内窥镜引导气管注入博来霉素建立小鼠肺纤维化模型
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万方数据 万方数据 万方数据陶章.等.不同劫量博蕞霉素致小鼠秭纾维化摸墅的磁较对照组:肺泡形态正常,壁纤细,间质中无炎症细胞浸润,见图1a。
2mg,kg博莱霉素组:肺纤维化程度+,小片肺组织实变,其中有炎细胞浸润和少量胶原沉积,见图1b。
3.5mg/kg博莱霉素组:肺纤维化程度++,肺组织中有较多的小片状实变区,实变区间见肺泡壁增厚,间隔增宽,有较多的炎细胞浸润和胶原沉积,见图1c。
5mg/kg博莱霉素组:肺纤维化程度+++,可见大片的肺实变,大量胶原沉积,见图1d。
2.6各组小鼠肺组织中羟脯氨酸含量的测定见表3。
表3各组小鼠肺组织中羟脯氦酸含量的变化Table3Changesinpulmonaryhydroxyprolinecontentofmiceinthebleomycinandcontrolgroups(x-t-S,mg/g)Group几HydroxyprolinecontentContr04150。
44f;±0.005Bleomycin2mg/kg60.512±--0.017.3.5mg/kg40.621±-0.007a8P‘0.05.临.controlgroup5mg/kg博莱霉素组因小鼠存活数量太少不做统计分析,表3可见,各组小鼠肺组织中羟脯氨酸含量从高到低依次为5mg/kg博莱霉素组(1只小鼠,肺组织羟脯氨酸含量为0.660rag/g)、3.5mg/kg博莱霉素组、2mg/kg博莱霉素组和对照组。
3讨论博莱霉素是从轮生链霉菌中提取的一种抗肿瘤药物,国产平阳霉素是其单体,毒性小于博莱霉素。
它们的毒副作用之一是引起肺纤维化,用博莱霉素制作的肺纤维化模型,其病理组织学和生理学改变与人类肺纤维化近似,因此成为肺纤维化造模的常用药物。
1974年,Adamson等删首次采用腹腔多次注射博莱霉素的方法,建立了鼠肺间质纤维化动物模型。
此后,一些学者采用不同动物及不同方式建立的模型逐渐增多(包括猴、犬、兔、豚鼠、大鼠、小鼠),采用多种途径(静脉、腹腔、皮下、气管)给药,均可成功建立模型。
气管内注射博来霉素致小鼠肺纤维化造模方式改良杨宇;袁晓梅;吴敏娜;许芝山;霍书华;钟根深;郭悦鹏【期刊名称】《新乡医学院学报》【年(卷),期】2015(032)009【摘要】目的探讨手术显微镜下气管内注射博来霉素制作肺纤维化模型的效果.方法选择健康成年清洁级雌性8周龄C57BL/6小鼠30只,采用随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组15只.对照组小鼠在直视下行气管内注射博来霉素,观察组小鼠在手术显微镜下行气管内注射博来霉素造模,观察术后12 h内各组小鼠死亡情况及术后1周体质量变化;术后28 d每组随机选取8只小鼠,取小鼠肺组织制备石蜡切片并进行苏木精·伊红染色、Masson 染色,评价各组小鼠肺泡炎及肺纤维化程度.结果术后12 h内观察组小鼠死亡率显著低于对照组(P<0.05).术后1周内观察组小鼠体质量下降显著低于对照组(P<0.05).观察组小鼠肺泡炎及肺纤维化评分均显著高于对照组(P<0.05).结论手术显微镜下行气管内注射博来霉素制备肺纤维化模型对小鼠损伤小,造模效果好,是一种有效的肺纤维化模型制备手段.【总页数】3页(P807-809)【作者】杨宇;袁晓梅;吴敏娜;许芝山;霍书华;钟根深;郭悦鹏【作者单位】新乡医学院第一附属医院呼吸科,河南卫辉453100;新乡医学院第一附属医院呼吸科,河南卫辉453100;新乡医学院基础医学院微生物学教研室,河南新乡453003;河南省神经病学研究所生物治疗实验室,河南卫辉453100;新乡医学院第一附属医院胸外科,河南卫辉453100;河南省神经病学研究所生物治疗实验室,河南卫辉453100;新乡医学院第一附属医院呼吸科,河南卫辉453100【正文语种】中文【中图分类】R363【相关文献】1.气管内移植人脐血间充质干细胞对博来霉素致小鼠肺纤维化的作用 [J], 郑金旭;王阳;宋萍;蒋婷;濮荔;端礼荣2.小剂量多次尾静脉注射与气管内滴注博来霉素致小鼠肺纤维化模型的比较研究[J], 孟婕;彭张哲;陶立坚3.枸杞多糖对博来霉素致肺纤维化小鼠的干预作用及其机制 [J], 刘舵;董玲娟;雷婷;明磊国4.莲子心提取物对博来霉素致小鼠肺纤维化的干预作用研究 [J], 李艳晓;高颖;王火;陈虹5.博来霉素致小鼠肺纤维化模型的建立及生物标志物的筛选 [J], 王国辽;张洁;饶家榕;莫睿文;远立国因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
2024年3月第14卷第5期CHINA MEDICINE AND PHARMACY Vol.14 No.5 March 202425·基础医学·[基金项目] 广东省广州市番禺区科技计划项目(2020-Z04-100)。
肺祖细胞抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化陈 佳 黄燕霞 冯玉丽 刘贝珠广州市番禺区何贤纪念医院,广东广州 511400[摘要]目的 研究肺祖细胞在小鼠肺内定植的情况及其对小鼠肺纤维化的影响。
方法 人胚胎干细胞体外分化为肺祖细胞,经免疫荧光和细胞流式术鉴定后,移植至正常免疫缺陷小鼠肺内,观察其定植的时间以及是否在体内发生分化为成熟肺上皮细胞。
免疫缺陷小鼠经气管灌注博来霉素(2 μg/10 g)建立肺纤维化模型,并将肺祖细胞移植至肺纤维化的小鼠肺内,治疗后取肺组织进行切片做苏木素-伊红染色和Masson 染色,同时检测肺内低α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞外基质蛋白-1(ECM-1)和羟脯氨酸表达的变化,以及检测凋亡的情况。
结果 免疫荧光和细胞流式术显示,定型内胚层细胞阶段标志物叉头框蛋白A2和趋化因子受体4的表达率能达到90%,肺祖细胞标志物NKX2.1显示肺祖细胞的分化效率为70%;在移植后4周,在免疫缺陷小鼠肺内找到定植的肺祖细胞,但未发现肺祖细胞表达表面活性物质C;灌注肺祖细胞后,各组间反映肺纤维化程度的Aschcroft score、α-SMA、ECM-1比较,差异有统计学意义(P < 0.01);各组间反映肺上皮功能的表面活性物质C 荧光面积比较,差异有统计学意义(P < 0.01);各组间反映胶原水平高低的羟脯氨酸浓度比较,差异有统计学意义(P < 0.01);反映细胞凋亡的原位末端转移酶标记技术染色实验,各组间荧光面积比较,差异有统计学意义(P < 0.01)。
结论 肺祖细胞可以在免疫缺陷小鼠肺内定植,不能分化为成熟的肺上皮细胞,但能抑制肺纤维化的进展。
张晓晔,等:静脉注射和气管内滴入博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的差异(全文见176页)ZHANGXiao—ye,etal:ComparisonofLungFibrosisInducedbyIntravenousInjectionandIntratrachealInstillationofBleomycininMice(Fulltextonpage176)在支气管、细支气管周围肺组织呈广泛实变,其间可见大量炎症细胞浸润。
图lI组第28天肺组织病理(I-m染色1Aroundthebronehiaandbronchiole.diffuseconsolidationwithinflammatorycellinfiltrationwereshowed.Fig.1Thepathologyoflungtissueonday28inamouseofgroupI(HEstaining)在实变肺组织内,可见大量胶原(蓝绿色)沉积。
图2I组第28天肺组织病理Alotofcollagendepositionwagseenintheconsolidatedlungtissue.Fig.2Thepathologyoflungtissueonday28inamouseofgroupI(Masson’Strichromestainin曲在胸膜下可见肺组织大片实变,其内可见炎症细胞浸润。
圈3V组第28天肺组织病理(HE染色)Diffuseconsolidationoflungparenehymawithlossofalveolararchitecturewaspresentunderthepleura,andinflammatorycellinfillrationintheconsolidatedarea.F嘻3Thepathologyoflungtissueonday28inamouseofgroupV(HEstainin曲安家泽。
第5期邱雨雨,等:抗肿瘤药物博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型-55 -抗肿瘤药物博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型邱雨雨,张港,王鸣尚,杨小龙,董平轩*(德州学院医药与护理学院,山东德州253023)摘要:博来霉素(Bleomycin ,BLM ) 一 有抗肿瘤活性的天然产物,临床中具有导致肺纤维化损伤的副作用o 尝试 鼠肺间质纤维化简单易 实验方法’ C57BL/6小鼠,雌,随机分组° BLM 组一 注 酸博 素200 mg ( kg • bw ),对照组一次性注射相同剂量的生理性盐水’实验第21 d 实验组和对照组的小鼠留取肺组织,观察该实验中的小鼠肺 部 化,体重变化以及 ':与 雌 鼠对比,BLM 鼠肺部病理 主要为典型弥漫性炎、成纤维化部病理性基质 部质沉积 部病理变化特征,雌雄性别无明’ 有小鼠死亡 高,且病理变化不均一的特点’更加优化的肺纤维化 及其分子机制的深 有助于开发治疗肺纤维化 ’关键词:博 素;肺纤维化;尾静脉注射# C57BL/6 /J 、鼠中图分类号:R979C 文献标识码:A 文章编号:1008-021X (2021) 05-0055-03Pulmonary Fibrsis Model Inducee by Tail Vein Injection Bleomycin in MiccQiu Yuyu , Zhang Nang , Wang Mingshang , Yang Xiaolong , Dong Pingxuan *(Medicine and Nursing Department of Dezhou University , Dezhou 253023, China )Abstracc : Bleomycin was antitumor agent employed clinically for the treatment of several types of cancer. Objective of this study isioeipeooeiheopiomaemeihodsoobeeomycon ioonducepuemonaoyooboososon moce.40 C57BLL6 moceweoeoandomeydoeoded onioiwogooups : BLM maeegooup , BLM oemaeegooup , coniooemaeegooup and coniooeoemaeegooup.BLM eipeoomeniaegooup was oneecied woih beeomycon 200 mgL ( kg +bw ) once , whoeeiheconiooegooup wasoneecied woih ihesameamounioonoomaesaeone.Onihe21siday , a e ihemoceweoeko e e d , and iheeungio s uesooihemoceweoeiaken ioobseoeewheiheoihepaihoeogocaesiouciuoeooiheeungiossuewaschanged , and ihenoomaeweoghiand paoed woih iheconiooegooup moce , ihepuemonaoypaihoeogocaechangeson BLM gooup weoechaoacieoozed byiypocaedo o useioacheaepneumonoa ,eocaepaihoeogocaesioomaehypeopeasoaand ooboocyieooooboobeasi , deposoioon ooeiogenoussioomaon eocaepuemonaoyonieosioioumand eocaeaeeeoeaocaeoiy.Seeen BLM modeemocedoed and ihemooiaeoiyoaiewas35%.In ihosmeihod eipeoomeni , iheC57BLL6mousemodeeooeaoeypuemonaoyooboososwasesiabeoshed byoneeciongsongee-eaoge-dosebeeomycon ( 200 mgL ( kg +bw ) ) on iaoeeeon , aeihough iheeaoeydeaih oaieoomoceoseo i eehogh , and showed onhomogeneousooboososon iheeung.Then ihesompeeande o ecioeeiechnocaeioesiabeosh ooboososmodeeand oeseaochesoooismechanosm wo e makeoiheepoueiooeseaoch and deeeeopmenimedoconesooopuemonaoyooboosos.Key words : bleomycin ; pu —nona — fibrosis ; mil vein injection ; C57BL/6 mice博来霉素是从轮生链霉菌(Strep —myces ver/ci/is)培养液 中分离 一 基糖 产物,其结构如图1所示。
腹腔注射博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型的长期稳定性苏敏红;江宁;李洪涛;王振国;谢玉芬;郑晓滨;涂常力;黄瑾【摘要】背景:至今特发性肺间质纤维化尚无特效治疗药物,这与该疾病动物模型尚不能完全模拟特发性肺间质纤维化病理表现有极大关系,因此建立更理想的动物肺间质纤维化模型对研究人类特发性肺间质纤维化的发病机制及研制有效治疗药物显得至关重要。
<br> 目的:建立一种更符合人类特发性肺间质纤维化病理组织特征的小鼠肺纤维化模型。
<br> 方法:雄性C57BL/6小鼠70只,随机均分为两组,博来霉素每周2次组(A组),腹腔注射博来霉素35 mg/kg,2次/周,共注射8次;博来霉素每周1次组(B组)腹腔注射博来霉素35 mg/kg,1次/周,共注射8次。
分别于注射完第8次博来霉素后2,4,6,8,10周各处死5只小鼠,取肺组织进行羟脯氨酸测定、苏木精-伊红、Masson和免疫组织化学染色。
<br> 结果与结论:①两组在第8次腹腔注射后2,4,6,8,10周均出现不同程度的肺泡炎、肺纤维化。
A组肺泡炎、肺纤维化评分于2周开始逐渐升高,于6-8周达高峰,持续至10周仍无明显降低;B组肺泡炎、肺纤维化评分于2周最高,随后逐渐波动式下降,至6周开始明显比A组评分低(P<0.05);②兔疫组织化学显示Ⅰ型胶原蛋白主要沉积在胸膜下、血管周围和肺泡间隔,与 Masson染色所见的胶原纤维分布一致;转化生长因子β1和α平滑肌动蛋白在肺泡炎和肺纤维化部位表达增多。
A组小鼠肺Ⅰ型胶原蛋白、a-SMA、转化生长因子β1、羟脯氨酸含量于2周开始持续升高,于6-8周达峰值;B组于2周最高,随后逐渐降低,于4周时肺a-SMA和转化生长因子β1表达明显低于A组(P<0.05),于6周时肺Ⅰ型胶原蛋白表达和羟脯氨酸含量明显低于A组(P<0.05);③结果表明,1周2次腹腔注射博来霉素35 mg/kg诱导小鼠肺纤维化模型有极好的稳定性,且操作十分简单,可重复性好,其反复损伤修复过程、病理变化、细胞因子变化都与人类特发性肺间质纤维化类似,对研究人类肺纤维化,尤其是特发性肺间质纤维化有重要意义。
气道喷雾博来霉素建立特发性肺纤维化模型的研究王聪;朱绘明;钱卫平;韩晓冬【摘要】目的评估气道喷雾博来霉素建立的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)模型相关纤维化指标的变化. 方法首先通过观察经气道给予Sprague-Dawley (SD)大鼠肺组织中伊文斯兰染液的分布,比较气道滴入与气道喷雾给药两种方法药物在肺组织中的分布;继而通过气道喷雾给药的方法,按5 mg/kg的剂量经气道给予实验组大鼠博来霉素,以建立IPF大鼠模型;对照组给予生理盐水.观察给药后7d、14 d、21 d及28 d后肺组织苏木精—伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)及Masson染色、肺组织羟脯氨酸含量、血气分析等结果评估是否造模成功.通过Western blot检测肺组织中E-钙黏素、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)等蛋白标记评估肺组织纤维化程度. 结果气道喷雾给药后,伊文斯兰染液在肺组织中的分布更为均匀;给药后各时间点结果显示,相较于对照组,实验组大鼠HE及Masson染色提示肺组织中成纤维细胞及胶原含量逐步增多,肺组织羟脯氨酸含量明显升高(P<0.05);除28 d组外,其余各组动脉血氧分压较对照组显著下降(P<0.05).Western blot结果提示造模成功的IPF大鼠模型肺组织E-钙黏素表达降低,而波形蛋白、α-SMA表达增多. 结论气道喷雾给予博来霉素可成功建立IPF大鼠模型,且纤维化病灶均一.【期刊名称】《实用老年医学》【年(卷),期】2013(027)009【总页数】5页(P751-755)【关键词】博来霉素;特发性肺纤维化;动物模型;气管内雾化【作者】王聪;朱绘明;钱卫平;韩晓冬【作者单位】210093江苏省南京市,南京大学医学院免疫与生殖生物学实验室、江苏省医学分子技术重点实验室、生命分析化学国家重点实验室;210093江苏省南京市,南京大学医学院免疫与生殖生物学实验室、江苏省医学分子技术重点实验室、生命分析化学国家重点实验室;210096江苏省南京市,东南大学生物电子学国家重点实验室;210093江苏省南京市,南京大学医学院免疫与生殖生物学实验室、江苏省医学分子技术重点实验室、生命分析化学国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R314特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种病因不明,以弥漫性肺泡炎、肺泡结构紊乱,最终肺间质纤维化为特征的疾病,发病人群主要为老年人[1],是老年人慢性咳嗽的主要发病原因[2]。
依那西普抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化胡玉洁;李理;李伟峰;黄文杰【摘要】目的:观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)拮抗剂依那西普对博来霉素诱导的肺纤维化小鼠的抑制纤维化作用,并探讨依那西普治疗肺纤维化的可能机制.方法:将45只SPF级雌性昆明小鼠随机分为3组:对照组(气管内雾化生理盐水)、纤维化组(气管内博来霉素3 mg/kg溶于100 μL生理盐水内雾化)和依那西普干预组(气管内雾化博来霉素后,4 mg/kg依那西普溶于100 μL生理盐水内腹腔注射,每3d注射1次).处理后第28 d收集样本,小鼠左肺置于10%中性甲醛固定,石蜡包埋切片后行HE与Masson染色;右肺碱水解法检测组织羟脯氨酸(HYP)的含量;酶联免疫法检测血清TNF-α和转化生长因子β(TGF-β)的含量;提取肺组织总蛋白,Western blotting检测磷酸化ERK1/2、JNK和p38的表达.结果:依那西普干预组肺组织病理损伤及气道上皮下胶原沉积较纤维化组减轻,肺叶炎症损伤评分和纤维化评分明显下降(均P<0.01),肺组织HYP含量显著降低(P<0.05),血清TNF-α和TGF-β的浓度明显减少(均P<0.01),肺组织ERK1/2、JNK和p38蛋白的磷酸化水平也显著下降(P<0.01,P<0.05,P<0.01).结论:依那西普能显著下调TNF-α和TGF-β的水平,从而抑制ERK1/2、JNK和p38的活化,缓解博来霉素诱导的小鼠肺纤维化病变.