山楂叶总黄酮分光光度法测定—科标检测

山楂中总黄酮的提取及含量测定（吕培银）一、实验目的1.掌握黄酮类物质的提取方法。

2.掌握分光光度法测定黄酮含量的原理。

二、实验原理山楂富含黄酮类化合物，具有重要的生理活性和药效。

黄酮化合物的母核由C6-C3-C6即A-C-B三个环组成，A环和B环具有芳香化合物的性质，C环具有黄酮化合物的独特性质。

母核中某些位置如C3和C5上含有羟基或具有邻二酚羟基时能与铝、铅等金属离子形成稳定的络合物，这些络合物在光谱上产生明显变化。

黄酮与金属离子的这种作用不仅可以用于鉴别这类成分中羟基的位置，还可以作为进行定量分析的基础。

本实验利用碱性条件下，在亚硝酸盐存在时，硝酸铝与黄酮进行络合反应，生成红色络合物，且在500 nm左右有最大吸收，可利用分光光度法进行测定。

因此，本实验采用索氏提取法提取山楂中的总黄酮，并采用分光光度法对其含量进行测定。

三、实验用品1、仪器：索氏提取器、平底烧瓶、电热套、量筒、试管、容量瓶、移液管、玻璃比色皿、可见分光光度计等。

2、药品：山楂粉末、无水乙醇、芦丁标准品、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等。

四、实验内容1、山楂总黄酮的提取精密称取山楂粉末6 g,滤纸包好后置于250 mL索氏提取器中，加60%乙醇150 mL，连续回流提取1-1.5h, 冷却，将提取液转移至250 mL的容量瓶中，将圆底烧瓶润洗3次，60%乙醇定容至刻度线，摇匀，过滤。

取1 mL滤液稀释至10mL,摇匀，即为样品待测溶液。

2、芦丁标准溶液的配制精密称取芦丁20 mg，加入60 mL无水乙醇超声使其溶解后，以蒸馏水定容至100mL，摇匀，即得0.2 mg/mL的芦丁标准液。

3、芦丁标准曲线的制定分别精密吸取芦丁标准液5mL、6mL、7mL、8mL、9mL至10mL容量瓶中，60%乙醇定容后得到浓度为0.10 mg/mL、0.12 mg/mL、0.14 mg/mL、0.16mg/mL 和0.18mg/mL的芦丁系列浓度梯度溶液。

山楂叶中黄酮类提取工艺与质量标准的研究一、实验目的1 掌握从山楂叶中提取总黄酮的原理、方法及操作要点。

2掌握正交试验的原理及方法。

3 掌握UV含量测定、TLC的原理和方法。

二、实验原理利用正交试验法筛选最佳提取工艺，以总黄酮量为指标，芦丁为对照品进行含量测定，以得出的最佳工艺做验证实验，TLC的结果做质量标准的研究。

三、材料与仪器材料：山楂叶、芦丁标准品、聚酰胺板试剂：95%乙醇、甲酸、NaOH、NaNO2、Al(NO3)3、AlCl3仪器：UV2550紫外可见分光光度计(日本岛津)、循环水式真空泵、旋转蒸发仪、抽滤装置、圆底烧瓶、冷凝管、层析缸、电子天平四、实验步骤1 山楂叶总黄酮的提取用剪刀将干燥的山楂叶剪碎，准确称取5.0g置于烧杯中，称取9份用来做正交试验，根据正交试验要求加入一定浓度、体积的乙醇回流提取一定时间。

趁热抽滤，用50ml 50%乙醇洗涤，合并滤液，减压浓缩至体积小于100ml，用60%乙醇定容至100ml，作为待测液。

2 标准曲线的制备将芦丁于120℃干燥至恒重，精密称取芦丁标准品9.28mg，用60%乙醇溶解，定容于50ml，得浓度为0.186mg/ml芦丁标准液。

准确吸取芦丁标准液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml于25ml容量瓶中，每瓶加去离子水至6ml，加5% NaNO2溶液1ml，摇匀，放置6min 后加入10% Al(NO3)3溶液1ml，摇匀，放置6min后加入4%NaOH溶液10ml，去离子水定容，摇匀，15min后于500nm处测定吸光度A，得芦丁含量与A之间的回归方程。

3 山楂叶总黄酮的测定准确吸取待测液0.4ml于25ml容量瓶中，步骤同上，测定其在500nm 处吸光度，计算每组山楂叶中总黄酮含量。

算出正交试验中的K和R 值，从而得出最佳工艺。

4 验证实验根据最佳工艺，做验证实验，提取、含量测定方法如上。

5 TLC鉴定吸附剂：聚酰胺板展开剂：乙醇-甲酸-水（4:0.01:1 v/v/v）以最佳工艺提取出的溶液为供试品溶液，另取配好的芦丁对照品溶液各2-3μl，分别点于同一聚酰胺板上，以乙醇-甲酸-水（4:0.01:1 v/v/v）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。

