不同洗板方式对ELISA法检测HIV抗体结果的影响

ELISA快速法检测HBsAg时手工洗板和洗板机洗板的结果比较作者：王静来源：《中国医药导报》2010年第09期[摘要] 目的:探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的洗板技术,比较手工洗板和洗板机洗板对检测结果的影响。

方法:对50例临床确诊为HBsAg阴性的标本,按试剂说明要求进行检测,分别用手工洗板、洗板机洗板洗1～5次后由酶标仪判读结果,对阴性数、阳性数、假阳性率进行分析。

结果:手工洗板严格按照试剂说明书的要求操作,未出现假阳性结果;洗板机洗板1次,假阳性率高达90%;洗板2次,假阳性率为38%;洗板3次,假阳性率为2%;洗板4～5次,未出现假阳性。

结论:在ELISA方法检验当中,手工洗板和洗板机洗板没有本质上的差别,只要操作合乎要求,均能得到正确、可靠的结果。

[关键词] 酶联免疫吸附试验;手工洗板;洗板机洗板[中图分类号] R446.61 [文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2010)03(c)-069-02乙型肝炎病毒采用ELISA检测法具有操作简便、灵敏度高、试剂成本低、环保和适用于大批量人群抗原、抗体筛查等优点,目前在国内实验室被广泛使用[1]。

但在操作中影响结果的因素也很多, 涉及标本的收集、保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面,尤其洗板是一项极重要的环节, 洗板次数不够或洗涤不干净会造成假阳性的出现。

在实验室中,ELISA 测定的洗板方式一般有2种,即手工洗板和洗板机洗板。

本文就手工洗板和洗板机洗板对检测结果的影响进行了分析,现报道如下:1 材料与方法1.1 材料酶标试剂:上海实业科华生物技术有限公司生产。

阴性血清标本:50份经放射免疫法确诊为乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性的非脂血,无溶血的健康成年人外周血标本分离后的血清为检测对象,由辽宁省中医药大学附属医院临床检验中心提供。

