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第3章 实验动物微生物质量控制

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实验动物学 第三章

实验动物学 第三章

四、 无菌动物 （Germ free animals, GF）
无菌动物是指体内、外无任何可检测出的活 的微生物和寄生虫的动物。来源于无菌手术剖腹 取胎，饲养在无菌隔离器内，人工哺乳或保姆代 养培育而成。 悉生动物（Gnotobiotes animals, GA）体内 携带有已知微生物的动物。这种动物来源于无菌 动物，人为的投给已知的单菌、双菌、三菌或多 菌。这些均为已知菌，与无菌动物一样，饲养在 隔离器中。
第三章 实验动物 微生物学质量控制
实验动物微生物学质量控制是实验动物 标准化的主要内容之一。 实验动物按微生物学质量控制标准或微 生物净化程度，目前我国将实验动物分 为普通级动物(CV)、清洁级动物(CL)、 无特定病原体动物(SPF)、无菌动物(GF), 其中包括悉生动物(GA)。
一、 普通动物 （Conventional animals,CV）
普通级实验动物（一级实验动物）是在微 生物学控制上，要求最低的动物，它要求不携 带人畜共患病和动物烈性传染病的病原。普通 级实验动物（主要指大、小鼠）对实验结果反 应性较差，因而国际上普遍认为仅可作生物医 学示教之用，或作某些科学研究为探索方法而 从事的予试验之用，不可供科研、生产和检定 之用。
饲养管理要求：
清洁级实验动物（二级实验动物）除普通级动物应 排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究 干扰大的病原。 清洁级实验动物是根据我国国情而 设定的等级动物。目前在我国已成为适用于科研的 标准的实验动物，其种群来源于SPF动物或剖腹产 动物。 清洁级动物比普通级动物要求排除的微生物和 寄生虫多，但比SPF动物少。清洁级动物除肉眼观 察无病外，尸体解剖时主要脏器、组织无论是眼观 还是病理组织切片均没有病变。
目前国际上对SPF动物的要求不同，质量标 准也不一样。部分学者认为某种实验动物没有某 种病原体，不影响其实验要求就可称为SPF动物， 另有学者认为必须将常见的病原体全部排除才算 是真正的SPF动物。前者要求太低，后者要求太 高。结合我国的实际情况以既排除对动物群有危 害的病原体，又排除对动物实验有干扰的微生物 和寄生虫为原则。由此可见，我国的SPF动物微 生物学质量控制标准高于国外的控制标准。 国际上公认SPF动物适用于所有科研实验， 是目前国际标准级别的实验动物，各种疫苗生产 所采用的应为SPF动物。

第三章实验动物标准化

第三章实验动物标准化

封闭群动物的遗传学特性
• 1、基因库大，杂合率高
封闭群是一种长期与外界隔离，雌雄个体间能够随即交 配的动物群，其遗传组成比较接近自然状态下的动物群体 结构，具有类似于人类群体遗传异质性的遗传组成。其基 因的杂合率较高，个体间的基因型不一致，因此，群体基 因库较近交系大。
封闭群动物的遗传学特性
• 2、群体基因频率基本保持稳定 封闭群动物不从其外部引入新基因，
4、长期的遗传稳定性
近交系动物的基因高度纯合，坚持近亲交配则增加其在特定部位纯合 子，减少了遗传变异，使动物的基因型可长期处于稳定状态，导致近交系动 物长期遗传稳定性。近交系动物的遗传变异仅发生在少量残留杂合基因，或 基因的突变，而这种机率非常低。
近交系动物的特性
5、个体性 每个品系在遗传上都是独特的，有些品系可能发生
• 间交：自交或称互交（Intercrosses）：亲代为两个杂合子交配。
近交系 Inbred strain
• 概念：近交系动物也叫纯系动物，是相同基因类型动物中 最主要的一种。它是经连续20代以上的全同胞兄妹或亲子 交配培育而成，且品系内所有个体都可追溯到起源于20代 或以后的一对共同祖先的遗传群体。
近交系动物的特性
7、 背景资料和数据完整性
近交系动物在培育和保种过程中都有详细记录，一些常用品系 具有相当数量的背景资料；有大量文献记载了各种品系的生物学特性。 这些有关品系的特征、寿命和自发性疾病等资料，对今后的研究工作 的设计和动物实验结果的解释提供便利条件。
8、可分辨性
每个近交系都有自己独特的生化标志基因。研究者在掌握了遗 传质量监测方法后，通过建立品系的遗传概貌，和定期的遗传检测， 可以分辨混杂在一起的两个，或两以上外貌近似的品系动物。

实验动物管理条例(2017年版)

实验动物管理条例(2017年版)

实验动物管理条例（1988年10月31日国务院批准1988年11月14日国家科学技术委员会令第2号发布根据2011年1月8日《国务院关于废止和修改部分行政法规的决定》第一次修订根据2013年7月18日《国务院关于废止和修改部分行政法规的决定》第二次修订根据2017年3月1日《国务院关于修改和废止部分行政法规的决定》第三次修订）第一章总则第一条为了加强实验动物的管理工作，保证实验动物质量，适应科学研究、经济建设和社会发展的需要，制定本条例。

