微生物限度检查方法验证方案

版药典微生物限度检查方法验证方案验证微生物限度检查方法的方案一、实验目的：验证药典中的微生物限度检查方法的准确性、可靠性和可行性。

二、实验材料：1.药典中规定的微生物限度检查方法；2.待验证的药品样品；3.适用的培养基和培养条件；4.培养基的质量控制菌种。

三、实验步骤：1.制备适用的培养基：按照药典中规定的方法和成分制备适用的培养基，并进行批次记录。

2.准备质量控制菌种：3.制备菌液悬液：从购买的质量控制菌种中，挑取一株菌种进行连续传代培养至活性最佳的生长阶段。

然后制备菌液悬液，以备后续试验使用。

4.扩大悬液应用范围：从第3步得到的菌液悬液中，取适量接种于适用培养基上，培养出代表性的细菌菌液悬液。

然后，通过菌液的光学检测、显微镜检查和菌落计数，确定菌液的细菌浓度。

5.验证方法的准确性：将待验证的药品样品加入培养基，根据药典中的方法将培养基分成不少于3组。

每组培养基中分别加入一定量的菌液悬液，并在药典规定的温度和时间下培养。

同时，设置对照组，只加入菌液悬液和培养基。

6.菌落计数：取适量的培养基样品，分别进行菌落计数，并根据培养基的数量、培养基总菌落数、对照组的菌落数等数据，计算菌落形成单位。

7.验证方法的可靠性：将待验证的药品样品按照药典中的方法进行连续验证，至少重复3次。

然后，对比不同验证结果的一致性和稳定性，评估方法的可靠性。

8.验证方法的可行性：根据实际的样品情况和验证结果，评估方法在操作上和技术上的可行性。

如，是否存在样品的特殊要求，检测方法是否能满足检测要求等。

四、数据处理与分析：根据实验结果的菌落计数和验证的次数，进行数据处理和统计分析。

评估验证结果的一致性、可靠性和可行性。

五、结论：根据实验结果和数据分析，得出关于药典中微生物限度检查方法的准确性、可靠性和可行性的结论。

如果验证结果与药典一致，说明方法可靠并可以使用。

如果验证结果与药典不一致，需要进一步分析原因和进行修正或优化。

微生物限度检查方法适用性试验方案验证方案组织与实施微生物限度检查方法适用性试验工作应由质量管理部门负责组织，质量管理部门有关人员组成验证小组，参与实施。

方案起草方案审核方案批准目录一、概述二、验证目的和风险评估三、验证内容四、方法判定五、再验证周期六、参考文献七、结果评价及结论1、概述：微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。

检查项目包括需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检查。

当建立产品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和控制菌检查。

依照中国药典2015版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行方法适用性试验。

2、试验目的和风险评估：验证目的：确认所采用的需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检查方法适合我公司所生产产品的微生物限度检查。

风险评估：3、验证内容：3.1、培养基来源：确认人：确认日期：3.2、检查用培养基配制方法：确认人：确认日期：3.3、使用仪器确认人: 确认日期：3.4、验证试验用菌种：确认人：确认日期：3.5试验方法：取供试品10 ml加PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。

需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采用常规法。

3.6菌液的制备：3.6.1取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵，加入胰酪大豆胨液体培养基中置30～35℃培养箱中培养18～24h，取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养物1ml加入9ml0.9％无菌氯化钠溶液中，制成10-1 的菌液，依法10倍稀释至10～7，分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基20ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。

微生物限度检查方法验证方案1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。

验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.范围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。

3.规范性引用文件：根据《中国药典》2010年版二部附录Ⅺ J 微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。

4.验证实施：4.4.1 试验前的准备:4.4.1.1 试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30 min，在3天内使用。

4.4.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时内，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15 min，在3周内使用。

4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min，在3周内使用。

4.4.2 试验菌的制备和稀释：4.4.2.1细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液：4.4.2.1.1取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许接种至10ml营养肉汤中，在30～35℃培养18～24小时；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，在23～28℃培养24～48小时；取黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天。