1.2 方法按试剂说明要求进行检测,分别用手工洗板,洗板机1～5次洗板后由酶标仪判读结果,对阴性数、阳性数、假阳性率进行分析。

ELISA实验要点洗涤是关键ELISA是一种基于特异性抗原-抗体反应的免疫测定方法，通常用于检测特定物质的存在和浓度。

在进行ELISA实验时，洗涤是至关重要的步骤之一、本文将详细介绍ELISA实验中洗涤的要点，以确保实验结果的准确性和可靠性。

1. 使用合适的洗涤缓冲液：洗涤缓冲液在ELISA实验中起到去除非特异性结合和杂质的作用。

常用的洗涤缓冲液包括PBS（含Tween 20）、TBST（含Tween 20）、PBST（含Tween 20）、Tris缓冲液等。

选择合适的缓冲液要考虑免疫试剂的稳定性、抗体的特异性以及杂质的去除效果。

2.洗涤次数和时间：洗涤的次数和时间是影响洗涤效果的重要因素。

通常情况下，建议进行3-5次洗涤，每次洗涤时间约为5-10分钟。

过短的洗涤时间可能无法完全去除非特异性结合和杂质，而过长的洗涤时间则可能导致特异性结合的抗原-抗体反应受到影响。

3.洗涤液的温度：洗涤液的温度也是影响洗涤效果的因素之一、通常情况下，洗涤液的温度应接近室温，避免过热或过冷的情况发生。

过热的洗涤液可能会导致抗原和抗体的失活，而过冷的洗涤液则可能影响特异性结合的发生。

4.洗涤的力度和频率：洗涤的力度和频率也会对洗涤效果产生影响。

通常情况下，洗涤时的振荡力度要适中，避免产生气泡或引起试管内的液体溢出。

此外，洗涤的频率要根据实验的具体要求来确定，可以根据试剂商提供的推荐条件进行操作。

5.避免交叉污染：为避免交叉污染，洗涤缓冲液和洗涤液的使用要严格分开。

每次洗涤后，必须充分清洗洗涤缓冲液，并确保不留下任何残留物。

此外，使用专用的洗涤缓冲液瓶和洗涤液瓶，避免与其他实验室用品混淆。

6.避免干燥和过度吸液：在洗涤过程中，避免试管完全干燥，尽量在试管内液体完全排出后立即进行下一步操作。

此外，在吸液过程中要注意避免过度吸液，以免将特异性结合的物质带走。

7.避免接触污染源：在进行洗涤操作时，要尽量避免接触可能引起交叉污染的物品，如手指、纸巾、实验台等。

基础医学研究中不同加样、洗板方式对ELISA结果的影响郑泽美【摘要】目的:比较自动加样机联合自动洗板机与手工加样、洗板方式对酶联免疫吸附试验(enzyme linked immuno-sorbent assay,ELISA)结果的影响.方法:采用鸡二脂酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)双抗体夹心法试剂盒(供氢体底物为四甲基联苯胺),对倍稀释标准品成5个梯度浓度,采用自动加样机联合自动洗板机和手工加样、洗板,然后经显色后立刻用酶标仪(波长450 nm)检测系列浓度标准品的吸光度(optical density,OD)值,用SPSS软件对浓度和OD值进行相关分析和回归分析.结果:自动加样机联合自动洗板机得出的标准浓度曲线方程的相关系数r、拟合优度R2及回归系数b值明显高于纯手工加样、洗涤方式,差异有显著性(P＜0.05).结论:在基础医学研究过程应用ELISA需注意不同加样方式和洗涤方式会对ELISA结果造成影响,尽量选用自动化程度较高的方法,以减少误差.【期刊名称】《医疗卫生装备》【年(卷),期】2016(037)007【总页数】3页(P107-109)【关键词】酶联免疫吸附试验;基础医学研究;加样机;洗板机【作者】郑泽美【作者单位】430060武汉,武汉市第三医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R318;R392-33酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是目前最常用的检测抗原和抗体的方法之一。

因其操作简单、灵敏度高、特异性好，在临床检验工作中有着非常重要的地位。

但该法影响因素较多，如试剂盒的质量、标本质量、孵育时间等因素均直接影响着试剂盒的检测水平[1-3]。

随着我国科研项目的增多，ELISA在基础医学研究中的应用也越来越多并发挥着重要作用。

但是ELISA 科研实验和临床检验科检验有很大不同，标本来源多样化、参考值范围不确定等影响因素更多。

ELISA检测的影响因素的分析【关键词】 ELISA检测；影响因素；分析ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。

Engvall 和Perlmann于1971年最先应用该法进行了IgG定量测定，并命名为“enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)”。

由于ELISA方法灵敏，特异性强不需要特殊设备，所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定［1］。

如乙肝、丙肝抗体等等。

但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性结果）。

本文就ELISA检测的影响因素做如下讨论。

1 标本的影响1.1 溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性可能是溶血血清中含有过氧化酶物质（红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素），在洗涤过程中往往难以完全洗脱，它可使H2O2释放出原生态氧(O)，从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质，即显蓝色，产生假阳性［2］。

所以严重溶血标本禁用。

1.2 标本受细菌污染因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。

1.3 标本保存不当在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、造成假阳性；为克服上述干扰，ELISA测定的血清标本宜为新鲜采集；如不能立即测定，5 d内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。

1.4 塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性最好使用真空采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。

1.5 标本凝固不全在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。

两种不同模式洗板机对ELISA法检测HBsAg结果比较摘要】目的比较两种不同模式洗板机（水平式和立式）对酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的洗板技术对检测结果的影响。

方法对61例临床确诊为HBsAg阴性和31例临床确诊为HBsAg阳性的标本，经随机排列，用同一批号HBsAg试剂进行检测，分别用手工洗板、anthos fluido水平式洗板机、基波全自动快速立式洗板机洗板，后由酶标仪判读结果（OD值≥0.105为阳性），对阴性数、阳性数进行分析。