第二条本条例所称实验动物，是指经人工饲育，对其携带的微生物实行控制，遗传背景明确或者来源清楚的，用于科学研究、教学、生产、检定以及其他科学实验的动物。

第三条本条例适用于从事实验动物的研究、保种、饲育、供应、应用、管理和监督的单位和个人。

第四条实验动物的管理，应当遵循统一规划、合理分工，有利于促进实验动物科学研究和应用的原则。

第五条国家科学技术委员会主管全国实验动物工作。

省、自治区、直辖市科学技术委员会主管本地区的实验动物工作。

国务院各有关部门负责管理本部门的实验动物工作。

第六条国家实行实验动物的质量监督和质量合格认证制度。

具体办法由国家科学技术委员会另行制定。

第七条实验动物遗传学、微生物学、营养学和饲育环境等方面的国家标准由国家技术监督局制定。

第二章实验动物的饲育管理第八条从事实验动物饲育工作的单位，必须根据遗传学、微生物学、营养学和饲育环境方面的标准，定期对实验动物进行质量监测。

各项作业过程和监测数据应有完整、准确的记录，并建立统计报告制度。

第九条实验动物的饲育室、实验室应设在不同区域，并进行严格隔离。

实验动物饲育室、实验室要有科学的管理制度和操作规程。

第十条实验动物的保种、饲育应采用国内或国外认可的品种、品系，并持有效的合格证书。

第十一条实验动物必须按照不同来源，不同品种、品系和不同的实验目的，分开饲养。

第十二条实验动物分为四级：一级，普通动物；二级，清洁动物；三级，无特定病原体动物；四级，无菌动物。

实验动物的微生物控制

实验动物的微生物控制
Materials and equipment can serve as a vector
in the contamination process.
Food and bedding can become contaminated
by wild rodents at times of production, harvesting and storage.
Microorganisms may be carried in the
hair, on the hands and on the clothing of personnel who have been in contact with infected animals.
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Materials and equipment
1. 体外寄生虫（节肢动物） 病原：Ectoparasites（虱子、 跳蚤、螨）
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2. 弓形虫病
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1.感染弓形虫多数为隐性感染。
2.主要危害眼和N系统 3.孕妇常有流产，早产，死胎或畸胎。 4.幼龄大鼠常导致致死性肺炎。
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第三章实验动物的微生物控制
第一节 微生物对实验动物的影响
第二节
Water, air, cages, and surgical equipment can
also become contaminated source for animals.
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Biological materials
The use of biological materials
such as cells, serum, ES cells, and
microorganisms.
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实验动物学第三章 实验动物的微生物和寄生虫学控制

实验动物学第三章 实验动物的微生物和寄生虫学控制
2018/4/5 20
四、无菌动物的生产与维持
（一）无菌动物的获得 1.预产期判断 2.剖宫产术 3.人工哺乳/奶妈代乳 （二）无菌动物质量检测 1.无菌隔离器内环境检测 2.无菌隔离器内动物检测
2018/4/5
ห้องสมุดไป่ตู้
21
第三节
实验动物的微生物学和寄 生虫学质量监测
一、进行微生物学监测的意义
所谓微生物监测是指用微生物学的方法对不同 等级的实验动物进行定期的抽样检查，以确认该 等级动物是否感染了某些病原体。因此，微生物 学监测是一个群体的、流行病学上的概念，它是 通过从一个群体中定期抽取少量样本进行检测， 从而判断整个群体中某一疾病流行情况的一种方 法。
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第二节
无菌级动物和悉生动物
一、无菌级动物和悉生动物的由来和发展 悉生动物：广义的悉生动物包括无菌动物和已知菌动物。 • 最初是研究微生物和动物（人）之间的依存关系而建立发 展起来的。 发展史： 1. 1895年-1910年：解决了动物可在无菌状态下生存的问题。 2. 1910年-1940年：因技术问题没有解决，悉生生物研究进 展缓慢。 3. 1940年- ：技术问题解决，悉生动物研究进展迅速。
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不同微生物级别动物用于实验的比较
项目 传染病 寄生虫 实验结果 应用动物数 GF/GN动物 无 无 准确 少 SPF动物 无 无 准确 少 CV动物 有或可能有 有或可能有 有疑问 多
统计学价值
长期实验 实验中死亡率
好
可能好 很低
可能好
可能好 低
不准确
困难 高
长期实验存活率
实验的正确设计 实验结果的统计价值
不同级别的动物必须饲养在相应的设施环境中，并有相应的饲养管理操作规程， 需要定期监测，保证其携带的微生物和寄生虫符合其等级标准。

第三章实验动物的微生物学分类

第三章实验动物的微生物学分类

三、传染病的防疫原则及措施
• 传染病发生的条件： 传染源、传播途径和易感动物。
预防和控制措施 1. 预防措施 1）从有资质的实验动物供应商处采购动物 2）制定科学的饲养管理和操作规程,严格按操作 规程进行饲养管理和动物实验 3）定期进行微生物学监测 4）彻底消灭饲养室内外的野鼠 5）大动物接种疫苗 2. 控制措施 1）重要传染病感染要及时捕杀、消毒、隔离 2）大动物隔离治疗 3）不明死亡原因要剖检明确诊断
1. 病毒性疾病
3. 流行性出血热病毒感染（Epidemic hemorrhagic fever virus infection） • 病原学：流行性出血热病毒（Bunyaviridae, Hantavirus) • 流行病学： 传染源：带毒野鼠和实验大鼠 传播途径：咬伤接触传播，气溶胶吸入 易感动物：大鼠 • 临床症状：无症状，人感染后得流行性出血热 • 诊断：血清学检查，病毒分离 • 预防和控制： 预防：饲养区内外捕杀野鼠，不从无生产许可证单位购买动物。 控制：捕杀血清学检查阳性大鼠，消毒、隔离
不同微生物级别动物用于实验的比较
项目 传染病 寄生虫 GF/GN动物 无 无 SPF动物 无 无 CV动物 有或可能有 有或可能有
实验结果
应用动物数 统计学价值
准确
少 好
准确
少 可能好
有疑问
多 不准确
长期实验
实验中死亡率 长期实验存活率 实验的正确设计 实验结果的统计价值
可能好
很低 约100% 可能 很高
专门训练
高
较高
CL
CV
半屏障系 统
开放系统
亚高效过 滤
不处理
直接接触
直接接触
一般
一般
较低