%AIM:To evaluate the effect of tumor necrosis factor α (TNF-α) antagonist etanercept on bleomycin-induced lung fibrosis in mice..METHODS:Forty-five Kunming female mice were randomly divided into 3 groups:the mice in control group were intraperitoneally injected with vehicle and intratracheally administered with saline aerosol,the mice in bleomycin group were intraperitoneally injected with vehicle and intratracheally administered with bleomycin (3 mg/kg) aerosol,and themice in bleomycin + etanercept group were intraperitoneally injected with etanercept (4 mg/kg) every 3 d and intratracheally administered with bleomycin aerosol.All animals were sacrificed 28 d after treatments.The left lung was fixed in 10% neutral formalin and then stained with hematoxylin-eosin or Masson' s trichrome for the pathological examination.The tissues of right lung were sampled for measuring the content of hydroxyproline (HYP) by the method of alkaline hydrolysis.The serum concentrations of TNF-α and TGF-β were detected by ELISA.Total tissue protein was extracted for examination of ERK1/2,JNK and p38 by Westernblotting.RESULTS:Etanercept prevented the collagen accumulation under the airway epithelium and decreased the scores of lung inflammation and fibrosis induced by bleomycin with significantly reduced the levels of tissue HYP,serum TNF-α and serum TGF-β.The protein phosphorylations ofERK/JNK/p38 in the lung tissues were remarkably decreased compared with BLM group.CONCLUSION:Etanercept decreases the phosphorylations of ERK1/2/JNK/p38 via inhibiting the expression of TNF-α and TGF-β.Etanercept might be useful in the treatment of pulmonary fibrosis.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2013(029)006【总页数】5页(P1034-1038)【关键词】肺纤维化;肿瘤坏死因子α;依那西普;博来霉素;丝裂原活化蛋白激酶类【作者】胡玉洁;李理;李伟峰;黄文杰【作者单位】广州军区广州总医院呼吸内科,广东广州510010;南方医科大学研究生学院,广东广州510515;广州军区广州总医院呼吸内科,广东广州510010;广州军区广州总医院呼吸内科,广东广州510010;广州军区广州总医院呼吸内科,广东广州510010【正文语种】中文【中图分类】R363肺间质纤维化发病机制未明,缺乏有效的治疗手段,糖皮质激素和免疫抑制剂/细胞毒性药物疗效仍不明确,且毒副作用大,不利于长期治疗。
博来霉素气管多次给药诱导小鼠肺纤维化模型作者:陈孟毅林帅杜朋李程程孟爱民来源:《中国医药导报》2017年第02期[摘要] 目的建立小鼠博来霉素气管多次给药肺纤维化模型。
方法 SPF级雄性C57BL/6J小鼠45只,按体重随机分为未处理组(5只)和处理组(40只),未处理组小鼠不经处理,处理组小鼠博来霉素气管给药(0.4 mg/mL),2周给药1次,共8次。
处理组小鼠在初次给药后2周、1个月、2个月、4个月时分别取出肺组织称重计算肺系数、固定做HE染色和Masson染色,制备冰冻切片进行细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色。
结果与未处理组小鼠比较,处理组小鼠在给药2周时肺系数显著升高(P < 0.05);同时,肺组织病理观察结果显示,给药2周时,小鼠肺泡腔内渗出和血管周围炎细胞浸润较为严重,病理评分与未处理组小鼠比较显著升高(P < 0.05)。
此外,处理组小鼠在给药2周、2个月与4个月时肺泡间隔增宽相对稳定,与未处理组小鼠比较,病理评分显著升高(P < 0.05),但胞浆渗出逐渐减少、炎细胞浸润减轻,评分接近未处理组小鼠水平;胶原染色结果显示处理组小鼠在给药2周时出现蓝绿色的胶原纤维,并在1、2、4个月时胶原纤维持续存在;SA-β-Gal染色结果表明,与未处理组小鼠比较,博来霉素气管给药4个月时小鼠的肺组织中衰老细胞明显增多。
结论博来霉素气管多次给药可以建立小鼠肺纤维化模型,且模型小鼠具有肺纤维化进展不可逆、炎性反应明显减少两个重要特点,并提示肺纤维化与衰老细胞有一定关系。
[关键词] 博来霉素;纤维化;肺;模型[中图分类号] R563.02;R363 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2017)01(b)-0008-04特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种原因不明、以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱最终导致肺间质纤维化为特征的慢性疾病[1-2]。
不同造模方式对博莱霉素所致小鼠肺纤维化的影响1.南京医科大学附属泰州人民医院江苏泰州 2253002. 2.上海交通大学医学院附属新华医院老年科上海200092【摘要】目的建立博莱霉素诱导肺纤维化小鼠模型,比较经鼻腔滴入和经气管内滴入的成模差异。
方法将36只C57BL/6J雄性小鼠采用随机数字表法分成阴性对照组(C组)、鼻腔给药组(N组)和气管给药组(I组),每组12只。
N组和I组分别经鼻腔滴入和气管内一次性滴入博莱霉素5 mg /kg诱导肺纤维化模型,C组经鼻腔滴入5 mg /kg生理盐水。
随机选取各组4只小鼠于造模14天后处死后取肺组织。
计算肺系数;统计小鼠体重变化和生存曲线;HE和Masson染色观察小鼠肺组织病理变化,并进行Szapiel评分。
结果给予博莱霉素造模后,N组和I组小鼠均出现体重增长程度的下降;肺系数较C组上升,其中I组相比N组肺系数上升更明显;HE和Masson染色后N组和I组肺组织炎症和纤维化程度明显加重,并通过评分比较发现I组相比N组肺组织炎症和纤维化程度明显加重。
结论经鼻腔滴入和气管内滴入博莱霉素分别制备肺纤维化小鼠模型,其纤维化程度存在一定程度差异,气管内滴入博莱霉素的纤维化程度更高。
【关键词】博莱霉素;肺纤维化;肺系数特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是肺组织受损后异常修复所致的病理现象,早期以弥漫性肺泡炎、肺间质炎症为主,晚期发展为间质纤维化,表现为成纤维细胞异常增殖和细胞外基质过度沉积,导致肺组织结构破坏、功能受损[1]。
本病预后极差,多数患者确诊后中位生存时间仅2~3年[2]。
博来霉素(Bleomycin,BLM)制备肺纤维化模型是应用最广泛、研究最好的方法[3],可以诱导出明显的纤维化反应,并且在IPF患者中显示出几种组织学特征[4, 5]。
既往研究表明,博莱霉素的肺纤维化模型中评估肺组织炎症和纤维化的最佳时间是博莱霉素滴入后第14天[6]。
三种方法气管灌注博来霉素诱导小鼠肺纤维化的比较王志超;冯凡超;武琦;顾诚;徐泳;周贤梅【摘要】目的利用腰穿针气管插管、留置针气管插管和气管切开三种不同方法对C57BL/6J小鼠进行气管注射博来霉素诱导肺纤维化,探索腰穿针气管插管造模法、留置针气管插管造模法及气管切开造模法这三种方法对小鼠的影响.方法将120只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、腰穿针气管插管模型组、留置针气管插管模型组和气管切开模型组,分别利用不同方法气管注射博来霉素,观察小鼠的一般情况(体重变化和存活率)、组织病理学改变(HE和Masson染色)和羟脯氨酸水平.结果腰穿针气管插管模型组、留置针气管插管模型组造模后28 d小鼠体重均高于气管切开模型组,有统计学差异(P<0.01、P<0.001);各组小鼠存活率存在差异,除空白组外,气管切开模型组最低,留置针气管插管模型组最高,空白组和气管切开模型间有统计学差异(P<0.05),其余各组间没有统计学意义;肺组织肺泡炎及肺纤维化程度由高到低依次为气管切开模型组、腰穿针气管插管模型组和留置针气管插管模型组,且造模后21 d最重;气管切开模型组病灶分布均匀,腰穿针气管插管模型组和留置针气管插管模型组分布不均匀,以气管周围肺组织较重;腰穿针气管插管模型组和气管切开模型组造模后28 d羟脯氨酸水平显著高于空白组(P<0.01、P<0.001).结论综合多种因素,腰穿针气管插管造模法是三种造模方法中的最佳方法.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2019(029)005【总页数】7页(P51-57)【关键词】博莱霉素;肺纤维化;动物模型;气管灌注;小鼠【作者】王志超;冯凡超;武琦;顾诚;徐泳;周贤梅【作者单位】南京中医药大学附属医院,江苏省中医院呼吸科,南京 210029;南京中医药大学附属医院,江苏省中医院呼吸科,南京 210029;南京中医药大学附属医院,江苏省中医院呼吸科,南京 210029;南京中医药大学附属医院,江苏省中医院呼吸科,南京 210029;南京中医药大学附属医院,江苏省中医院呼吸科,南京 210029;南京中医药大学附属医院,江苏省中医院呼吸科,南京 210029【正文语种】中文【中图分类】R-33特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是特发性间质性肺炎的最常见形式,是一种慢性的、进行性的、不可逆性的和致命性的肺部疾病,主要发生在中老年人(诊断中位年龄为66岁,范围为55~75岁),局限于肺部,具有典型间质性肺炎的病理学或放射学改变[1]。