结果 anthos fluido洗板机洗板5次，假阳性达12例,与标本原始结果相比较（χ2=6.93，p<0.01）有差异；基波全自动快速立式洗板机洗板1次，假阳性1例,与标本原始结果相比较（χ2=0.51，p>0.05）无差异；手工洗板5次，假阳性4例，与标本原始结果相比较（χ2=2.12，p>0.05）无差异。

两种模式洗板机洗板方式对ELISA法检测HBsAg结果（χ2=7.69，p<0.01）有差异。

结论在ELISA方法检验当中，立式洗板机比水平式洗板机在洗板时增加了蒸馏水冲洗和脱水的过程，减少了污染和残留，结果更加可靠。

【关键词】水平式洗板机立式洗板机 ELISA HBsAg【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）10-0052-02酶联免疫吸附试验(ELISA)来做乙型肝炎表面抗原(HbsAg)定性实验是目前实验室最经济、最普遍的试验诊断方法[1]。

ELISA操作简单，灵敏度和特异性高，但在操作中影响结果的因素也很多。

涉及标本的收集、保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面[2]，尤其洗板是一项极重要的环节，决定着本次实验能否成功，洗板次数不够或洗涤不干净会造成假阳性的出现[3]，洗板次数过多容易将结合的抗原或抗体洗掉造成假阴性的出现，因此洗板的充分性和洗板后的残留是关键，将直接影响显色[4]。

采用ELISA方法检测HIV抗体的相关影响因素分析目的分析ELISA方法检测HIV抗体的相关影响因素，寻求提高ELISA方法检测HIV抗体准确性的科学方法。

方法将2012年1月-2013年12月本实验室在初筛检测中发现的初筛阳性标本23份，全部上送到市艾滋病确证实验室进行确证实验，对患者基本情况、使用试剂、标本状况、操作过程等影响检测结果的相关因素进行统计分析。

结果上送到市艾滋病确证实验室的23份初筛阳性标本，经过确证实验证实，有21份标本确证阳性，确证符合率91.30%，其余均为阴性，在采用ELISA方法检测HIV抗体的整个过程中，包括病人的基本情况、标本的采集、标本的保存、试剂的准备、样品的加入、酶标孔的孵育、酶标孔的洗涤、显色、结果判断等因素都会影响到检测结果。

结论要提高ELISA法检测HIV抗体的准确度，必须制定严格的标准操作程序并按照标准操作程序进行操作，每次检测都要加入外部质控品，绘制质量控制图。

标签：HIV抗体;ELISA法;影响因素分析酶联免疫吸附试验（ELISA）作为检测HIV抗体最为常用的一种方法，具有特异性强、灵敏度高、操作方便，血清或者血浆样品都可以检测，操作性非常好[1]，不管是批量样品还是单个样品，都可以用该方法进行检测。

本文对ELISA 方法检测HIV抗体的相关影响因素进行分析，希望能够找到提高检测结果准确性的有效方法。

1 资料与方法1.1一般资料本院2012年1月-2013年12月一共检测3148份标本，其中23份标本初筛阳性。

1.2仪器设备酶标仪ST-360;洗板机ST-36W。

1.3试剂厂家北京万泰生物药业股份有限公司，有效期内使用。

1.4方法本实验室发现初筛检测阳性的标本，全部上送到市艾滋病确证实验室进行确证实验，对患者基本情况、试剂厂家、标本采集及保存、操作过程等影响因素进行统计分析。

2 结果上送到市艾滋病确证实验室的23份初筛阳性标本，经过确证实验证实，有21份标本确证阳性，其余均为阴性，确证符合率91.30%。

ELISA快速法检测HBsAg时手工洗板和洗板机洗板的结果比较目的:探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的洗板技术,比较手工洗板和洗板机洗板对检测结果的影响。