实验动物微生物寄生虫学质量控制

实验动物微生物寄生虫学质量控制

清洁与卫生
定期清洁饲养环境和设施， 保持干燥、卫生，减少病 原微生物的滋生和传播。
04
实验动物微生物寄生虫学质量控制的方法与技 术
常规的微生物寄生虫学检测方法
细菌学检测
通过采集实验动物的血液、组织、 分泌物等样本，进行细菌培养、 分离和鉴定，以确定是否存在细 菌感染。
寄生虫学检测
采用显微镜观察、虫卵计数、虫体 鉴定等方法，对实验动物的粪便、 组织等样本进行寄生虫检测。
真菌学检测
通过培养、显微镜观察等方法，对 实验动物样本中的真菌进行分离和 鉴定。
分子生物学技术在实验动物微生物寄生虫学检测中的应用
PCR技术
利用特异性引物对实验动物样本中的 微生物或寄生虫DNA进行扩增，通过 凝胶电泳等方法进行检测。
实时荧光定量PCR技术
基因芯片技术
将大量特异性基因片段固定在芯片上， 通过与实验动物样本中的DNA进行杂 交，实现对多种微生物或寄生虫的同 时检测。
建立完善的检测体系
建立全面的微生物和寄生虫检测体系，包括定期检测、抽样检测和应 急检测等，确保实验动物的微生物寄生虫学质量得到有效控制。
加强饲养环境管理
优化实验动物的饲养环境，如降低饲养密度、改善通风条件、加强消 毒措施等，以减少微生物和寄生虫的传播和感染。
选用健康实验动物
选用经过严格检疫和检测的健康实验动物，避免携带潜在微生物和寄 生虫的实验动物进入实验室。
精细化、个性化管 理
随着科技的不断进步，未来实 验动物微生物寄生虫学质量控 制将更加注重精细化、个性化 管理，针对不同实验需求和动 物种类制定更加精准的控制方 案。
02
智能化技术应用
人工智能、大数据等技术的不 断发展将为实验动物微生物寄 生虫学质量控制提供更加智能 化的技术支持，如自动化检测 、数据分析和预警等。

03-中英-医学实验动物学-实验动物质量控制-02-微生物及寄生虫质量控制

03-中英-医学实验动物学-实验动物质量控制-02-微生物及寄生虫质量控制

Dogs、monkeys:
grade 1、3
1、无菌动物
Germfree animal
无菌剖腹产胎儿 Sterile caesarean fetus
隔离系统
无菌隔离器 一切物品高压灭菌
空气高效过滤
Isolation system
aseptic isolator sterilizing all articles under high pressure;
➢ （7）放线菌：主要是衣氏放线菌，常存于正常人口腔、 咽部和扁桃体中，可侵入组织引起慢性化脓性炎症。皮肤 ，伤口感染。(7) Actinomycetes: mainly Actinomycetes linii , which often exists in the mouth, pharynx and tonsil of nor mal people, and can cause chronic suppurative inflammatio n in invading tissues. Skin, wound infection.
➢ （4）衣原体：广泛寄生于人类、禽类及哺乳动物体内，对 某些抗生素敏感。砂眼衣原体、肺炎衣原体等。沙眼，泌 尿生殖道感染。(4) Chlamydia: widely parasitic in humans, b irds and mammals, sensitive to certain antibiotics. Chlamydi a trachomatis, chlamydia pneumoniae, etc. Trachoma, uroge nital tract infection
原体动物
Clean conventional animal CCVA,清洁普通动物＝ Clean animal，CL，清洁动物

实验动物微生物和寄生虫质量控制

实验动物微生物和寄生虫质量控制

2、来源
清洁动物来源于SPF动物、无菌动 物、悉生动物或剖腹产动物。
3、饲养管理
清洁级动物饲养于温湿度恒定的7级空 气净化的屏障系统中。其所用的饲料、 垫料、饮用水、笼器具等都经过消毒灭 菌处理。工作人员需换灭菌工作服、鞋 、帽、口罩等进入动物室进行操作。
清洁动物的应用：
清洁动物是根据我国国情而设立的 等级动物。它较普通动物健康，又较 SPF动物易达到质量标准，在动物实验 中可免受动物疾病的干扰，其敏感性与 重复性亦较好。
按对微生物和寄生虫质量的控制，可将实 验动物分为四类： 普通动物(Conventional animal, CV) 清洁动物(Clean animal, CL) 无特定病原体动物(Specific pathogen free animal, SPF) 无菌动物(Germfree animal, GF)和悉生 动物(Gnotobiotic animal, GN)
二、表现形式和传播条件


实验动物微生物感染四种表现形式：
实验动物微生物一般有显性感染、隐性感染 、病原携带状态、潜伏感染等四种表现形式。


实验动物微生物传播三个基本条件：
实验动物微生物传播必须具备传染源、传 播途径和易感动物三个基本条件。 实验动物多采用群体饲养，易造成相互传播。

三、微生物和寄生虫的危害性
少量
可能好 可能好 少 约90% 可能 高
较少
较好 可能好 较少 约80% 可能 较高
多或大量
不准确 困难 高 约40% 不可能 有疑问