鼻腔滴注博莱霉素诱导ICR小鼠肺纤维化模型的建立栾智华;魏砚明;刘必旺;董立;侯渊;王永辉【摘要】目的:通过鼻腔滴注博莱霉素诱导ICR小鼠发病,寻求建立稳定且方法简单的肺纤维化模型.方法:ICR雌性小鼠分为对照组和模型组,模型组鼻腔滴注博莱霉素50μL(15 mg/kg),对照组滴注生理盐水.取小鼠肺组织进行HE、Masson染色、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化及羟脯氨酸含量测定.结果:与对照组小鼠相比,造模后第7天模型组小鼠的肺脏出现急性肺泡炎;第14天时,肺泡炎更加明显,开始出现肺纤维化;第28天时肺泡炎有所减轻,肺纤维化明显加重.第28天时模型组小鼠的肺脏HYP含量、α-SMA水平明显高于对照组.结论:鼻腔滴注博莱霉素(15mg/kg)可诱导ICR小鼠建立相对稳定的肺纤维化模型.【期刊名称】《山西中医学院学报》【年(卷),期】2017(018)002【总页数】4页(P18-21)【关键词】肺纤维化;鼻腔;博莱霉素;ICR小鼠【作者】栾智华;魏砚明;刘必旺;董立;侯渊;王永辉【作者单位】山西中医学院,山西太原 030024;山西中医学院,山西太原 030024;山西中医学院,山西太原 030024;山西中医学院,山西太原 030024;山西中医学院,山西太原 030024;山西中医学院,山西太原 030024【正文语种】中文【中图分类】R285特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是以肺泡上皮细胞损伤、肺实质弥漫性炎性浸润、成纤维细胞异常增殖以及细胞外基质过度沉积为主要特征的一大组疾病[1]。
目前IPF的病因和发病机制均不明确,所以建立稳定且方法简单的动物模型对研究肺纤维化非常重要。
本文通过鼻腔滴注博莱霉素,成功诱导建立了ICR小鼠肺纤维化模型,论述如下。
1.1 实验材料1.1.1 实验动物 ICR雌性小鼠,6 w龄,体质量16~18 g,SPF级,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证号:SCXK(京)2012-0001,给予常规颗粒饲料喂养,并自由饮水。
PM2.5对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的影响李清兰;杨拉维;刘刚【摘要】目的研究大气污染颗粒(PM2.5)对博莱霉素诱导肺纤维化的影响及分子机制.方法 24只雌性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、博莱霉素组和PM2.5组,其中博莱霉素组和PM2.5组小鼠气管一次性滴注博莱霉素5 mg/kg,假手术组滴注等体积生理盐水.造模后第1天气管内给药,PM2.5组和博莱霉素组分别滴注100 mg/kg PM2.5和等体积生理盐水.21 d后处死小鼠,HE和Masson染色观察肺组织病理变化,碱水解法测定肺组织羟脯氨酸含量,免疫印迹检测肺组织中IRE1和CHOP蛋白表达量.结果与假手术组相比,博莱霉素组发生明显肺炎和肺纤维化,羟脯氨酸含量明显升高(P<0.01),与博莱霉素组比较,PM2.5能加重肺纤维化程度,增加羟脯氨酸含量,促进IRE1和CHOP蛋白表达(P<0.01).结论 PM2.5加重博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化可能涉及内质网应激通路.【期刊名称】《广东医学院学报》【年(卷),期】2017(035)003【总页数】4页(P237-240)【关键词】大气污染物PM2.5;博莱霉素;肺纤维化【作者】李清兰;杨拉维;刘刚【作者单位】广东医科大学附属医院临床医学研究中心,广东湛江524001;广东医科大学附属医院临床医学研究中心,广东湛江524001;广东医科大学附属医院临床医学研究中心,广东湛江524001【正文语种】中文【中图分类】R363肺纤维化是一组由已知或未知原因引起、以肺间质慢性非特异性炎症和大量胶原纤维沉积为病理特征的疤痕化肺部疾病[1-3],至今病因不明,发病机制不清,且缺乏有效的治疗手段。
目前除了肺移植,尚无有效的抗纤维化药物,患者中位生存期仅3 ~ 5年[4-5]。
PM2.5也称大气细颗粒物,是指大气中空气动力学直径≤2.5 μm的细小颗粒。
由于其直径微小,被吸入人体后可达肺泡或进入血液,尤其对那些已有肺部基础疾病的患者产生不良影响[6-7]。
小剂量多次尾静脉注射与气管内滴注博来霉素致小鼠肺纤维化模型的比较研究孟婕;彭张哲;陶立坚【期刊名称】《中南大学学报(医学版)》【年(卷),期】2013(38)12【摘要】目的:与单剂量气管内滴药模型比较,研究小剂量多次尾静脉注射博莱霉素(bleomycin,BLM)致小鼠肺纤维化的特点与差异。
方法:40只雄性ICR(Institute for Cancer Research)小鼠随机分为模型组I、模型组II和两个对照组,每组10只。
模型组I尾静脉注射10 mg/kg BLM均持续14 d;模型组II于实验第一天气管内注入5 mg/kg BLM,两对照组分别给与等量生理盐水,28 d 后处死并收集肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)。
检测BALF细胞总数及蛋白含量、肺系数、羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP),观察肺组织病理改变。
结果:1)两种给药方法均能使肺组织发生明显的炎性和纤维化反应,两模型组BALF细胞总数及蛋白含量、肺系数、HYP含量、肺间质损伤指数较两对照组均显著增加(P﹤0.01);2)模型组I病灶主要分布在胸膜下及血管周围,模型组II 则主要分布在支气管和细支气管周围;3)模型组II病死率高于模型组I;4)模型组II BALF蛋白含量高于模型组I (P<0.05);BALF细胞总数、肺系数、HYP含量、肺间质损伤指数两组间差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:小剂量多次尾静脉注射与气管内滴入BLM都能成功制备肺间质纤维化动物模型,但两者纤维化形成的部位存在着一定的差异,小剂量多次尾静脉给药肺间质纤维化模型更接近特发性肺间质纤维化。
%Objective:To determine the characteristics and differences in bleomycin-induced lung ifbrosis model by repeated low-dose intravenousinjection and single dose intratracheal instillation of bleomycin. <br> Methods:Forty male ICR (Institute for Cancer Research) mice were randomly divided into a model group I, a model group II, and 2 control groups (10 mice in each group). In model group I, bleomycin was injected intravenously at 10 mg/(kg·d) for 14 consecutive days;and in model group II, bleomycin was instilled intratracheally at 5 mg/kg. The 2 control groups were given isotonic saline solution. At the 28th day, the mice were sacrificed and the bronchoalveolar lavage lfuid (BALF) was collected. The total cells and proteins in the BALF, pulmonary coeffcient, and hydroxyproline (HYP) content were determined. The pathological changes were observed by the eosin staining and Masson's trichrome staining. <br> Results:1) Both intravenous injection and intratracheal instillation of bleomycin resulted in severe and extensive inlfammation and ifbrosis inthe lungs. The total cells and proteins in the BALF, HYP content, pulmonary coeffcient and the pathological score of pulmonary ifbrosis were all signiifcantly increased in the 2 model groups (P<0.01). 