方法:对50例临床确诊为HBsAg阴性的标本,按试剂说明要求进行检测,分别用手工洗板、洗板机洗板洗1～5次后由酶标仪判读结果,对阴性数、阳性数、假阳性率进行分析。

结果:手工洗板严格按照试剂说明书的要求操作,未出现假阳性结果;洗板机洗板1次,假阳性率高达90%;洗板2次,假阳性率为38%;洗板3次,假阳性率为2%;洗板4～5次,未出现假阳性。

结论:在ELISA方法检验当中,手工洗板和洗板机洗板没有本质上的差别,只要操作合乎要求,均能得到正确、可靠的结果。

标签：酶联免疫吸附试验;手工洗板;洗板机洗板乙型肝炎病毒采用ELISA检测法具有操作简便、灵敏度高、试剂成本低、环保和适用于大批量人群抗原、抗体筛查等优点,目前在国内实验室被广泛使用[1]。

但在操作中影响结果的因素也很多, 涉及标本的收集、保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面,尤其洗板是一项极重要的环节, 洗板次数不够或洗涤不干净会造成假阳性的出现。

在实验室中,ELISA 测定的洗板方式一般有2种,即手工洗板和洗板机洗板。

本文就手工洗板和洗板机洗板对检测结果的影响进行了分析,现报道如下:1 材料与方法1.1 材料酶标试剂:上海实业科华生物技术有限公司生产。

阴性血清标本:50份经放射免疫法确诊为乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性的非脂血,无溶血的健康成年人外周血标本分离后的血清为检测对象,由辽宁省中医药大学附属医院临床检验中心提供。

1.2 方法按试剂说明要求进行检测,分别用手工洗板,洗板机1～5次洗板后由酶标仪判读结果,对阴性数、阳性数、假阳性率进行分析。

2 结果50份阴性血清标本分别经手工洗板,洗板机1～5次洗板后,经酶标仪判读结果。

洗板因素对ELISA方法检测HIV抗体的影响目的探讨洗板次数在ELISA方法检测HIV抗体的影响。

方法由同一人使用同一洗板设备经5次洗板和6次洗板后，检测10次两种质控物的OD值。

结果增加洗板次数会造成检测样本的OD值下降，从而造成HIV检出阳性率下降。

结论运用ELISA方法检测HIV抗体时必须严格按说明书进行操作，不能随意增加洗板次数标签：ELISA；HIV抗体；洗板次数酶联免疫吸附法(ELISA)检测HIV抗体特异性强，灵敏度高，操作简单易行，是卫生部推荐的首选方法，HIV抗体检测是发现HIV感染的有效途径，而对疑似艾滋病HIV感染者的实验确诊是防治艾滋病的重要环节。

但检测结果的正确性易受多种因素的影响，如试剂本身质量、实际存放温度、实际的有效期、实验操作步骤、加样方式、反应温度、洗板次数和方式、显色时间长短、显色时避光与否、洗涤液浓度及洗涤中是否含有金属离子的对结果有较大影响［1,2］，其中洗板在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败，控制不严就会影响试验结果，本文通过比较由同一人使用同一洗板设备经不同洗板次数后的两种质控物的检测结果，发现增加洗板次数对HIV抗体ELISA检测结果的影响较大，报告如下。

1材料与方法1.1标本从郑州三叶公司购买的1 NCU/ml和2 NCU/ml质控物，批号均是1001。

1.2试剂和仪器人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）抗体检测试剂为北京万泰生物药业股份有限公司，仪器奥地利产autu2010酶标仪、深圳产PW-960洗板机。

1.3方法按试剂说明和《全国临床检验操作规程》要求正规操作。

洗板机各项指标在说明书要求范围内，为避免人为误差，洗板过程由同一人使用同一台洗板机进行操作，把1NCU/ml和2NCU/ml质控物当成普通标本分成两组，按试剂说明书要求，第一组洗板5次，第二组设定为6次，浸泡30 s，两组同时操作，重复检测10次。