总之，使用无菌动物、悉生动物、 及SPF动物和清洁动物，由于有明确的微 生物背景和可控的饲育环境，可大大提 高动物实验的重复性和准确性，因而得 到广泛的应用。

实验动物微生物学和寄生虫学质量控制

实验动物微生物学和寄生虫学质量控制

实验动物微生物学 质量控制
实验动物微生物学质量标准
微生物检测：包 括细菌、真菌、 病毒等
微生物控制：包 括消毒、灭菌、 隔离等
微生物监测：包 括环境监测、动 物监测等
微生物管理：包 括人员培训、设 备维护等
实验动物微生物学监测方法
微生物培 养：通过 培养基培 养微生物， 观察其生 长情况
微生物检 测：通过 微生物检 测试剂盒 检测微生 物的存在
施
设立专门的监 督机构，负责 监督实验动物 微生物学和寄 生虫学质量控 制的实施情况
制定详细的检 查标准和流程， 确保检查结果 的准确性和公
正性
建立反馈机制， 及时纠正存在 的问题，确保 实验动物微生 物学和寄生虫 学质量控制的
持续改进
实验动物微生物学 和寄生虫学质量控 制中的问题与对策
常见问题及原因分析
实验动物微生物学 和寄生虫学质量控 制的发展趋势与展
望
国际发展动态与趋势分析
国际标准：国际实验动物微生物学和寄生虫学质量控制标准不断更新和完善 技术进步：新技术、新方法在实验动物微生物学和寄生虫学质量控制中的应用 法规政策：各国政府对实验动物微生物学和寄生虫学质量控制的法规政策不断加强 合作交流：国际合作与交流在实验动物微生物学和寄生虫学质量控制中的重要性日益凸显
评估标准：寄生虫 种类、数量、感染 程度等
评估方法：显微镜 观察、血清学检测、 分子生物学检测等
改进措施：加强饲 养管理、改善环境 卫生、定期驱虫等
持续改进：定期评 估、及时调整改进 措施、确保实验动 物寄生虫学质量控 制达到预期效果
实验动物微生物学 和寄生虫学质量控
制实施
建立质量控制体系
制定质量控制标准： 明确微生物学和寄 生虫学的质量控制 标准

实验动物微生物学和寄生虫学质量控制

实验动物微生物学和寄生虫学质量控制

小鼠肝炎病毒感染
由小鼠肝炎病毒引起的一种高度传染性疾病.随毒株, 品种和年龄不同而出现肝炎,脑炎,乳鼠肠炎和进行性消 耗综合症为特征的疾病.常见隐性感染而无明显临床症状. 易感染动物:小鼠.(国内普通小鼠群抗体阳性率为20%50%).多数在应急因素影响下爆发. 该毒株对酸稳定,不同毒株对热的稳定性不同,其中 低毒力毒株和对热稳定的毒株是实验鼠群最严重的污染物. 对实验研究的干扰: 对实验研究的干扰: 1,引起小鼠致死性肝炎,脑炎和肠炎 2,改变机体的各种免疫应答参数(产生高水平的IL-6, IFN—gamma和低水平的IL-2和IL-l0). . 3,是许多酶系统发生改变,增高某些肝酶活性(异柠檬酸 脱氢酶,葡萄糖—6一磷酸脱氢酶和肝谷一草转氨酶)而 抑制另一些肝脏的酶(P—450, NADAH,肝氧化酶琥珀酸 脱氢酶). . 4,裸鼠感染可严重影响肿瘤免疫学的研究 .
携带动物 猕猴属
在非人灵长类的临床症 状 无临床症状,有时口腔 中出现水疱 无临床症状,少数出现 肝炎 无临床症状
传播方式 咬伤时体液和唾液
人感染症状 上行脊髓炎,脑脊髓炎, 脑炎,死亡 肝炎
备注
所有种类的非人灵长类
接触排泄物
疫苗免疫
SV40
猕猴属
接触分泌物,尿,已感 染的疫苗 接触分泌物和血液
致癌的潜在危险
实验动物按其所感染的微生物影响的侧重点可分 为三类: 可引起人畜共患病的微生物:如流行性出血热病 1,可引起人畜共患病的微生物 毒,狂犬病毒等. 2,影响实验动物本身存活率的微生物:这类微生物 影响实验动物本身存活率的微生物 常造成动物传染病发生,影响动物生长,发育, 繁殖,如鼠痘病毒,兔巴氏杆菌,犬细小病毒等. 影响实验结果的微生物:这类微生物多是实验动 3,影响实验结果的微生物 物体内的正常微生物,甚至参与体内营养代谢, 如大肠杆菌正常状态下可合成B族维生素和维生素 K供动物使用.但当外界环境发生变化,手术, X—照射,实验刺激时,大肠杆菌可能会变成条件 致病菌,影响动物状况和实验结果.

