃ0.06①鹿茸多肽低剂量+抑制剂LY294002组10 3.70ʃ0.12①⑤ 1.64ʃ0.15①⑤鹿茸多肽低剂量组10 4.17ʃ0.19①②⑤ 2.21ʃ0.15①②⑤鹿茸多肽中剂量+抑制剂LY294002组10 4.77ʃ0.03①②⑤ 2.97ʃ0.04①②⑤鹿茸多肽中剂量组10 5.17ʃ0.21①②③⑤ 3.17ʃ0.18①②③⑤鹿茸多肽高剂量+抑制剂LY294002组10 6.39ʃ0.17①②③⑤ 3.55ʃ0.13①②③⑤鹿茸多肽高剂量组107.63ʃ0.27①②③④⑤7.92ʃ0.36①②③④⑤抑制剂LY294002组10 2.54ʃ0.24① 1.25ʃ0.15①注:与空白组比较,①P<0.05;与鹿茸多肽低剂量+抑制剂LY294002组比较,②P<0.05;与鹿茸多肽中剂量+抑制剂LY294002组比较,③P<0.05;与鹿茸多肽高剂量+抑制剂LY294002组比较,④P<0.05;与模型组比较,⑤P<0.05㊂2.4免疫荧光法检测给药后腓肠肌中SDF-1α㊁PI3K 阳性细胞数与抑制剂LY294002组比较,模型组及给药组抑制剂LY294002组SDF-1α㊁PI3K阳性细胞数增加(P< 0.05);与模型组比较,给药组㊁模型组SDF-1α㊁PI3K阳性细胞数增加(P<0.05);与鹿茸多肽低剂量组比较,鹿茸多肽中剂量组㊁鹿茸多肽中剂量+抑制剂LY294002组㊁鹿茸多肽高剂量组㊁鹿茸多肽高剂量+抑制剂LY294002组较鹿茸多肽低剂量组阳SDF-1α㊁PI3K阳性细胞数增加(P<0.05)㊂详见表3及图1㊁图2㊂表3各组大鼠腓肠肌中SDF-1α㊁PI3K阳性细胞数比较(xʃs)组别只数SDF-1αPI3K空白组10 1.36ʃ1.02 3.21ʃ2.51假手术组109.11ʃ0.0610.03ʃ0.11抑制剂LY294002组1025.15ʃ2.0617.52ʃ1.36模型组1027.22ʃ3.17①17.46ʃ2.02①鹿茸多肽低剂量组1038.03ʃ1.24①②32.92ʃ2.36①②鹿茸多肽低剂量+抑制剂LY294002组1027.55ʃ2.13①②53.21ʃ3.45①②鹿茸多肽中剂量组1049.17ʃ2.21①②③41.10ʃ2.16①②③鹿茸多肽中剂量+抑制剂LY294002组1042.72ʃ2.03①②③37.91ʃ3.24①②③鹿茸多肽高剂量组1053.21ʃ3.45①②③62.86ʃ3.19①②③鹿茸多肽高剂量+抑制剂LY294002组1049.30ʃ2.05①②③54.78ʃ2.12①②③注:与抑制剂LY294002组比较,①P<0.05;与模型组比较,②P<0.05;与鹿茸多肽低剂量组比较,③P<0.05㊂图1免疫荧光法检测各组腓肠肌中SDF-1α阳性细胞数图2免疫荧光法检测各组腓肠肌中PI3K阳性细胞数3讨论PAD的病理特点往往表现为动脉狭窄㊁闭塞㊁局部缺血,所以该病治疗集中在缺血部位的血管再通和血管新生方面[9]㊂外科手术和介入难以从根本上解决术后再狭窄和术后血管远期通畅率㊂有文献报道,在膝上股-腘动脉人工血管移植后3年的通畅率为60%~ 80%,膝下3年通畅率仅20%~30%,并且外科治疗在基层医疗机构推广应用困难[10]㊂血管新生的研究为临床治疗PAD提供了新的思路,是指通过药物促进缺血组织在原有微血管基础上形成新毛细血管与原有血管网相交汇,通过加速和增加侧支动脉发育来治疗血管狭窄㊁阻塞引起的缺血[11]㊂EPCs源于骨髓,具有调控缺血区定向归巢的作用,成熟的内皮细胞与血管新生有密切关系,直接参与血管新生㊂中药干预在治疗PAD方面有极大潜力㊂鹿茸能够补肾㊁填精㊁益髓,其核心成分是鹿茸多肽,探究鹿茸多肽调控EPCs 动员㊁归巢及促进PAD缺血区血管新生的机制意义重大㊂PAD病本在肾,病位在脉,补肾是关键㊂中医学将PAD归为 脉痹 阴疽 脱疽 范畴,其病本在肾,病位在脉㊂本病的发生多与肾虚血瘀有关㊂人到老年,随着年龄的增长,肾精渐亏,肾阳渐衰,导致气血亏虚,运行无力,脉络不通,筋脉痹阻,肢体缺乏血液的濡养,故出现发凉㊁麻木㊁间歇性跛行等㊂‘景岳全书“: 