微生物限度检查方法薄膜过滤法验证方案 Document number【SA80SAB-SAA9SYT-SAATC-SA6UT-SA18】微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。

验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。

原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。

2.验证方法步骤验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。

验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。

试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。

3.试验实施试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。

3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于。

3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。

3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。

微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。

验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。

原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。

2.验证方法步骤验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。

验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。

试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。

3.试验实施试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。

3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于。

3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。

3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。

3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径直径50mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法菌液的制备将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中，在23～28℃下培养24～48小时。

微生物限度检测方法学验证方案文件编号：P-目录1.目的 ................................................................................................................................................... 错误！未定义书签。

2.范围 ................................................................................................................................................... 错误！未定义书签。

3.责任者及职责 ................................................................................................................................... 错误！未定义书签。

4.验证简介 ........................................................................................................................................... 错误！未定义书签。

5．验证过程 ........................................................................................................................................... 错误！未定义书签。

6．结果判断 ........................................................................................................................................... 错误！未定义书签。

微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。

验证过程应严格按照本方案规定的容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。

1.2原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。

2.验证方法步骤2.1验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。

2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。

2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。

3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。

3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。

3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。

3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。

微生物限度检查方法适用性试验方案一、试验目的本试验旨在验证微生物限度检查方法的适用性，并评估其在实际样品中的准确性、精密度和灵敏度，以确保检测结果的可靠性。

二、试验范围本试验适用于各类药品、食品、环境以及生物制品等样品的微生物限度检查。

三、试验设备与试剂1. 培养基：本试验需使用适当的培养基，如大肠杆菌培养基、沙门氏菌培养基等，以满足特定微生物的培养需求。

2. 灭菌设备：试验中的培养基、工具及试剂需经过灭菌处理，以保证试验环境的无菌状态。

3. 微量移液器：用于准确取样和移液，确保实验的精确性。

4. 微生物培养箱：用于提供适宜的温度和湿度条件来培养微生物样品。

四、试验步骤1. 样品制备：按照相关规定和标准采集样品，并根据不同样品的特性进行适当处理，以便得到具有代表性的样品。

2. 培养基接种：将样品按照试验要求接种到相应的培养基中，并在一定条件下进行培养，以促使微生物生长。

3. 培养基培养：将接种过样品的培养基置于微生物培养箱中，根据微生物的生长特性进行培养，通常包括温度、湿度和培养时间等方面的控制。

4. 结果观察与记录：根据实验要求，观察培养基上是否有微生物的生长，并记录对应的观察结果。

5. 试验数据处理与分析：根据试验结果进行数据处理与分析，并评估微生物限度检查方法的适用性、准确性和灵敏度。

五、试验评价指标1. 准确性：通过与参考方法的比对，评估限度检查方法的准确程度。

2. 精密度：利用不同实验者、设备和试剂的重复试验，评估方法的可重复性和稳定性。

3. 确定度：评估方法的灵敏度和特异性，以确定方法对微生物的检测能力。

4. 可靠性：综合以上评价指标，评估方法在实际应用中的可靠性和适用性。

六、试验结果与分析根据试验评价指标，通过一系列试验和数据分析，我们可以得出以下结论：1. 限度检查方法在各类样品中的准确性良好，能够准确反映样品中微生物的含量。

2. 试验结果表明，方法具有较好的重复性和稳定性，不同实验者、设备和试剂的试验结果相对一致。

微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。

验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。

1.2原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。

2.验证方法步骤2.1验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。

2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。

2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。

3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。

3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。

3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。

3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。

微生物限度检查方法验证方案微生物限度检查法验证方案1。

目的:为确认所采用的方法适用于药品微生物限度检查，包括细菌、霉菌、酵母菌和对照菌的计数，特制定本验证方案。

通过比较试验菌的复苏生长结果，评价整个试验方法的准确性、有效性和重现性，从而确定试验样品在实验条件下无抑菌活性或抑菌活性可忽略不计。

所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。

验证过程应严格按照本计划规定的内容进行。

因特殊原因确需变更的，应填写《验证计划变更申请书》，报验证领导小组批准。

2.范围: 本验证计划适用于微生物限度检查方法的验证。

3。

规范性引用文件:根据《中国药典》XXXX版附录二附录九J微生物限度检查法的要求，由于部分试验品的抗菌活性，当已建立的微生物检查方法或产品的成分发生变化或原检查方法的检查条件发生变化时，可能会影响检查结果的准确性。