实验动物学微生物和寄生虫质量控制

实验动物学微生物和寄生虫质量控制
实验动物学微生物和寄生虫质量控 制
对于普普通通级级动实物验的动用物途的用途比较完整的解释是
1、教学示教之用； 2、某些科学研究为探索方法而从事的预试验
之用； 3、没有培养出高级别的动物，不得以用之；
实验动物学微生物和寄生虫质量控 制
三、实验动物常见人兽共患病
人病 体兽 毒
共 患 病细 病菌 原
寄 虫生
实验动物学微生物和寄生虫质量控 制
不同级别动物对实验的影响
实验项目
无菌动物
SPF
传染病
无
无
寄生虫
无
无
实验结果
正确
正确
用动物数
少数
少数
统计价值
高
较高或可能高
长期实验
可能好
可能好
自然死亡率
很低
低
长期实验存活率 实验的准确设计
约 100% 可能
约 90% 可能
实验结果的可靠性 很高
高
实验动物学微生物和寄生虫质量控 制
这些微生物和寄生虫对实验动物可以 是致病的、条件致病的、和非条件致病的。 有的是人兽共患的病原体。
实验动物学微生物和寄生虫质量控 制
有害的微生物对实验动物及实验结果造成那些危害？
1、人兽共患病 威胁人的健康和生命
流行性出血热病 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病 猴疱疹病
实验动物学微生物和寄生虫质量控 制
2、烈性传染病对生产、实验造成严重危害：
（1） 种子群死亡——不能生产； （2） 正在进行的实验死亡——实验被迫中断。
犬细小病毒病
犬传染性肝炎
兔出血热症
犬瘟热
实验动物学微生物和寄生虫质量控 制
3、隐性感染的主要危害是引起实验动物生物 学特性的改变，获得免疫或隐性感染的动物， 会给人假像。

实验动物学 第三章 微生物寄生虫控制

实验动物学 第三章 微生物寄生虫控制

第三章重点掌握内容
1、普通级动物、清洁动物、SPF动物、 无菌动物和悉生动物的概念。
2、人兽共患病主要病原体的名称。 3、淋巴细胞脉络丛脑膜炎、鼠痘、
狂犬病、流行性出血热等疾病的 传染源、传播途径、易感者和症状 表现。
第一节 微生物学和寄生虫学控制
• 按微生物和寄生虫的控制程度，将 实验动物划分为普通级动物、清洁 动物、无特定病原体动物和无菌动 物四个等级，后者包括悉生动物。
体外寄生虫（节肢动物）、 弓形虫。
清洁动物生存的环境设施要求
1、设施——屏障设施，严格控制人员、物品 和环境空气的进出，饲养清洁级动物。
2、人员——经更衣、淋浴、穿灭菌服、戴灭 菌口罩和手套后，方可进入屏障设施。
3、物品——垫料、笼具、饲料和饮水等物品， 经消毒和灭菌等处理后，进入屏障系统。
4、动物——做好检疫和防护，动物不携带人 兽共患病、动物烈性传染病、对动物本身 及科学研究干扰较大的微生物和寄生虫。
4、动物——做好检疫和防护，动物不携带人 兽共患病、动物烈性传染病、对动物本身 及科学研究干扰较大的微生物和寄生虫。
5、空气——空气经过初效、中效和高效三级 过滤，其洁净度达到7级。
要求SPF动物排除的病原菌
（1）小鼠和大鼠： 1）必须检测和排除的病原菌有： 嗜肺巴斯德杆菌、肺炎克雷伯杆菌、 金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌。 2）必要时检测和排除的病原菌有： 肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌。
• 科研中使用的实验动物，其微生物 和寄生虫的控制级别越高，其结果 就越精确越可靠。
实验动物传染病的危害
表现形式：显性感染、隐性感染、 病原携带状态、潜伏感染
基本条件：传染源、传播途径、易感动物
危害： 1.动物及实验损失 2.威胁人类健康 3.影响实验结果

实验动物微生物质量控制

实验动物微生物质量控制

病原 仙台病毒（Sendai virus）
本病毒副粘病毒科。核酸型为单股负链RNA。对
乙醚和热敏感。可在鸡胚中快速繁殖，以羊膜 腔接种最敏感，尿囊腔传代接种生长良好。
易感动物
大鼠、小鼠、仓鼠、豚鼠均易感。据报导大鼠群 中仙台病毒的检出率为42％，占第三位，抗体 阳性检出率为95％，大鼠的带毒率很高，传播 也很迅速。
2.流行型感染epizootic infection）：成年鼠一般只有在应激因素作用下会 发生肝炎。初生鼠乳鼠自发性肝炎时，发病急、病程短、能致死，其 发病率和死亡率很高。病鼠萎糜，厌食，被毛粗乱，体重减轻，血液 谷丙转氨酶（SGPT）和谷草转氨酶（GOT）急剧升高，经2～4天死 亡。弱毒株感染，患鼠死亡率較低。
迄今为止，各种实验动物病毒涉及到脊椎动物病毒的所有科、属、种。有 些直接威胁到人的健康和生命。 实验动物寄生虫学 实验动物寄生虫种类繁多，已报道的有六、七十种。
以上三个方面由于涉及内容非常丰富，已发展成相对自成体系的学科， 有些细菌、
病毒和寄生虫的研究非常重要，不仅对实验动物至关重要，而且对人医学相关的 领域研究提供了重要参考资料和模型价值。
对实验动物微生物和寄生虫性疾病监测的意义
1. 保证实验研究的顺利进行 2. 保护工作人员的身体健康 3. 确保实验数据的准确性和可重复性
实验动物微生物控制分级
按微生物学控制标准或微生物净化程度，分为四级：
普通动物(Conventional animal, CV) 清洁动物(Clean animal, CL) 无特定病原体动物(Specific pathogen free animal,
形态学特点
消化系统：盲肠膨大；肠道肌层薄，肠绒毛变细变短 循环系统：心脏变小；白细胞数变少、数量波动范围小 免疫系统：胸腺、淋巴组织、网状内皮系统发育不良；

实验动物微生物质量控制(共49张PPT)