血即精之属也 ,精髓是化生血液的基本物质㊂清代王士雄‘温热经纬“曰: 人体血生于脾,藏于肝,脉源于肾而主于心 ,也就是说其资始于肾,即脉形成的物质基础是肾精,所以脉络生成受到 肾 的调控㊂鹿茸补肾生髓,鹿茸中含有大量的氨基酸㊁蛋白质㊁糖类化合物㊁多肽,其中鹿茸多肽为其主要成分[12]㊂鹿茸多肽含有许多细胞生长因子和内生的抗氧化酶,如血管内皮生长因子(VEGF)㊁谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和过氧化氢酶(CAT)等多种在疾病治疗中起主要作用的生物活性成分[13-15]㊂SDF-1α/CXCR4轴在EPCs归巢到缺血组织过程中起着重要作用㊂基质细胞衍生因子-1α(stromal cell derived factor-1,SDF-1α),属于CXC型趋化因子,参与缺血诱导的EPCs动员及介导EPCs在缺血组织中趋化和归巢[16]㊂CXCR4作为SDF-1α的唯一受体,是一种具有7个跨膜结构域的G蛋白偶联受体[17],研究证明,缺血组织SDF-1α表达增强,进而导致外周血SDF-1α水平升高,组织缺血同时诱导骨髓SDF-1α表达下调,骨髓对EPCs的滞留作用减弱,外周血对EPCs 的趋化作用增强,从而导致骨髓源性EPCs动员到外周血,参与缺血组织新生血管的形成[18]㊂PI3K/AKT信号转导通路处于SDF-1α/CXCR4轴的下游,调控EPCs的迁移及归巢,抑制受体CXCR4可显著降低SDF-1α诱导的骨髓EPCs归巢到下肢缺血区域的数量[19-20]㊂鹿茸多肽促进外周血及骨髓EPCs缺血区血管新生㊂本实验通过SDF-1α/CXCR4轴调控PI3K/AKT信号通路促进EPCs的动员及归巢,促进血管新生㊂因此,本实验检测CD34+阳性细胞比例㊁SDF-1α㊁PI3K的阳性细胞数,结果显示CD34+细胞比例模型组高于空白组(P<0.05);其中鹿茸多肽低剂量组较鹿茸多肽低剂量+抑制剂LY294002组阳性细胞数升高,鹿茸多肽中剂量组较鹿茸多肽中剂量+抑制剂LY294002组阳性细胞数升高,鹿茸多肽高剂量组较鹿茸多肽高剂量+抑制剂LY294002组阳性细胞数升高(P<0.05);给药组SDF-1α㊁PI3K的阳性细胞数数高于模型组及抑制剂组(P<0.05),鹿茸多肽中剂量组高于鹿茸多肽低剂量组(P<0.05),表明大鼠下肢动脉硬化闭塞缺血激活了SDF-1α/CXCR4轴从而调控PI3K/AKT信号通路,在鹿茸多肽干预下促进了EPCs的增殖及分化,影响下肢动脉硬化闭塞症大鼠,促进PAD大鼠血管新生[9]㊂综上所述,鹿茸多肽可以促进PAD大鼠血管新生,通过SDF-1α/CXCR4轴调控PI3K/AKT信号通路促进了EPCs的增殖及分化,鹿茸多肽提高外周血及骨髓CD34+细胞比例,给药后提高腓肠肌中SDF-1α㊁PI3K阳性细胞数比例㊂参考文献:[1]徐义岩,王海洋.下肢动脉硬化闭塞症的治疗进展[J].医学论述,2020,26(24):4892-4895.[2]TICKNER A,KLINGHARD C,ARNOLD J F,et al.Total contact castuse in patients with peripheral arterial disease:a case series andsystematic review[J].Wounds,2018,30(2):49-56.[3]GIANNOPOULOS G,ANGELIDIS C,VOGIATZI G,et al.Antioxidant treatment in peripheral 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氯化锂调控人肺腺癌A549细胞增殖及侵袭转移的体外研究林高阳;徐克【摘要】目的:探讨氯化锂对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭转移能力的影响及其调控机制.