因此，必须验证测试物品的抗菌活性和测试方法的可靠性。

4.验证和实施:4.4.1试验前准备:4.4.1.1试验设备的准备:试管、刻度移液器、薄膜过滤器、滤膜(孔径0.22um，直径50毫米)、平皿、空三角瓶、称重纸等。

试验要求用牛皮纸包裹，放在湿热灭菌器中，在121℃灭菌30分钟，3天内使用4.4.1.2试验培养基的制备:取脱水培养基如营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基(BL)、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡萄糖醛酸苷培养基(MUG)等经适用性检验合格的脱水培养基，按相应的制备说明用纯净水配制，分装，2小时内放入湿热灭菌器中，121℃灭菌15分钟，3周内使用4.4.1.3试验用稀释液/缓冲液和冲洗液的配制:取有效期内的试剂，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%(毫升/毫升)聚山梨酯80无菌氯化钠溶液和0.05%(毫升/毫升)0.9%氯化钠溶液等。

按照相应的制备方法，用纯净水配制，加热溶解，过滤，分装，121℃灭菌15分钟，3周内使用4.4.2试验菌的制备和稀释:4.4.2.1细菌、霉菌和酵母菌计数法验证菌液:4.4.2.1.1取少量新鲜培养的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌，接种于10毫升营养肉汤中，在30-35℃培养18-24小时；将新鲜白色念珠菌培养物接种到改良的马丁培养基中，在23-28℃培养24-48小时；将黑曲霉的新鲜培养物接种到改良的马丁琼脂斜面培养基上，在23-28℃培养5-7天4.4.2.1.2将上述大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌的均匀培养物(细菌悬液)用0.9%无菌氯化钠溶液稀释两次，以制备每毫升细菌含50-100伏的测试细菌溶液。

一概述：通过验证以确认所采用的微生物限度检测方法适合于湖南金旺稀贵药业有限公司所生产原料药的细菌、霉菌及酵母菌的测定；确认所采用的方法适合于所生产原料药的控制菌的检查。

根据样品特性制定检验方法和检验条件按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

二目的：通过验证确认所采用的方法适合于所生产原料药的微生物限度的测定。

三适用范围：本方案适用于本公司生产的四种原料药的微生物限度检验方法的验证。

四责任人：验证小组成员及相关人员。

五验证方案内容：1.大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲菌、白色念珠菌为验证用菌株。

大肠埃希菌为革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，枯草芽孢杆菌为产芽孢杆菌，这三种菌株为细菌计数验证用菌株；黑曲菌为霉菌，白色念珠菌为酵母菌，作为霉菌和酵母菌计数验证用菌株。

验证用菌株的传代次数不得才超过5代。

细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证1.1当建立药品的微生物限度检查时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适用于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定。

验证试验可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌级数同时进行。

1.2 验证菌菌液制备1.2.1 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养琼脂培养基中，35～37℃培养18～24小时。

取此培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-6～10-7，制成每1ml 含菌数50～100cfu的孢子悬浮液。

1.2.2 白色念珠菌菌液制备：接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中，23～28℃培养24～28小时；取此培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法稀释至10-6～10-7，制成每1ml含菌数50～100cfu的孢子悬浮液。

1.2.3 黑曲菌菌液制备：接种黑曲菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸至无菌试管中，取1ml加无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4～10-6，制成每1ml 含数50～100cfu的孢子悬液。