2结果两组1NCU/ml和2NCU/ml质控物检测10次后的样本OD值见表1。

【摘要】目的：探讨酶联免疫试验(elisa)中的洗板技术，试图找到一种简单、高效、经济、实用、可靠的elisa洗板方法。

方法：对753例临床体检乙型肝炎表面抗原(hbsag)的标本，分别用手工法和全自动洗板机法两种方法进行洗板，进行组间对比分析；将弱阳性标本选出，重新检测2次，分别用两种方法洗板，看看弱阳性是否因洗板方法不同引起。

结果：753例用elisa方法检测hbsag试验中，用手工法洗板和用洗板机洗板，经χ2检验，p&0.05，两种洗板方法差异无显著性；18例弱阳性标本检测中，洗板方法的不同，不是造成假阳性的根本原因。

结论：两种洗板方法无差别，在elisa实验中，手工法可以代替洗板机法洗板。

手工法简单、高效、实用，应可规范推广。

【关键词】 elisa洗板；洗板方法；弱阳性在酶联免疫试验中，洗板是非常重要的过程。

酶联免疫试验(elisa)洗涤过程虽不是一个反应过程，但却也决定着实验的成败［1］。

elisa就是通过洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的，通过洗涤以清除残留在微孔板中未能与固相抗原或抗体相结合的物质，以及在反应过程中的非特异性吸附于固相载体上的干扰物质。

聚苯乙烯对蛋白质的吸附是普遍的，在elisa测定的反应过程中应尽量避免非特异性吸附，洗涤时又应将这些非特异性吸附的干扰物质洗涤掉。

在elisa操作中，洗涤是非常关键的，应引起操作者的高度重视。

我们对753例用elisa方法检测乙型肝炎表面抗原(hbsag)的洗板过程进行了检测，采用我们自创的人工洗板法和全自动洗板机洗板对比试验，现将结果报告如下。

1 材料和方法1.1 材料1.1.1 标本来源及类型 753例标本来源于广东省深圳市龙岗区南岭人民医院 2005年12月8日至2006年1月4日的工厂体检血清标本，其中男性121例，女性653例，年龄17岁～43岁,平均年龄为30岁。

1.1.2 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)由上海荣盛生物技术有限公司生产。

ELISA实验要点：洗涤是关键优化ELISA的重点之一在于洗涤。

洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号，从而增加分析的信噪比。

每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留，在最后一步产生信号。

而不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的结果。

本文将为你介绍一些利用自动洗板机来洗涤ELISA平板的技巧。

免疫分析，比如ELISA，一般包含两个或以上的孵育步骤，中间以洗涤隔开。

ELISA通常在96孔板中开展，其上包被了结合抗原或抗体。

在封闭步骤后，包被后的平板首先与一抗或抗原孵育。

随后通过一些洗涤步骤去除未结合（低亲和力）的抗原-抗体复合物。

接着，平板与二抗孵育。

这种带有酶的抗体与高亲和力的抗原-抗体复合物结合。

之后，又是一轮洗涤。

最后是添加底物并检测信号。

我们可使用多种底物来检测最终的抗原-抗体复合物。

底物分为三类：自然发光、化学发光和荧光。

准确说来，ELISA这个词指的是使用自然发光底物的分析。

而使用化学发光底物的分析被称为Luminescent Immunoassay（LIA），使用荧光二抗的分析被称为Fluorescent Immunoassay（FIA）。