可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量实验讨论
大山楂丸中总黄酮的含量可以采用可见分光光度法来测定。

1. 实验目的：测定大山楂丸中总黄酮的含量。

2. 实验原理：可见分光光度法利用物质对可见光的吸收特性来测定物质的浓度。

总黄酮具有一定的吸收特性，可以通过测量吸光度来计算其浓度。

3. 实验步骤：
a. 准备样品：将大山楂丸样品粉碎并称取适量。

b. 提取黄酮：使用适合的溶剂（如乙醇）将黄酮提取出来。

c. 制备标准曲线：准备一系列不同浓度的黄酮标准溶液，然后使用分光光度计分别测量吸光度。

d. 测量样品吸光度：将提取的样品溶液使用分光光度计测量吸光度。

e. 计算黄酮含量：根据标准曲线的吸光度-浓度关系，计算出大山楂丸中总黄酮的含量。

4. 实验结果：根据测量得到的吸光度值和标准曲线，计算出大山楂丸中总黄酮的含量。

5. 实验讨论：
a. 实验方法的准确性和重复性：可以进行重复实验，计算相对标准偏差或百分相对标准偏差来评估方法的准确性和重复性。

b. 实验条件的选择：实验中需要选择合适的波长和溶剂，并对提取方法进行优化，以获得最佳的测量结果。

c. 样品处理的改进：可以尝试不同的提取方法，如其他溶剂或萃取工艺，以提高黄酮的提取效率。

d. 可行性和适用性分析：可以对其他样品进行类似实验，评估方法的适用性和可行性。

紫外可见分光光度法测定注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量【摘要】目的建立测定注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量的方法。

方法采用紫外可见分光光度法，检测波长为500nm，无水芦丁为对照品。

结果芦丁在8.12～48.72μg/ml范围内呈良好的线性关系，r=0.9998（n=6），平均回收率为100.0%，RSD=0.13%（n=6）。

结论所用方法灵敏、准确、重现性好、结果可靠，可用于注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量测定。

【关键词】注射用山楂总黄酮；总黄酮；紫外可见分光光度法；含量测定山楂总黄酮即山楂叶总黄酮，是从山楂叶中提取的黄酮类化合物的总称，目前从山楂总黄酮中分离出的单体有三十多种，有牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、金丝桃苷、槲皮素等。

山楂叶中的黄酮类化合物的药理作用有很多方面，例如对心、脑血管疾病有确切明显的疗效，山楂总黄酮对心绞痛、冠心病、心律失常、脑供血不足、脑动脉硬化症、脑血栓、老年性痴呆及各种脑损伤后遗症可产生积极的预防和治疗作用。

1.仪器与试药TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；AE240电子天平（瑞士梅特勒公司）；所用试剂均为色谱纯。

2.方法与结果2.1线性关系考察对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品约10.08mg，置50ml容量瓶中，加乙醇适量使溶解，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

（每1ml含无水芦丁0.2030mg）[1]。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，使摇匀放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置20分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录V A），在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、测试溶液中对照品浓度为横坐标绘制标准曲线。

山楂叶片中黄酮类物质的提取工艺与检测1项目设计的意义山楂为蔷薇科植物，资源丰富,叶片中含有的黄酮类化合物具有降压、降血脂、软化血管、增加冠状动脉流量、助消化等药理作用。

随着人们健康观念的更新以及黄酮类化合物越来越广泛的生物活性被发现,其开发利用已成为目前的一个研究热点。

研究证实,山楂叶和果含有相近的营养及药用成分,特别是总黄酮含量远高于果实,有很高的利用价值。

但长期以来,人们只注重果实的利用,而山楂叶则自生自落,白白浪费。

超声波法提取总黄酮具有简单、低成本、快速、有效的优点,且不破坏其有效成分。

为了充分开发利用山楂叶这一丰富的资源,本试验对山楂叶总黄酮的超声波提取工艺条件进行了研究,为进一步合理开发利用山楂资源提供理论依据。

2项目设计的原理2.1超声波提取法原理用超声波法提取黄酮类物质,是目前比较新的方法。

它的原理是超声波的空化作用对细胞膜的破坏有助于黄酮类化合物的释放与溶出,超声波使提取液不断震荡,有助于溶质扩散,同时超声波的热效应使水温基本在57℃,对原料有水溶作用。