2) Fibrosis was mainly under the pleura or around the vessel in model group I, and it was located near the bronehia and bronchioles in model group II. 3) The death rate was higher in the model group II than that in the model group I. 4) Proteins in the BALF were significantly higher in model group II than thatin model group I (P<0.05). There was no difference in the total cells in the BALF, the pulmonary coefficient, the HYP content, and the pathological score of pulmonary ifbrosis between the 2 groups (P>0.05). <br> Conclusion:The pulmonary fibrosis model can be successfully establishedby intravenous injection or intratracheal instillation of bleomycin, but the sites of pulmonary ifbrosis are different. The histological changes causedby the repeated low-dose intravenous injection of bleomycin is more similar to idiopathic pulmonary ifbrosis than that by the single dose intratracheal instillation.【总页数】5页(P1228-1232)【作者】孟婕;彭张哲;陶立坚【作者单位】中南大学湘雅医院呼吸科,长沙410008;中南大学湘雅医院肾内科,长沙 410008;中南大学湘雅医院肾内科,长沙 410008【正文语种】中文【相关文献】1.气管内移植人脐血间充质干细胞对博来霉素致小鼠肺纤维化的作用 [J], 郑金旭;王阳;宋萍;蒋婷;濮荔;端礼荣2.气管内滴入与雾化博莱霉素致小鼠肺纤维化模型的比较研究 [J], 李伟峰;胡玉洁;袁伟锋;李理;黄文杰3.气管内注射博来霉素致小鼠肺纤维化造模方式改良 [J], 杨宇;袁晓梅;吴敏娜;许芝山;霍书华;钟根深;郭悦鹏4.博来霉素气管多次给药诱导小鼠肺纤维化模型 [J], 陈孟毅;林帅;杜朋;李程程;孟爱民5.博来霉素致小鼠肺纤维化模型的建立及生物标志物的筛选 [J], 王国辽;张洁;饶家榕;莫睿文;远立国因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
㊃综 述㊃D O I 10 3760 c m a ji s s n 1673-436X 2018 23 015作者单位:230022合肥,安徽医科大学附属第一人民医院老年呼吸科(许露㊁张妍蓓㊁徐蒙蒙);200030上海交通大学附属胸科医院呼吸科(李锋)通信作者:李锋,E m a i l l i f e n g 741@a l i yu n c o m 肺纤维化小鼠模型建立方法的研究进展许露 张妍蓓 徐蒙蒙 李锋ʌ摘要ɔ 肺纤维化是以肺泡上皮细胞损伤㊁肺成纤维细胞大量增殖和细胞外基质聚集增多为主要特征的一类严重间质性肺疾病㊂目前肺纤维化的发病机制仍不清楚㊂利用动物模型尤其是小鼠模型可以为肺纤维化疾病的基础研究和药物筛选及有效性评价提供重要的参考㊂本文旨在总结近年来有关肺纤维化小鼠模型的建立方法,为将来建立更加完善的肺纤维化小鼠模型提供参考㊂ʌ关键词ɔ 肺纤维化;动物模型;小鼠R e s e a r c h p r o g r e s s i ne s t a b l i s h m e n to fm o u s em o d e l so f p u l m o n a r y fi b r o s i s X uL u * Z h a n g Y a n b e i X u M e n g m e n g L iF e n g *D e p a r t m e n t o f G e r i a t r i cR e s p i r a t o r y M e d i c i n e t h eF i r s tA f f i l i a t e d H o s p i t a l o fA n h u iM e d i c i a lU n i v e r s i t y H e fe i 230022 C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r L iF e n g E m a i l l if e ng 741@a l i yu n c o m ʌA b s t r a c t ɔ P u l m o n a r y f i b r o s i s i s a t y p e o f s e v e r e p u l m o n a r y i n t e r s t i t i a l d i s e a s e c h a r a c t e r i z e db y th e i n j u r y o f a l v e o l a re p i t h e l i a l c e l l sa n dt h e p r o l i f e r a t i o no f p u l m o n a r y f i b r o b l a s t sa n dt h ea c c u m u l a t i o no f e x t r a c e l l u l a rm a t r i x A t p r e s e n t t h e p a t h o g e n e s i so f p u l m o n a r y f i b r o s i s i ss t i l lu n c l e a r A n i m a lm o d e l s e s p e c i a l l y m o u s em o d e l s w e r e u s e d t o p r o v i d e r e f e r e n c e f o r b a s i c r e s e a r c h a n dd r u g s c r e e n i n g a n d e f f i c a c ye v a l u a t i o nof p u l m o n a r y f i b r o s i s T h i s p a p e r a i m s t os u mm a r i z e t h e e s t a b l i s h m e n tm e t h o d so f t h em o u s e m o d e l o f p u l m o n a r y f i b r o s i s i n r e c e n t ye a r s a n d p r o v i d e a r ef e r e n c e f o r t h e e s t a b l i s h m e n t o f am o r e p e r f e c t m o u s em o d e l o f p u l m o n a r y fi b r o s i s i n t h e f u t u r e ʌK e y w o r d s ɔ P u l m o n a r y f i b r o s i s A n i m a lm o d e l s M o u s e 肺纤维化是一种严重的间质性肺疾病,患者出现咳嗽㊁胸闷气促㊁进行性呼吸困难等症状,其病理特点为肺泡上皮细胞损伤和增殖㊁基底膜剥落或者损伤㊁肺泡实变和成纤维细胞病灶[1]㊂绝大部分肺纤维化患者病因不明(特发性),即特发性肺纤维化(i d i o p a t h i c p u l m o n a r y f i b r o s i s ,I P F )㊂I P F 以不断进展的肺纤维化为特征,组织病理类型为普通型间质性肺炎,高致残率和高致死率,患病率为2~29/10万人,中位生存时间仅为3~5年[2]㊂尽管目前有相对特异性的靶向治疗药物,然而I P F 仍缺乏特效的治疗方案㊂为了阐明肺纤维化尤其是I P F 的发病机制和寻找新的药物靶点,建立合适的肺纤维化动物模型显得尤为重要㊂本文旨在总结近年来有关肺纤维化小鼠模型的建立方法,为将来建立更加完善的肺纤维化小鼠模型提供参考㊂1 肺纤维化小鼠模型的观察指标理想的肺纤维化动物模型必须能复制典型普通型间质性肺炎的组织学特征,纤维化持续进展或至少不可逆,廉价㊁可重复㊁造模时间短[3]㊂到目前为止还没有动物模型能够模仿人类肺部纤维化的所有典型特征㊂尽管如此,小鼠肺纤维化模型仍然可以精确显示肺纤维化患者的重要特征,如诱发因素应与人类肺纤维化的常见诱因基本一致,病理组织学表现为明显炎性细胞浸润,病灶内肺泡萎缩,间质内成纤维细胞㊁胶原纤维增多;纤维化测定方面有胶原蛋白及纤维蛋白的代谢产物如羟脯氨酸增多㊂1 1 诱发因素 导致肺纤维化的病因复杂多样,常见的是吸烟㊁病毒感染㊁职业/环境因素相关[4]㊂目前国内外常见的介导小鼠肺纤维化动物模型的诱发因素包括:理化因素相关如二氧化硅㊁石棉;药物(或毒物)相关如博来霉素㊁百草枯;微生物感染相关如疱疹病毒以及基因相关的细胞因子过表达模型等均可诱发肺纤维化㊂1 2 组织病理学检测 组织病理学检测可确定气道及肺泡的病理变化是否符合典型的肺纤维化改变㊂与正常对照组相比,肺纤维化模型组的肺组织病理切片主要表现为肺泡间隔增厚,同时伴有巨噬细胞㊁淋巴细胞为主的细胞浸润,病灶内肺泡萎缩,间质内成纤维细胞增多等㊂后期可见肺泡壁显著增厚,肺泡结构破坏,肺间质纤维化瘢痕形成㊂肌成纤维细胞以及胶原纤维明显增多,交错纵横排列㊂利用改良的A s h c r o f t 