实验动物微生物质量控制(共49张PPT)
virus infection)
Lyphocytic choriomenin gitis
virus
狂犬病 (Rabies)
Rhabdo virus
小鼠、仓鼠
类 似 流 行 性 感 冒 的 症 状 ，接 触 感 染 ( 接 触 小 鼠 头痛、肌痛、发热、恶 粪便和尿液)；吸入； 心 、 呕 吐 、 喉 痛 、 畏 光 。咬伤，或由节肢动物
如蚊子、蟑螂传播
所有哺乳类
头痛、肌痛、发热、恐 咬伤、皮肤伤口或黏
水、狂妄、抽搐、昏厥、 膜感染含狂犬病毒的
死亡
唾液
细菌性疾病
疾病
病原
媒介动物
人类临床症状
传染途径
全身性感染 (Systemic infections)
布氏杆菌病 (Brucellosis)
犬 Brucdla Canis 、 猪 Brucella suis
正常菌群
a. 正常菌群受内外环境变化发生菌群失调，将产生数量和位置的改变， 由非致病菌变为致病菌。
3. 真菌感染对动物和实验的干扰
病原真菌大多为人兽共患病原，病原性弱，为慢性过程，以慢性增生性炎
症为主。
真菌孢子飞扬，污染环境，威胁动物和实验、饲养人员。
4. 寄生虫感染对动物和实验的干扰
掠夺宿主的营养
(Rabies) 酶联免疫吸附试验（ELISA）。
Germfree animal GF
三、微生物、寄生虫潜在感染对实验研究的干扰
1. 实验动物病毒对动物和实验的干扰
鼠痘病毒
a. 实验性结核、X射线、化学毒素、组织移植、肿瘤、运输可使隐性感染病毒激
活。
b. 大量内毒素或切除脾脏可改变吞噬细胞功能，而增加小鼠对病毒的易 感性。

实验动物微生物学和寄生虫学质量控制

实验动物微生物学和寄生虫学质量控制




病毒的常规定期检测以血清学为主，而疾病诊断则以病原学检测为主。
包括监测项目的选定、采样数量、检测频率、采样方法、病毒、细菌、 寄生虫和真菌检测方法。
1、监测项目
我国经过十多年来对各地实验动物感染病原微生物、寄生虫 情况的调查，结合其他国家的规定和经验，制定了我国啮齿类、兔、 犬、猴和鸡的微生物学以及寄生虫学等级标准。目前有关实验动物的
标准有28个。颁布年代主要在2001年，最近对标准又进行了部分修订。
GB14925 GB14923 GB14922.1 GB14922.2 GB14924.1 GB14924.2 GB14924.3 GB14924.4 GB14924.5 GB14924.7 GB14924.8 GB14924.6 GB/T 14927.1 GB/T 14927.2 GB/T 14926.42～14926.43 GB/T 14926.1～14926.6 GB/T 14926.8～14926.17 GB/T 14926.41 GB/T 14926.44～14926.49 GB/T 14926.50～14926.55 GB/T 14926.18～14926.32 GB/T 14926.56～14926.64 GB/T 18448.1～18448.10 GB/T 14924.9 GB/T 14924.10 GB/T 14924.12 GB/T 14924.11 GB/T 17998
（二）监测意义
1、保证实验研究的顺利进行和工作人员的身体健康。 2、确保实验数据的准确性和可重复性。
（三）监测方法
实验动物的微生物、寄生虫检测具体操作方法详见《国家标准实验动物 微生物学检测方法》（GB/T 14926.1-14926.64）和《国家标准实验动物 寄生虫学的检测方法》(GB/T 18448.1～18448.10 )。 检测方法归纳起来有病原学检测和血清学检测。 细菌、真菌和寄生虫以病原学检测为主，血清学检测为辅；但有些病原 体也逐渐使用血清学方法检测，如支原体、泰泽氏病原体、弓形体等。

实验动物管理条例(2017修订)

实验动物管理条例(2017修订)

实验动物管理条例(2017修订)发布：2017-03-01实施：2017-03-01现行有效法律修订1988年10月31日国务院批准1988年11月14日国家科学技术委员会令第2号发布根据2011年1月8日《国务院关于废止和修改部分行政法规的决定》第一次修订根据2013年7月18日《国务院关于废止和修改部分行政法规的决定》第二次修订根据2017年3月1日《国务院关于修改和废止部分行政法规的决定》第三次修订正文第一章总则第一条为了加强实验动物的管理工作，保证实验动物质量，适应科学研究、经济建设和社会发展的需要，制定本条例。