洗涤参数一些参数会影响洗涤步骤的效果。

第一个主要的参数是洗涤量。

自动洗板机会分配洗涤液。

如果你之前遭遇过高背景，那么不要犹豫，将洗涤量调为高，最好是比包被体积更高。

太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到，从而明显增加背景。

所有反应孔的洗涤量必须相同。

ELISA板的制造商通常会在试剂盒的使用手册中列出包被量。

行业中通常使用的包被量是200μl。

如果你的试剂盒也是这样，那么制造商可能会建议使用300μl洗涤液进行洗涤，以便清洁整个反应孔的壁。

一般来说，洗涤量越高，则孵育步骤残留的抗体或抗原量就越少。

洗涤次数的经验法则第二个影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的量。

当然，洗涤次数越多，背景越低。

然而，太多次的洗涤会降低信号强度，使其难以测定。

ELISA实验操作中常见问题分析由于 ELISA(酶联免疫试验)具有灵敏度较高、特异性好的特点，已广泛应用于各种传染性疾病的筛查如肝炎、爱滋、优生优育等。

虽然洗板只是ELISA实验重要环节中的一个，但作为专业的洗板机生产厂家，我们必须对影响ELISA实验结果各因素有一定的认识。

优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA 检测结果准确可靠的必要条件。

如不注意，就易出现白板、花板、色弱和假阳性等现象。

尤其是花板现象（就是空白、阴性、阳性对照以及室内质控孔结果正常，而标本孔的OD值却明显偏高）是各个厂家洗板机调试中经常遇到的问题。

现将ELISA实验操作中注意事项总结如下，以期给大家带来一些启发，以改善洗板机的安装调试水平，提高临床检测质量。

1、标本及采集、贮运因素严重溶血，以 HRP 为标记的ELISA 测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色造成假阳性；混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净；如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应；标本凝固不全，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；采血试管洗涤不彻底、反复使用易交叉污染；塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。

血清标本宜在新鲜时检测，严重溶血标本禁用。

一般说来，在 5 天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合，使间接法的试剂本底加深。

超过一周测定的需－20℃保存。

冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。

混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。

反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存；最好使用一次性玻璃试管或真空管采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性；血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。

兽医实验室2019年第3期 浅谈洗板对ELISA试验的影响萨冬芝 杨桂芬 涂慧杰 鄂晓楠 刘曙光 敖建鹏/内蒙古莫力达瓦达斡尔族自治旗动物疫病预防控制中心2 018年11月14日，我中心实验室进行犬细粒棘球绦虫粪抗原检测试验。

试验由2名实验员操作，另有3名见习实验员辅助。

犬细粒棘球绦虫抗原检测试剂盒（批号：Eg-Ag20180620）由上级单位统一配发。

274份犬粪样品事先经-70℃冷冻一周处理，试验当日室温解冻后每份取1 g样品，加1 ml样品处理液，4 000 rpm 离心15 min待用。

试验用仪器：酶标仪正常，培养箱正常，96孔自动洗板机开机冲洗管路正常。

实验员甲操作A、B两块包被板184份样品的试验，实验员乙操作C 块包被板90份样品的试验。

试验过程严格按着试剂盒说明书逐步进行，洗板过程中习惯性的同一方向放入包被板，合上盖子洗板，未察觉异常。

试验结束，结果均成立。

但三块包被板之间出现非常相似的阳性结果，即A、B、C各板的D—12、E—12、G—12三孔均显阳性（另有A板B—12孔为阳性），且C板G—12孔无样品仍显阳性。

这样的结果引起我们的注意，回忆操作过程未出现遗漏、失误，检查洗板机发现D—12、E—12、G—12对应的针孔堵塞，不出液体。

这样能解释为什么不同的人操作不同的反应板出现高度相似的结果，且无样品孔也出现阳性。

查出问题后，疏通洗板机针孔，随即对全部样品按原样进行复检，结果为A板B—12孔为阳性，有异议的各板D—12、E—12、G—12三孔均显阴性（其中C板G—12孔无样品）。

该试验由抗细粒棘球绦虫特异性抗体包被的微孔板和酶标记抗棘球绦虫特异性抗体，以双抗体夹心法检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原。

试验中，加入待检样品，经过温育后，若样品中含有细粒棘球绦虫抗原，则与包被板上的抗体结合，经洗涤后除去未结合的抗原，再加入酶标记物，与包被板上的抗体-抗原复合物结合形成抗体-抗原-酶标记物复合物，经洗涤除去未结合的酶标记物，在微孔中加入显色液，经酶催化形成的蓝色信号与样品中的抗原含量成正比。