量表(0~8级)可对动物模型进行标准化的纤维化评估[5]㊂第1~3级的特征是肺泡部分增大和肺㊃0381㊃国际呼吸杂志2018年12月第38卷第23期 I n t JR e s pi r ,D e c e m b e r 2018,V o l .38,N o .23泡壁变薄,第4级可以观察到纤维化改变,第5级单一的纤维灶汇合成片,第6级几乎不存在肺泡间隔,第7级肺泡结构部分消失,大片纤维化病灶,第8级观察到肺泡结构完全消失,纤维性闭塞㊂13 B A L F分析 B A L F内总细胞计数与分类计数㊁细胞因子测定是动物实验中常用的观察指标之一㊂对于肺纤维化动物模型,B A L F总细胞计数较正常对照组明显升高,尤其是中性粒细胞㊁巨噬细胞和淋巴细胞数量明显增多[6]㊂B A L F离心后获取的上清液,可通过酶联免疫吸附试验测定促炎促纤维化细胞因子,如T G F-β㊁T N F-α㊁I L-1α㊁I L-1β㊁I L-2等[7]㊂14羟脯胺酸(h y d r o x y p r o l i n e,H Y P)测定 H Y P为胶原纤维所特有,其在肺组织的含量可反映肺纤维化程度㊂因而,多数肺间质纤维化模型实验中都会检测H Y P含量㊂15肺纤维化相关的标志物T G F-β1是T G F-β家族中最关键的强效促纤维化因子,不仅能促进成纤维细胞增殖,激活肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,又能调节胶原蛋白等细胞外基质的基因表达并且抑制细胞外基质的降解[8]㊂α-平滑肌肌动蛋白(α-S MA)是肌成纤维细胞的标记,其表达增加表明肌成纤维细胞的收缩活动增强,促进肺组织纤维化[9]㊂采用免疫组化或者蛋白印迹检测T G F-β1和α-S MA的表达水平㊂2常见的肺纤维化模型造模方法21药物(或毒物)模型211博莱霉素(b l e o m y c i n,B L M) B L M是一种化疗药物,用于治疗多种肿瘤,如淋巴瘤㊁睾丸癌㊁卵巢癌和恶性胸腔积液㊂B L M最严重的不良反应是肺毒性,首先出现内皮细胞和间质毛细血管水肿㊁Ⅱ型肺泡上皮细胞坏死㊁炎性介体释放㊂随后,成纤维细胞增殖并转化成肌成纤维细胞[10]㊂目前,B L M是动物模型中最重要㊁应用最广泛的肺纤维化诱导剂㊂有研究表明,C57/B L6小鼠比B a l b/c 小鼠更容易受到B L M的纤维化影响[3]㊂B L M最常用的给药方式为气管内注入给药,常规单次剂量为5m g/k g㊂优点是单次给药后能够刺激小鼠肺损伤和促进纤维化,约第7天出现炎症反应及上皮细胞凋亡,第14天发生肺纤维化,且肺纤维化病变通常在第21~28天最明显㊂B L M诱导的肺纤维化程度和分布是呈剂量依赖性的㊂单次给药B L M会导致相对短暂的变化,而重复的给药则会导致长期的病变,这与人类I P F更为相近[8]㊂B L M还可以经静脉给药,常规剂量为20m g/k g,每周2次,为期4~8周,该方案与化疗期间人体给药而致病的方式一致;且静脉注射B L M诱导的肺纤维化改变与人类肺纤维化病变先由胸膜开始的特点更加符合,操作相对简单㊁方便㊁安全;但时间相对较长,一般是在给药4周后开始观察到上皮细胞水平的病理改变[11]㊂另外一种给药方式是腹腔注射,分别在第0㊁7㊁14天给予100m g/k g的B L M,第28天时胸膜下区域可见正常肺泡结构破坏㊁明显纤维化[12]㊂近年随着技术进步,出现了雾化吸入给药㊁微型喷雾器给药,微型药物泵持续给药等新型造模方式,这些造模方式使药物在肺内分布更加均匀,模型病变部位更加符合临床㊁但缺点是造模耗时长㊁用药量大㊁成本高等㊂212百草枯百草枯是一种广泛使用但对人体有剧毒作用的除草剂,肺是其主要的靶器官㊂百草枯可引起肺水肿㊁出血㊁间质炎症和肺泡上皮损伤,进而导致严重的纤维化[13]㊂在动物实验研究中,最常用的给药途径是腹腔注射㊂常规剂量为10m g/k g的百草枯经腹腔注射小鼠,每天1次,第14天出现肺纤维化改变,第28天时更明显[14]㊂另外,T o m i t a等[15]经鼻腔给予C57/B L6小鼠002m g/ 20μl的百草枯,每天1次,3周后出现典型的肺纤维化改变㊂目前百草枯中毒的肺纤维化发病机制不明,也缺乏对其所致肺纤维化的特效药物㊂213胺碘酮胺碘酮是一种属于Ⅲ类抗心律失常药及轻度非竞争性的α和β肾上腺素受体阻滞剂,常用于抗心绞痛㊁抗心律失常㊂肺纤维化是其严重的不良反应㊂胺碘酮可诱导溶酶体应激(包括自噬)和内质网应激,并导致肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬依赖性凋亡㊂有研究将单次剂量为08m g/k g的胺碘酮经气管滴入小鼠体内,1次/5d㊂在第7天时可见肺泡基底膜的剥蚀和间质性水肿,第14天时观察到大量的胶原纤维沉积[16]㊂动物模型显示出的组织病理学上的改变类似于临床胺碘酮引起的肺毒性改变㊂214异硫氰酸荧光素(f l u o r e s c e i ni s o t h i o c y a n a t e, F I T C) F I T C是另一种用于诱导实验性肺纤维化的化合物㊂经气管注入的F I T C会导致肺泡和血管通透性增加,持续的刺激导致肺损伤,在第14到21天内出现肺纤维化改变,持续约24周[3]㊂已有研究证明,F I T C所致的肺纤维化模型是由于肺损伤时机体激活T h2细胞因子(如I L-13),并由趋化因子配体(c h e m o k i n e l i g a n d12, C C L12)调节介导成纤维细胞的聚集[17]㊂该模型在B a l b/c 和C57/B L6小鼠中的效果显著,将7m g/k g的F I T C溶于50μl的P B S,即给药浓度为14m g/m l的溶液,然后经气管滴入小鼠肺部[18]㊂该模型的优点是可以持续数月的纤维化反应,且因为F I T C可与实质蛋白在最初损伤的局部区域持续不断结合,故易于追踪被荧光标记的纤维化组织㊂其缺点是溶液必须现配现用,无临床相关性,而且因为F I T C的批次和通过声波降解产生的颗粒的大小不同导致效果也不同[1]㊂22理化因素相关模型221石棉石棉肺是目前职业暴露人群中一种常见的肺纤维化疾病㊂人类的石棉肺和I P F在其结构分布上是相似的,且组织病理学特征均表现为U I P[19]㊂石棉肺中的石棉颗粒能直接表明病因,因此易于与I P F相鉴别㊂从机制上看,石棉纤维的沉积通过诱导肺泡上皮细胞凋亡,巨噬细胞的M2极化,以及激活T细胞过度产生亲纤维化细胞因子,导致肌成纤维细胞分化和细胞外基质生成,从而致肺纤维化㊂石棉纤维经气管内单次灌注给药是一种相对快速的纤维化造模方式,目前的研究多以角闪石进行造模,第7天出现纤维化改变,并在第14天达到高峰㊂但是,病变在肺叶间的分布是不均匀的,其纤维化的分布往往集中在㊃1381㊃国际呼吸杂志2018年12月第38卷第23期I n t JR e s p i r,D e c e m b e r2018,V o l.38,N o.23肺组织中心而不是胸膜下,与人类I P F的病理改变不相符㊂吸入方法诱导的的纤维化病变更接近胸膜,然而该方式可能需要1个月,尤其是使用温石棉[20]㊂222二氧化硅矽肺病是一种因吸入含硅的粉尘而导致的肺纤维化病变,在采矿和建筑行业中非常普遍㊂它主要通过二氧化硅颗粒的直接细胞毒性,介导肺巨噬细胞激活后刺激氧化应激,激活趋化因子和炎性细胞因子,促使上皮细胞和内皮细胞的凋亡㊁成纤维细胞的增殖和细胞外基质的过度沉积而失去肺泡结构[21]㊂常用的动物模型是C57B l/6小鼠,二氧化硅可以通过雾化㊁气管内滴入或经口咽吸入等方法[1]㊂吸入方法更接近于人体暴露,但时间很长(40~120d),而气管内给药成本较低,时间更短(14~28d)[20]㊂常规的气管内滴注给药剂量为200m g/k g,第14天左右出现肺纤维化损伤㊁胶原蛋白分泌明显增多[22]㊂223细颗粒物(p a r t i c u l a t e m a t t e r25,P M25) P M25是指空气动力直径小于25μm的颗粒物,大约96%的P M25沉积在肺部,极易对机体的肺部产生不利的影响[23]㊂此外,P M25中含有多种成分,如多环芳烃㊁含氧挥发性有机化合物㊁重金属等㊂在第1㊁8㊁15㊁22天,对雌性I C R小鼠经鼻滴入P M25(40m g/k g,20μl/只),肺组织出现炎症反应,肺泡间隔增宽,胶原沉积[24]㊂本实验室课题组的初步研究表明,将P M25用生理盐水配制成混悬液后,每次以78m g/k g的剂量经鼻滴入小鼠体内,每周3次,连续6周,成功复制肺纤维化模型(结果尚未发表)㊂224放射放射治疗是多种恶性肿瘤如肺癌㊁乳腺癌等的重要治疗手段,尽管应用精准放疗定位,但在辐射束路径中损伤正常肺组织的偶然照射难以完全避免,而且往往会导致放射性肺损伤[25]㊂研究认为放射诱导肺纤维化的病理生理机制涉及自由基介导的D N A损伤和诱导T G F-β表达,导致肺泡I型上皮细胞的亚临床损伤,临床表现为放射性肺炎㊂由于异常的修复,使得放射性肺炎向纤维化发展㊂C57/B L6小鼠对放射所致纤维化更加敏感,单剂量给予12~15G y的全身照射可在20周时导致肺纤维化㊂为了避免放射时全身多器官组织无保护而发生纤维化改变,目前通常针对胸膜进行放射,造模时间大约需要24周[1]㊂225油酸油酸可介导肺纤维化,主要是经尾静脉给药,但关于给药剂量尚未达成共识㊂L i u等将禁食禁饮12h 的小鼠从尾静脉注入03m l/k g的油酸,发现肺组织在第1 ~3天出现肺泡炎性改变,肺泡上皮增生,肺泡间隔增宽,第7天后炎症减轻,组织开始增生,可见成纤维细胞增殖,胶原纤维首先出现在支气管周围㊁肺泡间隔,再出现于肺泡内㊂第28天纤维增生趋向平缓[26]㊂226高氧临床研究表明氧化应激在肺纤维化中的发病机制中起重要作用㊂将新生小鼠放置在密封的有机玻璃室中,并暴露于高氧(F i O2=60%)的条件下,持续至45d,肺部气道㊁血管和肺泡区域出现了明显的胶原沉积;T G F-β1和Ⅰ型胶原表达显著增加[27]㊂将新生小鼠被放置在有机玻璃室中,氧气持续以35L/m i n的速度输送,并保持恒定的85%氧气水平直至4周,实验发现2周时胶原沉积,4周时胶原明显增加,肺泡间隙增厚[28]㊂23微生物微生物可以作为特定的病因研究不同疾病所致的肺纤维化,其中病毒㊁细菌最常见㊂疱疹病毒是能在自然宿主中引起肺纤维化的最显著的例子之一㊂通过滴鼻给予小鼠1ˑ105p f u的γHV-68病毒,21d后肺间质中的T G