第二条本条例所称实验动物，是指经人工饲育，对其携带的微生物实行控制，遗传背景明确或者来源清楚的，用于科学研究、教学、生产、检定以及其他科学实验的动物。

第三条本条例适用于从事实验动物的研究、保种、饲育、供应、应用、管理和监督的单位和个人。

第四条实验动物的管理，应当遵循统一规划、合理分工，有利于促进实验动物科学研究和应用的原则。

第五条国家科学技术委员会主管全国实验动物工作。

省、自治区、直辖市科学技术委员会主管本地区的实验动物工作。

国务院各有关部门负责管理本部门的实验动物工作。

第六条国家实行实验动物的质量监督和质量合格认证制度。

具体办法由国家科学技术委员会另行制定。

第七条实验动物遗传学、微生物学、营养学和饲育环境等方面的国家标准由国家技术监督局制定。

第二章实验动物的饲育管理第八条从事实验动物饲育工作的单位，必须根据遗传学、微生物学、营养学和饲育环境方面的标准，定期对实验动物进行质量监测。

各项作业过程和监测数据应有完整、准确的记录，并建立统计报告制度。

第九条实验动物的饲育室、实验室应设在不同区域，并进行严格隔离。

实验动物饲育室、实验室要有科学的管理制度和操作规程。

第十条实验动物的保种、饲育应采用国内或国外认可的品种、品系，并持有效的合格证书。

第十一条实验动物必须按照不同来源，不同品种、品系和不同的实验目的，分开饲养。

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Hepatitis A virus
黑猩猩、械 发热、身体不适、厌食、粪便排毒、经口或胃 肠道外途径感染 猴、石蟹猕猴、恶心、腹部不适、黄疸 枭猴 大鼠、小鼠 肌痛、咳嗽，发热、腹 泻、出血、蛋白尿、肾 脏损害，严重致死 吸入感染、啮齿类动 物咬伤、伤口污染
出 血 热 (Korean Hantaan hemorrhagic fever) Virus 淋巴细胞脉络丛 脑膜炎病毒感染 症 (Lyphocytic choriomeningitis virus infection) 狂犬病 (Rabies) Lyphocytic choriomenin gitis virus Rhabdo virus
Germfree animal GF
饲养条件 隔离系统
Isolation system
悉生动物
Gnotobiotics animal GN
隔离系统
Isolation system
无特定病原体动物
Specific pathogen free animal SPF
屏障系统
Barrier system
清洁动物
第三节 清洁级动物与无特定病原体动物
一、概念
Clean animal : 除普通动物应排除的病原外，不携带对动物危害 大和对科学研究干扰大的病原。来源于SPF动物或剖腹 产动物。 血清病毒抗体检测可检测出一定滴度的抗体，病 理切片应无病变。 小鼠病原菌应排除10种，病毒5种；大鼠病原菌应 排除10种，病毒2种。
b.
大量内毒素或切除脾脏可改变吞噬细胞功能，而增加小鼠对病 毒的易感性。
仙台病毒 a. 饲养条件恶化、气温骤变或呼吸道细菌感染，可导致呼吸道疾病 流行。
b. 严重影响体液和细胞免疫应答：抑制大鼠淋巴细胞对绵羊红细胞
的抗体应答。减弱植物血凝素、刀豆素对淋巴细胞的促有丝分裂。
c. 致瘤作用的干扰：感染后的组织学改变酷似浸润性肺癌；对化学
a. b. c.
对宿主产生机械损伤 a. 虫体移行可对组织、脏器造成损伤。 b. 蛔虫幼虫移行，损伤肠壁、肺毛细血管和肺泡壁。 c. 肠道中，与粘液混合形成栓塞，引起肠梗阻或破裂。 产生毒性作用 即寄生虫分泌物、排泄物的毒性。如肝片吸虫导致胆管纤维 变性，肝脏萎缩硬化。 对生理、生化、免疫的影响
第四节 无菌动物与悉生动物
媒介动物
犬、猫、猴
人类临床症状
咳嗽、生痰、咳血、体 重减轻、无力疲倦、发 热、发冷、恶病质
传染途径
吸入传染，或经口腔、 伤口及消化道感染
呼吸道感染 ( Respiratory lnfections)
肠道感染 ( Entericlnfections) 沙 门 氏 菌 病 (Salmonellosis) Salmonella typhimuriumS．enteriti dis S．flexneri， S．Sonnei，及 S．dysenteriae Yersinia Enterocolitica 鼠类、犬、猫、急性肠胃炎，腹痛、腹 灵长类 泻、恶心、发热、厌食 经由食物、饮水感染
一、概念
悉生生物学(gnotobiology)： 1885年pasteur认为宿主动物没有肠道菌群参与，生命难以 维持。无菌动物的问世，证明肠道菌群的存在，并非完全是哺乳 动物生存所必需。 悉生生物学是以无菌隔离技术提供的各种动物为实验对象， 研究实验动物本身以及各种动物与微生物之间相互依存和制约关 系的一门综合科学。
二、人兽共患病
病毒性疾病
疾病 病原 媒介动物
猕猴类
人类临床症状
传染途径
cercopithecine 猴疱疹病毒感染 (B-Virusinfection) Herpesvirus Type 1 马尔堡病毒症 (MarburgViresdisease) Marburg-Virus
肌痛、发热、头痛；迅速发 唾液(咬伤)、抓伤 展的上行性麻痹；感觉异常、 复视、运动失调、潴尿、抽 搐、吞咽困难，直至死亡 肌痛、发热、头痛、器官 坏死、出血性休克、眼结膜 溢血、恶心、呕吐、严重下 痢、白细胞减少，急性死亡 接触、空气传染； 人类之间可经由 血液、分泌物或 精液传染
二、应用