因此,超声波法大大缩短了提取时间,提高了有效成分的提取率和原料的利用率，且实验可在室温下进行,设备简单,操作方便,是提取山楂中黄酮类物质的一种有效方法。

2.2测定原理黄酮类化合物主要包括黄酮苷和黄酮醇苷两大部分，三氯化铝与黄酮类化合物作用后，生成黄酮的铅盐络离子，呈黄色，颜色的深浅与黄酮的含量成一定的比例关系，可以定量测定。

3主要仪器及试剂KQ-5000DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司,额定功率为500W),754型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司),JA-5003A型千分之一电子天平,DHG-9146A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司),RE-52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)及其他玻璃仪器。

芦丁为生化试剂，乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等均为分析纯。

4实验内容和步骤4.1山楂叶总黄酮超声波法提取工艺条件的筛选(1)准确称取干燥山楂叶1.000g,加入20mL(料液比1:20)体积分数分别为60%、70%、80%、90%的乙醇,在40℃下以80%超声功率(400W)提取30min,测定其黄酮的提取率。

不同生长期山楂叶中黄酮类化合物的含量测定作者：李宏伟，张守勤，窦建鹏，奚玉石【摘要】目的测定并比较不同生长期山楂叶中黄酮类化合物含量的差异。

方法采用分光光度法和高效液相色谱法检测黄酮类化合物的含量。

结果在不同的生长期，山楂叶中总黄酮和牡荆素鼠李糖苷的含量都在8月份最高,然后逐渐降低。

结论以提取黄酮类化合物为目的的山楂叶最适宜在8月份采收。

【关键词】山楂叶；黄酮类化合物；高效液相色谱法；超高压提取Abstract：ObjectiveTo compare the contents of flavonoids in Hawthorn leaves of different growth stages. MethodsThe contents of flavonoids were determined by UV spectrophotometry and HPLC. ResultsAt different growth stages, the contents of total flavonoids and 2O Rhamnosylvitexin were the highest in August; afterwards, the content of flavonoids decreased. ConclusionAugust was appropriate time in order to obtain flavonoids components from Hawthorn leaves.Key words：Hawthorn leaves; Flavonoids; HPLC; High hydrostatic pressure extraction山楂叶为蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida Bge.Var.Major N.E.Br. 或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥叶，山楂叶中所含的黄酮类成分具有降压、强心等多种药理活性，尤其对缺血性心肌损伤有明显的保护作用［1，2］。

现代医药卫生2013年5月15日第29卷第9期J Mod Med Health，May15，2013，Vol.29，No.9·药物与临床·山楂为蔷薇科山楂属（rosaceae crat aegus.L）植物[1-2]，分布于北温带，全世界有该属植物280余种，中国有17种。

山楂入药在中国有悠久历史，《本草纲目》记载：此品“酸甘味温，消食积，补脾”[3]。

山楂叶中富含黄酮类物质[4-5]，其具有良好的药用价值，如对保护心脑血管有较好的价值[6-7]，从而备受研究者的关注。

本研究拟对山楂叶中总黄酮的含量进行测定，为其质量标准的完善提供科学依据，从而为其加速开发成新药作铺垫。

1材料与方法1.1仪器XR205SM-DR电子天平（Precisa，瑞士）、UV-2100紫外-可见分光光度计（购自北京瑞利分析仪器有限公司）等。

1.2对照品芦丁对照品（批号：120215）购自中国食品药品检定研究院。

1.3试药水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

1.4样品山楂叶，于2011年8月采于山东省淄博市郊区，在自然条件下晾干，备用。

1.5方法1.5.1对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品0.0100g（120℃干燥至恒重）置50mL容量瓶中，加70%乙醇适量，水浴加溶解，放冷，用65%甲醇稀释至刻度，摇匀。

配制成0.2mg/mL对照品溶液。

1.5.2供试品的制备精密称取山楂叶（60目）0.5002g至100mL 锥形瓶中，加70%乙醇75mL超声45min，过滤，滤液蒸干，用70%乙醇定容于25mL容量瓶中，待测定。

1.5.3测定波长的选择精密吸取上述供试品溶液0.1mL加70%乙醇定容至10mL容量瓶中，摇匀。

取芦丁对照品，加甲醇溶液（浓度适量）作为对照，于紫外可见光分光光度计200～600nm范围进行波长扫描，以试剂空白作参比。

结果显示供试品与芦丁对照品均在510nm处有最大吸收，故确定其为检测波长。

1.5.4线性关系的考察精密吸取上述芦丁标准液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL于10mL比色管中，加5%NaNO20.5mL溶液，摇匀放置6min，加入5%Al（NO3）30.5mL6min后，再加4mL1mol/L NaOH溶液用70%乙醇溶液定容，摇匀放置15min。