F-β含量增多,促进细胞外基质基因的表达,诱导老年小鼠(>15个月)的肺纤维化发生[29]㊂有实验发现肺炎链球菌通过释放肺炎球菌溶血素加重肺纤维化的病变[30]㊂24基因相关模型241家族I P F的模型既往研究发现,占I P F的2%~ 20%的家族性特发性肺纤维化(f a m i l i a li n t e r s t i t i a l p n e u m o n i a,F I P)与4种基因的突变密切相关:表面活性蛋白C㊁表面活性剂A2㊁端粒酶R N A复合物㊁端粒酶逆转录酶㊂有研究发现,突变的表面活性蛋白C在F I P成员的肺泡上皮细胞中均有表达,引起Ⅱ型肺泡上皮细胞的内质网应激,而发生内质网应激的小鼠在B L M诱导后更易引起肺纤维化病变㊂因此,内质网应激导致肺泡上皮细胞损伤的人群,在发生二次感染损伤后,其肺纤维化倾向更加明显[31]㊂体外实验表明,表面活性剂A2的突变可能引起内质网应激,就像表面活性蛋白C突变一样㊂研究显示,表面活性剂A2有缺陷的小鼠更易引起肺泡上皮细胞损伤/死亡以及更明显的肺部炎症[32]㊂端粒功能障碍导致肺泡上皮干细胞衰老,导致肺部结构重塑且引起炎症反应㊂端粒酶逆转录酶在B L M㊁低氧㊁或二氧化硅引起的肺损伤中均有短暂升高[20]㊂建立F I P模型促进对其遗传学机制的进一步理解不仅有利于了解对特定家庭致病的靶基因,而且有可能发现对I P F的发病机制有重要意义的关键途径㊂242靶向Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤模型目前研究证明I P F涉及肺泡上皮细胞的损伤和增生,故建立针对肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤模型是另一种研究肺纤维化的途径㊂该模型是利用转基因技术将肺泡上皮细胞的启动子通过载体融合诱导白喉毒素受体,注入小鼠受精卵中,建立Ⅱ型肺泡上皮细胞中表达白喉毒素受体的转基因小鼠[33]㊂通过每天腹腔注射80μg/k g的白喉毒素,连续14d,引发类似于I P F的肺泡上皮细胞增生增殖㊁间质增厚的病理改变㊂第21天开始出现纤维化改变并持续到第28天㊂该模型对于将上皮细胞特异性损伤转化为纤维化作为下游通路的研究具有重要的意义[34]㊂243细胞因子过度表达模型通过病毒载体的基因转移和转基因方法来诱导促纤维化细胞因子如T G F-β㊁T N F-α㊁I L-1β等的过度表达并通过介导下游信号通路而引发更接近于人类肺纤维化特点的表型[20]㊂在腺病毒诱导T G F-β过表达的小鼠模型中,第4天可观察到肺中活化的T G F-β显著升高,持续至第14天㊂肺部T G F-β的表达伴随中性粒细胞㊁巨噬细胞等浸润㊂肺胶原蛋白量在第4天亦有明显增加[35]㊂通过腺病毒载体介导的I L-1β过表达也被证明可引起肺纤维化㊂值得注意的是,I L-1β过表达也增加了T G F-β㊃2381㊃国际呼吸杂志2018年12月第38卷第23期I n t JR e s p i r,D e c e m b e r2018,V o l.38,N o.23的表达㊁T G F-β活性和血小板源生长因子(P D G F)的表达,表明它们是I L-1β的促纤维化途径的潜在下游介质[36]㊂同样,腺病毒介导的T N F-α基因转移也可引起肺纤维化㊂与I L-1β相似,T N F-α的过度表达导致早期炎症反应,大量中性粒细胞㊁巨噬细胞和淋巴细胞大量涌入㊂肺部病理切片显示在第7天出现α-S MA细胞,并且在第14天持续增加[1]㊂25其他肺纤维化模型由于目前尚没有一种肺纤维化的动物模型能完全模拟I P F的病理特点,故研究人员尝试将这些动物模型人源化㊂近年来,将人类I P F成纤维细胞静脉滴注到免疫缺陷型非肥胖的糖尿病小鼠(N O D/S C I D)中建立的人源化肺纤维化模型已经得到了广泛的关注[20]㊂肺纤维化的发展相对较快(注射后30~35d内发生)㊂该模型因可将成纤维细胞用细胞渗透染料标记,故充分了解成纤维细胞在肺纤维化发展的不同阶段的分裂分化状况,使研究不同类型肺纤维化患者的成纤维细胞成为可能,有助于进一步了解I P F的异质性,并可了解上皮成纤维细胞在免疫细胞缺乏时对疾病发病机制的影响[1]㊂但免疫缺陷小鼠价格昂贵,并需要专门的饲养环境,限制其广泛的应用㊂I P F是一种与年龄相关的疾病,近年来,衰老的标志如基因组不稳定性㊁端粒变短㊁表观遗传改变㊁细胞生理机能的下降和细胞衰老等,都被认为是与肺纤维化相关[37]㊂研究表明,老年小鼠比青壮年小鼠更容易受到包括B L M在内的促纤维化诱导剂的刺激㊂通过滴鼻给予小鼠γ-HV-68病毒,发现老年小鼠(>15个月)会诱导肺纤维化发生,而幼年小鼠则缺乏[20]㊂部分肺纤维化是因外伤致肺部挫伤而引起的,已建立数个相关的肺挫伤性纤维化损伤动物模型[1]㊂在2007年利用体表撞击器首次开发了一种类似单侧闭胸损伤的小鼠模型,目前正在与各种转基因动物一起使用[38]㊂在损伤后第7天,发现除了闭塞性细支气管炎的改变,还有肺纤维化的病变[39]㊂3总结动物模型是研究肺纤维化的一个重要工具,它为探索I P F和其他肺纤维化疾病发病机制及寻找治疗方法提供了重要的线索㊂综上所述,虽然目前并没有一种理想的模型能够完全复制肺纤维化患者的所有病理生理特征和症状,但利用现有不同类型的肺纤维化模型不仅能了解肺纤维化的不同特点,而且能够筛选出对肺纤维化更敏感的小鼠品系㊁寻找新的与临床类似的肺纤维化动物模型的确诊方法㊂相信随着技术的进步和研究的改进,肺纤维化小鼠模型的建立方法一定会不断得到完善,从而建立更符合人类肺纤维化病理过程的肺纤维化模型㊂参考文献1 M o o r eB L a w s o n W E O u r y T D e ta l A n i m a l m o d e l so ff i b r o t i c l u ng d i s e a s e J A mJR e s p i rC e l lM o lB i o l2013492167-179D O I101165r c m b2013-0094T R2 R a g h uG C o l l a r d H R E g a nJ J e t a l A no f f i c i a lA T S E R SJ R S A L A T s t a t e m e n t i d i o p a t h i c p u l m o n a r y f i b r o s i se v i d e n c e-b a s e d g u i d e l i n e sf o r d i ag n o s i s a n d m a n a g e m e n t JA mJR e s p i rC r i tC a r eM e d20111836788-824D O I101164r c c m 2009-040G L3 M o o r e B B H o g a b o a m C M M u r i n e m o d e l s o f p u l m o n a r yf i b r o s i s J A m JP h y s i o lL u ng C e l lM o lPh y si o l20082942152-1604 P u g l i s i S T o r r i s i S E G i u l i a n oR e t a l W h a tw ek n o wa b o u tt h 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t㊃3381㊃国际呼吸杂志2018年12月第38卷第23期I n t JR e s p i r,D e c e m b e r2018,V o l.38,N o.23h o m e o s t a s i s a n d a l v e o l a r e p i t h e l i a l c e l l s t r e s s i na m i o d a r o n e-i n d u c e d l u n g f i b r o s i s J T o x i c o l S c i20141421285-297D O I101093t o x s c i k f u17717 M o o r eB B M u r r a y L D a sA e t a l T h e r o l eo fC C L12i nt h er e c r u i t m e n t o f f i b r o c y t e sa n dl u n g f i b r o s i s J A m JR e s p i rC e l lM o lB i o l2006352175-181D O I101165r c m b2005-0239O C18 C h r i s t e n s e nP J G o o d m a nR E P a s t o r i z aL e t a l I n d u c t i o no fl u n g f i b r o s i si nt h e m o u s e b y i n t r a t r a c h e a li n s t i l l a t i o n o ff l u o r e s c e i n i s o t h i o c y a n a t e i sn o tT-c e l l-d e p e n d e n t J A m JP a t h o l199915551773-1779D O I101016S0002-94401065493-419 K i s h i m o t oT K a t oK A r a k a w aH e t a l C l i n i c a l r a d i o l o g i c a la n d p a t h o l o g i c a l i n v e s 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doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.005•论著.内窥镜引导气管注入博来霉素建立小鼠肺纤维化模型余华军S吴尚2,黄慧2,林碧云3,伍俊3,欧华俊1张海涛2(广东医科大学1.实验动物中心,湛江524023;2.生物化学与分子生物学教研室,湛江524023;3.附属医院呼吸内科,湛江524001)[摘要]目的建立在内窥镜直视下气管插管法,并采用此方法建立博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型。