CL动物国际上认为仅适合短期或部分科研实验；我 国认为适用于大多数科研实验，可用于生物医学研 究的各领域。 SPF动物适用于所有科研实验，是目前国际标准级别 的实验动物。
三、微生物、寄生虫潜在感染对实验研究的干扰
1. 实验动物病毒对动物和实验的干扰 鼠痘病毒
a.
实验性结核、X射线、化学毒素、组织移植、肿瘤、运输可使 隐性感染病毒激活。
小鼠、仓鼠
类似流行性感冒的症状， 接 触 感 染 ( 接 触 小 鼠 头 痛 、 肌 痛 、 发 热 、 恶 粪便和尿液 ) ；吸入； 心、呕吐、喉痛、畏光。 咬伤，或由节肢动物 如蚊子、蟑螂传播 头痛、肌痛、发热、恐 咬伤、皮肤伤口或黏 水、狂妄、抽搐、昏厥、 膜感染含狂犬病毒的 死亡 唾液
所有哺乳类
Specific pathogen free (SPF) animal : 指动物体内无特定的微生物、寄生虫存在，但带 有非特定的微生物、寄生虫的动物。主要指不携带潜 在感染、条件致病和对实验干扰大的病原。来源于剖 腹产动物。 小鼠病原菌应排除16种，病毒11种；大鼠病原菌 应排除16种，病毒7种。
第三章 实验动物微生物质量控制
第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 第六节 实验动物分级 普通级动物 清洁级动物和无特定病原体动物 无菌动物和悉生动物 实验动物微生物及寄生虫监测 生物安全
第一节 实验动物分级
国际分级法
等级 三级 种类 无菌动物
Germfree animal
饲养条件 隔离系统
Isolation system
致癌作用具有很强的影响。
d. 生殖影响：妊娠4-5天感染，胚胎被吸收；11-12天感染，妊娠期
延长，新生鼠死亡率升高。
小鼠肝炎病毒 a. 在应激条件下，引起小鼠致死性肝炎、脑炎、肠炎
b. 改变机体各种免疫应答参数：降低血清免疫球蛋白水平；影响吞
噬细胞数目。
c. 改变酶系统：增高或降低一些肝脏的酶活性。
乳酸脱氢酶病毒 a. 污染生物材料和移植肿瘤，影响机体免疫。啮齿类动物病毒对生 物材料、细胞系及可移植肿瘤的污染是一个不容忽视的问题。
b. 抑制细胞免疫应答，延缓同种异体排斥，抑制移植物对宿主的反
应。
c. 对肿瘤研究的影响：病毒慢性感染，抑制或延缓肿瘤的形成。 d. 对酶系统：小鼠感染后，一些血清酶活性升高。
志贺氏菌病 (Shigellosis) 肠道耶氏症 (Enteric Yersiniosis)
豚鼠、鼠类、 急性下痢、发热、恶 犬、灵长类 心、有时伴有呕吐、先 急后重、痛经与毒血症
接触或口腔感染
犬、猫、豚鼠、 发热、下痢、腹痛。后 接触感染动物或其粪便， 兔、灵长类 遗症有关节炎，虹膜炎、 亦可经口感染 皮肤溃疡、肝脾脓肿
三、动物烈性传染病
疾病
小鼠脱脚病 (ectromelia)
病原
Mouse virus pox
症状
传播方式
控制
脚、尾、鼻 皮肤伤口、呼吸道、消化 出现皮疹和溃疡， 道 严重出现尾坏死 脱落。
兔 出 血 症 Rabbit hemorrhagic disease
Rabbit hemorrhagic disease virus
非洲绿猴、
痘病毒症
(PoxMrusdisease) 猴痘(Monkeypox)
Pox virus
其他灵长 类
猕猴类
类似天花症状，如发热、 接 触 传 染 或 呼 吸 皮疹、头痛、咽喉痛、虚脱、道感染 偶有腹痛，严重致死
眼睑、脸部、身体或生殖 器有局部的卵圆形或圆形隆 起红斑 接触传染
Pox virus
二级
无特定病原体 动物
Specific pathogen free animal
屏障系统
Barrier system
一级
普通动物
Conventional animal
开放系统
Open system
不携带所规定的人兽共患 病病原和动物烈性传染病 的病原。
国家标准分级
等级 四级 四级 三级 二级 一级 种类 无菌动物
人类临床症状
发热、头痛、恶心、体 重减轻。有可能发生菌 血症，睾丸炎、不育等
传染途径
由接触感染，可经口、 皮肤、呼吸道、尿液、 黏膜感染
全身性感染 (Systemic infections)
精 神萎 靡、 体重减 轻 、接触感染动物的尿液， 呕吐、下痢、发热、黄 由创伤、皮肤或口腔感 疸、突发性死亡 染 淋 巴结 型鼠 疫：发 热 、由蚤传染。另外，接触 淋巴结肿大与发炎。化 受感染的动物，或吸入 脓型鼠疫：全身性尤其 带菌的空气感染。皮肤 是肺、脑膜化脓 伤口或黏膜亦可感染
续表
疾病
麻疹 (Measles； Rubeola) 甲 型 肝 (Hepatitis A) 炎
病原
Paramyxo virus
媒介动物
自然宿主为 人群，灵长类 患病后可感染 人类
人类临床症状
发热、结膜炎、鼻炎、 咳嗽、有红晕小白点于 颊部黏膜，在脸部及其 他部位出现皮疹
传染途径
空气传染、呼吸道分 泌物接触能传染
b.
c.
a.
正常菌群 正常菌群受内外环境变化发生菌群失调，将产生数量和位置的 改变，由非致病菌变为致病菌。 真菌感染对动物和实验的干扰 病原真菌大多为人兽共患病原，病原性弱，为慢性过程，以慢 性增生性炎症为主。 真菌孢子飞扬，污染环境，威胁动物和实验、饲养人员。
3.
4.
寄生虫感染对动物和实验的干扰 掠夺宿主的营养 因种类、数量、寄生部位不同，对动物影响不同。 蛔虫寄生小肠，以半消化物质为食，导致动物发育缓慢、体重 下降营养不良。 螨皮下吸血，钩虫移位吸血导致动物慢性贫血。 体表寄生虫对宿主的干扰 虱、螨吸血的同时分泌有毒素的唾液，刺激宿主神经末梢 产生骚痒。

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