方法:应用MTT法、平板克隆形成实验评价细胞生长活力和增殖的生物学特征变化;划痕实验、Transwell小室细胞体外侵袭实验检测肿瘤细胞迁移、侵袭能力;Western-blotting法检测肿瘤细胞GSK-3β、P-GSK-3β和β-catenin的表达水平变化.结果:MTT法显示细胞分化增殖能力随氯化锂浓度的增加受到明显抑制,具有浓度依赖性变化.同时,随着检测时间的延长,在低浓度药物作用下(＜10mmol/L)细胞出现增殖增强现象,可能存在药物时间耐受;平板克隆形成实验显示细胞增殖受到不同浓度氯化锂的抑制,增殖能力的变化亦具有氯化锂浓度依赖性;划痕实验、Transwell实验证实:氯化锂处理细胞后,细胞迁移、侵袭能力下降;Western-blotting法显示:氯化锂处理肺腺癌A549细胞后,GSK-3β总蛋白表达下降、P-GSK-3β表达增加,β-catenin总蛋白表达增多.结论:高浓度的氯化锂能够抑制肺腺癌A549细胞的增殖和侵袭迁移,氯化锂抑制肺腺癌A549细胞增殖和侵袭迁移可能是通过GSK-3β/β-catenin信号通路实现的.【期刊名称】《天津医科大学学报》【年(卷),期】2015(021)001【总页数】6页(P9-13,21)【关键词】肺腺癌;氯化锂;迁移侵袭;GSK-3β/β-catenin通路【作者】林高阳;徐克【作者单位】天津医科大学总医院肺部肿瘤外科,天津市肺癌研究所,天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室,天津300052;天津医科大学总医院肺部肿瘤外科,天津市肺癌研究所,天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室,天津300052【正文语种】中文【中图分类】R734.2肺癌占全球恶性肿瘤发病率的12.7%，死亡率的18.2%，均高居首位[1]。
项目名称：白藜芦醇促髓母细胞瘤细胞凋亡中p53作用初探来源：第十一届“挑战杯”国赛作品小类：生命科学大类：自然科学类学术论文简介：采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR），免疫细胞化学和蛋白印迹（western-blotting)方法检测白藜芦醇对髓母细胞瘤细胞系中抑癌基因p53表达的影响，探讨p53基因在白藜芦醇诱导凋亡中的作用。
结果表明白藜芦醇能显著诱导髓母细胞瘤细胞系UW228-3的凋亡，同时能在转录后水平上调p53基因的表达，并且使p53蛋白在核内的表达增加。
结果提示：在白藜芦醇诱导该细胞凋亡可能与...(查看更多)详细介绍：依托单位相关课题研究的前期工作表明，具有抗肿瘤、抗炎等多种生物学活性的多酚类化合物白藜芦醇能显著诱导髓母细胞瘤细胞的凋亡。
在探讨白藜芦醇诱导凋亡的机制中我们选取了p53这种重要的抑癌基因作为主要的研究对象。
一方面是由于该基因在约一半的肿瘤中存在异常。
另一方面p53在凋亡中处于重要的枢纽位置，多条信号通路能通过作用到p53而对细胞凋亡产生影响，同时作为转录因子p53又能通过调控多种靶基因的表达而对细胞周期的运转，细胞凋亡等重要的生物学过程产生影响。
目前有关髓母细胞瘤发生发展中p53作用的结果p53的变化呈现多样性（表达缺失，基因突变或功能受抑制等）。
由于髓母细胞瘤的异质性特点，不同肿瘤细胞系所得的结果也不尽相同。
而目前尚无有关白藜芦醇促UW228-3细胞系凋亡中p53的变化及其调控机制的报道。
阐明相关分子机制将对白藜芦醇这种安全而具有多种有益作用的药物的临床应用提供重要的理论依据。
通过实验发现，白藜芦醇处理前后均能检测到p53的转录而且表达水平无显著差异，表明在该细胞系中部存在基因的缺失。
同时由于白藜芦醇能显著上调UW228-3细胞中p53蛋白水平，这表明白藜芦醇可能主要是通过上调转录后水平p53的表达而诱导髓母细胞瘤的凋亡。
但尚需相关实验进一步证实。
可以采用RNA干扰的方法使p53基因沉默，然后再采用流式细胞仪等方法检测细胞凋亡与否及p53下游相关基因的改变。