中国药典微生物限度检查方法验证方案一、引言药品的质量与安全性是保障患者用药安全的重要方面。

微生物限度检查是药品质量控制的重要环节，用于评价药品中微生物的污染情况。

为确保检测结果的准确性和可靠性，本文旨在制定中国药典微生物限度检查方法验证方案。

二、背景微生物限度检查方法验证是指确定某一方法在特定条件下的适用性，方法验证的结果直接影响到药品生产和品质控制。

为了保证方法验证的可靠性，必须按照一定的规范和要求进行操作。

三、验证目的验证中国药典中所规定的微生物限度检查方法在实际应用中的准确性和可靠性，以确保药品的微生物限度符合国家及相关法规的要求。

四、验证程序1. 确定验证方法：根据中国药典中规定的微生物限度检查方法，选择合适的验证样品和验证条件。

2. 准备验证样品：从实际生产过程中随机选取药品样品，确保样品的代表性。

3. 执行验证实验：按照中国药典中的方法操作，对验证样品进行微生物限度检查。

4. 数据分析和评估：根据验证实验的结果，进行数据分析和评估，评估方法的准确性和可靠性。

5. 结果判定：根据数据评估结果，对微生物限度检查方法进行判定，判断方法是否适用于实际生产中的微生物限度检查。

6. 验证报告编制：根据验证实验的结果和结论，编制验证报告。

五、验证内容本次验证主要包括如下内容：1. 对选择的验证样品进行微生物限度检查。

2. 对验证样品进行菌落计数。

3. 对验证样品进行培养方法的验证。

4. 对不同微生物种类的检查方法进行验证。

5. 对不同微生物菌株的适应性进行验证。

六、风险评估在验证过程中，存在一定的风险因素，需进行风险评估，确保验证结果的可靠性和准确性。

风险评估主要包括验证样品来源的可靠性、实验操作的准确性、验证条件的合理性等。

七、验证结果与讨论根据验证实验的结果和数据分析，可以得出下列结论：1. 所验证的微生物限度检查方法在实际应用中的准确性和可靠性较高。

2. 所验证的微生物限度检查方法适用于不同药品制剂类型的微生物限度检查。

微生物限度检查方法适用性验证方案适用性验证是指对微生物限度检查方法所应用范围进行验证，确保方法适用于具体药物产品的检测。

适用性验证需要涉及以下几个方面：1.准确性：准确性是微生物限度检查方法的基本要求。

验证方法的准确性需要进行重复性和中间精密度实验，确保在一定条件下对同一药物样品进行测试时，结果之间具有较高的一致性和准确性。

2.灵敏度：灵敏度是指微生物限度检查方法能够检测到微生物数量的最低限度。

灵敏度验证需要使用一系列稀释溶液，以确定方法可以可靠地检测到微生物的最低限度。

3.特异性：特异性是指微生物限度检查方法只对目标微生物有反应，不受其他微生物的干扰。

特异性验证需要进行对照实验，验证方法能够正确地检测出目标微生物，并排除其他微生物的干扰。

4.精密度：精密度是指方法的重复性和中间精密度。

重复性验证需要多次重复测定同一样品，验证方法在相同条件下的结果具有较高的一致性；而中间精密度验证需要在不同的实验室、不同仪器、不同操作人员下进行测试，验证方法在不同条件下的可靠性。

5.稳定性：稳定性是指方法在一定时间范围内的稳定性。

稳定性验证需要在一定时间范围内对同一样品进行测试，并比较结果的一致性，以确保方法的可靠性和稳定性。

在实施适用性验证时需要注意以下几个方面：1.选择合适的药物样品进行验证，确保样品具有代表性和典型性。

2.严格控制实验条件，包括试验环境、温度、湿度等，以减少实验条件对结果的影响。

3.提高实验人员的技能水平，确保实验人员具有足够的实验操作技能和知识背景。

4.在验证过程中及时记录实验数据，并进行统计分析，确保结果的可靠性和准确性。

5.与相关法规和标准保持一致，确保验证方法的合规性和可靠性。

适用性验证是确保微生物限度检查方法准确性和可靠性的重要环节。

通过适用性验证，可以确保所采用的方法能够可靠地检测药物产品中的微生物限度，从而保证药品的质量和安全性。

微生物限度检查方法验证方案目录1. 目的 (3)2. 适用范围 (3)3. 参考标准 (3)4. 接受标准 (3)5. 人员职责 (3)6. 抽样计划 (4)7. 设备、试剂和菌种信息 (4)8. 方法适用性试验 (5)9. 文件控制 (6)10. 不合格情况处理 (6)11. 再验证周期 (6)12. 附件清单 (6)1.目的根据中国药典2020版微生物限度检查法的要求，对产品的微生物限度检查法进行验证，以确定所采用的方法适合于本产品的微生物限度检查，即确认本品在该检查量及该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除到可以忽略不计。