方法将5只C57BL/6J小鼠,在内窥镜直视下进行小鼠气管插管,建立气管插管方法及步骤。
将10只C57BL/6J小鼠随机均分为对照组和实验组,按照建立的方法进行气管给药,对照组气管插管给予50yL的生理盐水,实验组气管插管给予50y.L3.5mg/kg的博来霉素,观察各组小鼠的死亡率。
灌注后28d,颈椎脱臼法处死小鼠,比较两组小鼠肺组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和猪脯胺酸(HYP)、丙二醛(MDA)含量。
取小鼠肺组织进行病理切片,HE、Masson染色观察肺组织的病理情况。
结果15只C57BL/6J小鼠采用多功能内窥镜直视下气管插管均能成功,无小鼠因插管后死亡,5只给予印度墨汁的预实验小鼠气管下端开始直至肺部均有黑色物质均匀分布。
与对照组比较,实验组小鼠肺组织中HYP、MDA含量增高(P<0.01);GSH-PX、SOD含量降低(P<0.01)。
进行HE、Masson染色显示,与对照组比较,实验组小鼠肺组织胶原沉积严重,病理学表现符合肺纤维化改变。
结论采用多功能内窥镜直视下气管给药的方法,给药量准确、安全、简便。
以此方法建立博来霉素诱导小鼠肺纤维化的模型成功率高,值得推广应用。
[关键词]内窥镜;气管插管;肺纤维化;动物模型[中图分类号]Q95-33[文献标志码]A[文章编号]1674-5817(2019)02-0094-05特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)的病因不明,可由环境中的有害物质、病毒感染、胃食管反流和吸烟等因素刺激,通过炎症、组织损伤、修复持续叠加造成上皮细胞损伤和成纤维细胞活化,引起细胞外基质沉积,最终[收稿日期]2018-08-27[基金项目]国家自然科学基金(81772634,81770034);广东医科人学科研基金(2XK16042);湛江市非资助科技攻关计划项目(2017B01064)[作者简介]余华军(1985-),硕I:研究生。
主要从事天然药物活性成分的应用研究。
E-mail:hjyu@ [通信作者]张海涛(1970-),男,博士,教授,从事肿瘤分了细胞生物学研究和天然药物生化药埋研究。
E-mail:taohaizhang33@ 发展为肺纤维化。
建立稳定的肺纤维化动物模梨,対抗肺纤维化药物筛选和评价极其重要。
目前国际上应用最为广泛的是博来霉素诱导动物肺纤维化模型。
该模型主要通过气管给药、经鼻滴注、腹腔注射或静脉给药等方法建立[1-4],其中一次性气管内灌注的方法使用较为普遍。
气管内灌注又分为直接灌注和间接灌注,两者主要是有创与无创的区别。
在肺纤维化小鼠模型制备的动物选择方面,C57BL/6J小鼠是最常用品系叫目前研究及应用的小鼠气管插管给药方法中,大多借助于专用仪器设备辅助插管。
但普遍存在的不足是小鼠咽部结构视野范围较小及模糊,不能清晰直观进行插管操作。
本研究拟采用在多功能内窥镜直视下对C57BL/6J小鼠进行气管插管,并通过此方法建立博来霉素诱导小鼠肺纤维化模烈,分析及评价动物模梨的稳定性,为今后气管给药、肺纤维化及相关肺部疾病的研究应用奠定实验基础。
1材料与仪器1.1实验动物SPF级C57BL/6J小鼠15只,18~22g,雌雄各半,购自中山大学实验动物中心[SCXK(粤)2016-0029]。
常规饲养于广东医科大学实验动物中心SPF级设施,12/12h昼夜光照,温度22~24°C,相对湿度70%[SYXK(粤)2015-0147]。
1.2主要试剂和仪器博来霉素购自美国Sigma公司;疑脯胺酸(HYP)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和超氧化物歧化酶(SOD)测试盒均购自南京建成公司;生理盐水、水合氯醛、内窥镜、冷光源放大镜和恒温加热板均购自北京鼎国公司;病理组织切片机和石蜡包埋机均购自美国赛默飞公司。
1.3方法1.3.1内窥镜直视下气管插管操作步骤①使用体积分数10%水合氯醛麻醉5只小鼠,对照组和实验组各5只;②用丝线圈住小鼠门牙将小鼠悬挂在木板上,背部用泡沫垫高,保持头部和水平的角度在45。
左右,用银了轻轻顺向拉出舌头;③冷光源放大镜放于动物上部,用咽拭了将咽部分泌物擦净,使用棉签下压舌部调整动物倾斜角度;④使用已酒精消毒的内窥镜探头伸入小鼠口腔内,调整角度直至可通过内窥镜显示面板清晰看到声门,固定探头软管;⑤于持气管导管贴门牙中间进针,沿着上频中线插入,观察小鼠呼吸频率,在小鼠呼吸时,声门打开的瞬间插入导管,注入50pL印度墨汁;⑥迅速从气道拔出套管针,抓着小鼠耳背皮肤直立旋转30s,使药物在肺内分布均匀,侧卧位放置于恒温加热板(37°C)上。
1.3.2实验处理対照组和实验组各5只,按上述操作步骤,分别气管给予50|1L的生理盐水和50pL 平3.5mg/kg的博来霉素[6]。
1.3.3博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型鉴定常规饲养28d[7],颈椎脱臼法处死小鼠,取小鼠左肺浸于质量分数4%的多聚甲醛溶液中固定,进行石蜡包埋,病理切片,HE、Masson染色,小鼠右肺进行HYP、MDA、GSH-PX、SOD检测。
1.4统计学处理采用SPSS17.0软件进行统计分析,正态分布的计量资料用壬土s表示,多个样本均数的比较采用单因素方羞分析,两组间比较采用/检验,P<0.05为羞异有统计学意义。
2结果2.1多功能内窥镜直视下气管插管在多功能内窥镜显示面板上掌握小鼠的呼吸频率,在声门打开瞬间迅速插入导管,一边管口封堵30s,小鼠此时出现躁动、口唇紫纟甘等缺氧症状,解除封堵后小鼠呼吸恢复、缺氧症状逐渐缓解,则表明插管成功[8]。
2.2插管过程按照上述的气管插管方法,使用颈椎脱臼法处死小鼠,解剖暴露气管及胸腔,发现5只注入印度墨汁的小鼠气管下端直至肺部均有黑色物质均匀分布(图1)。
且各组小鼠均插管成功,插管成功率髙,给药量精确,插管后无小鼠死亡情况。
2.3博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型山表1可见,小鼠肺组织中HYP、MDA含量,与对照组比较,实验组含量增加(P<0.01);小鼠肺组织中GSH-PX、SOD活性,与对照组比较,实验组活性降低(卩<0.01)。
小鼠肺组织进行病理切片经HE、Masson染色,显微镜下观察(图2),对照组的肺组织结构清晰,实验组肺泡间隔显著变宽,肺泡结构破坏严重,萎缩塌陷严重,胶原纤维显著增多,出现大量炎症细胞浸润。
从以上生化指标及病理学观察结果表明,应用该气管插管方法,复制博来霉素诱导小鼠肺纤维化的模型成功率较高。
3讨论在医学研究上,人们通常借助于人类疾病动物模型来认识和研究各种疾病的发展及防治。
建立合适的肺纤维化动物模烈对临床上治疗肺纤维化疾病药物的筛选,探讨其发病机制具有重要的作用。
诱导肺纤维化常用博来霉素、二氧化硅、异硫孰酸荧光素,通过辐射、病毒载体和转基因系统等[9,则。
应用博来霉素来诱导肺纤维化是目前最普遍的实验性肺纤维化动物模型[11-14]。
博来霉素的造模给药途径有气管内滴入、雾化吸入、腹腔注射和静脉注A:;B:;C:;D:小鼠气管插管;E:气管给了印度墨汁后;F:j12Figure1Endotracheal intubation under direct vision表1小鼠肺组织中的生化指标Table1The lung indexes of mice组别HYP/yg g-1MDA/mmol L-1GSH-PX/U mL-1SOD/U・mL-1对照组16.68 1.33 3.85±0.441090.54土74.55181.97±4.84实验组84.01 6.85*22.76 6.30*357.2321.80*87.91士16.91* :,P<0.01,n=5A、B分别为对照组、实验组(HE X100);C、D分别为对照组、实验组(Masson X100)2<Figure2Pathological changes of pulmonary fibrosis in mice射等方式,但各有优缺点。
Robbe[1W素,诱导大鼠肺间质纤维化。
此方法避免了大鼠于术感染的风险,提髙了造模成功率及肺内博来霉素分布均匀,但此方法消耗的博来霉素量大,不丽扌大剂量和连续多次小剂量尾静脉注射博来霉素造模,此方法复制的动物模型更接近于特发性肺纤维化,但进行尾静脉注射对实验人员的技术操作要求较髙。
此外,腹腔内多次注射博来霉素建立的肺纤维化模型[17],亦存在给药次数多、剂量大和造模时间长等缺点。
目前国内外最常用、最受认可的是一次性气管内灌注博来霉素诱导的动物肺纤维化模梨阴。
直接灌注法是通过气管插管向气管内灌注博来霉素,间接灌注法是在动物颈部切口,找到气管后向气管内注入博来霉素。
在气管给药时,研究者更多采用气管切开后滴注的方法,但这种方法対小鼠造成有创损伤,影响实验的重复性及各项生理指标。
比较以上给药方式,最理想的是采用无创的方式,一次性气管内灌注博来霉素诱导肺纤维化,但这种方法操作技术要求高,需借助一些仪器设备。
实验人员通常利用专门仪器设备进行辅助插管。
如Brown等[19]和Spoelstra等]在专业喉镜引导下进彳亍气管插管给药。
Vergar1等]利用关节镜对小鼠进行气管插管,虽然成功率高,损伤小,但是需要特殊设备,成本高。
本实验采用内窥镜辅助下实施小鼠气管插管,利用内窥镜探头冷光源进行调节光亮度及放大倍数,实验人员能在内窥镜的面板上更好地观察咽喉部的结构、小鼠的呼吸频率及声门的开启时间,掌握插管的方向,提高插管的成功率。
HYP含量能直接反映出结缔组织疾病的胶原代谢情况,通过检测组织中HYP含量,可以判断组织纤维化程度,还可以对预防与治疗纤维化药物的筛选。
而MDA常与SOD的检测相互配合,SOD的活性髙低间接反映机体清除氧自由基的能力,而MDA 的高低则反映机体细胞受自山基攻击的严重程度。
GSH-PX能特异催化还原梨谷胱甘肽对过氧化氢的还原反应,起到保护细胞膜结构和维持正常功能的作用。
通过此方法建立的小鼠肺纤维化模型,实验结果显示小鼠肺组织中HYP、MDA含量,与対照 组比较,实验组含量均增加;小鼠肺组织中GSH-PX、SOD活性,与对照组比较,实验组含量均降低。