基于网络药理学、分子对接、实验研究探讨白屈菜治疗鼻咽癌的物质基础及潜在机制作者：陈思睿吴天鸿刘洁张文青姚敬心何迎春史红健王贤文范婧莹来源：《湖南中医药大学学报》2024年第02期〔摘要〕目的运用网络药理学和分子对接技术预测白屈菜抗鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）的作用靶点和机制，并通过实验验证主要活性成分对NPC细胞增殖和凋亡的影响。
方法借助在线数据平台TCMSP、ETCM和BATMAN-TCM检索白屈菜的化学成分和作用靶点。
通过 GEO数据库检索NPC相关靶点，生信在线工具分析白屈菜与NPC的交集靶点。
使用STRING构建共同靶点的PPI网络，运用Cytoscape 3.7.1获得核心靶点。
通过R软件编程进行 GO 功能富集分析和KEGG通路富集分析。
分子对接分析核心靶点与主要活性成分之间的结合情况。
实验验证：（1）将5-8F细胞分为溶剂对照组、血根碱（2.5 μmol·L-1、5 μmol·L-1）组、白屈菜红碱（2.5 μmol·L-1、5 μmol·L-1）组、顺铂4 μg·mL-1组。
MTT检测白屈菜主要活性成分对NPC细胞增殖的影响。
（2）将5-8F细胞分为溶剂对照组、血根碱5μmol·L-1组、白屈菜红碱5 μmol·L-1组、顺铂4 μg·mL-1组；Annexin-V FITC/PI双荧光染色法检测细胞凋亡；Western blot检测白屈菜主要活性成分对NPC细胞增殖、凋亡、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）和磷脂酰肌醇三激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）信号通路关键蛋白的影响。
结果检索得到白屈菜37个主要活性成分和1 419个作用靶点。
- 7 -pancreatic cancer cell migration and Gemcitabine resistance[J].Am J Gastroenterol，2020，115（1）：S57-S58.[18]董庆旭，赵郑莉.成纤维细胞生长因子受体4基因沉默对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制[J].解剖学杂志，2021，44（4）：312-318.[19] XIN L，LIU L，LIU C，et al.DNA-methylation-mediatedsilencing of miR-7-5p promotes gastric cancer stem cell invasionvia increasing Smo and Hesl[J].J Cell Physiol，2020, 235（3）：2643-2654.[20]李娜，张哲莹，朱会芳，等.miR-7-5p 和miR-152-3p 联合调控Wnt/β-catenin 通路对乳腺癌细胞上皮-间质转化及化疗耐药的影响[J].临床与实验病理学杂志，2021，37（7）：765-770.（收稿日期：2023-08-14） （本文编辑：陈韵）①江西省瑞金市人民医院 江西 瑞金 342500通信作者：钟文娟人干扰素α2b阴道泡腾胶囊与微波疗法对子宫颈炎伴高危型人乳头瘤病毒感染患者炎症因子的影响钟文娟①【摘要】 目的：探究人干扰素α2b 阴道泡腾胶囊+微波疗法对子宫颈炎伴高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染患者炎症因子的影响。
方法：选择瑞金市人民医院2021年6月—2022年6月接收的子宫颈炎伴HR-HPV 感染患者60例作为研究对象。
将患者随机分为两组：A 组（n =30）接受微波疗法，B 组（n =30）接受人干扰素α2b 阴道泡腾胶囊+微波疗法。
比较两组疗效、病毒载量、炎症因子水平、免疫功能指标及不良反应发生率。
结果：与A 组相比，B 组治疗后白细胞介素-12（IL-12）、白细胞介素-4（IL-4）、HR-HPV 病毒载量均显著更低（P <0.05）。