保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。

2.适用范围适用于本司产品的微生物限度检查。

3.参考标准《中华人民共和国药典》（2020版第四部1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法）《医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分：产品上微生物总数的测定》《医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分：产品上微生物总数的估计》4.接受标准4.1.阴性对照组不长菌；4.2.回收率（试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值）应在0.5~2范围内；4.3.若回收率小于0.5，考虑产品有抑菌性，则重新考虑检查方法的建立。

5.人员职责5.1.成员及其职责详见表一：表一人员及职责5.2.培训要求确保参与验证的所有人员了解其职责和角色，以及验证的过程和要求。

验证开始前，负责本次验证的检验员将对参与确认执行的人员讲解验证的过程和要求，并记录在《培训记录》中。

适用时，培训考核记录作为附录包含在验证报告中。

6. 抽样计划随机抽取3个批次，每个批次随机抽取7套样品。

具体信息详见表二：表二 样品信息确认人/日期： 复核人/日期： 7. 设备、试剂和菌种信息 7.1. 设备信息详见表三表三 设备信息确认人/日期：复核人/日期： 7.2. 试剂信息详见表四表四 试剂信息确认人/日期： 复核人/日期： 7.3. 菌种信息详见表五表五 菌种信息确认人/日期：复核人/日期：7.4.菌液的制备用接种环取枯草芽孢杆菌的斜面培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取金黄色葡萄球菌的斜面培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取铜绿假单胞菌的斜面培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取白色念珠菌的斜面培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取黑曲霉的斜面培养物，向培养物中加入10mL0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，转移孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的孢子悬液。

微生物限度检查方法适用性验证方案
质量管理部负责组织实施微生物限度检查方法的适用性试验，质量管理部相关人员组成验证小组参与实施。

计划起草部/工作签署日期质量管理部质量计划审查部/工作签署日期质量管理部质量经理计划批准部/工作批准人批准日期质量管理部质量主管目录
一.概述
二.验证目的和风险评估
三.验证内容
四.方法测定
V.重新验证期
六.参考
七.结果评估和结论
1.概述:
微生物限度检查法体系是一种对未按规定灭菌的制剂及其原料和辅料的微生物污染程度进行检查的方法。

检验项目包括需氧菌、霉菌、酵母菌和控制菌。

在建立产品微生物限度检查方法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和对照菌试验方法的适用性试验，以确认所采用的方法适用于产品需氧菌、霉菌和酵母菌数量的测定和对照菌试验。

根据中国药典XXXX版(1105)和(1106)，非无菌产品的微生物限
度检查:
试验采用“微生物计数法”和“对照菌检测法”。

细菌计数测定可用。

霉菌和酵母菌的数量是可以确定的。

可用的控制细菌。

5.重新验证周期:
微生物限度检查方法、产品成分和产品工艺发生变化时，应进行复试。

6.参考:
中国药典2015年版7。

结果评估和结论:
验证标准，适用性试验方法被接受。

审核人/日期:
批准人/日期:
11。

微生物限度检讨办法实用性实验计划验证计划组织与实行微生物限度检讨办法实用性实验工作应由质量治理部分负责组织,质量治理部分有关人员构成验证小组,介入实行.计划草拟计划审核计划同意目录一、概述二、验证目标和风险评估三、验证内容四.办法剖断五.再验证周期六.参考文献七.成果评价及结论1.概述：微生物限度检讨法系检讨非划定灭菌制剂及其原料.辅料受微生物污染程度的办法.检讨项目包含需氧菌数.霉菌数和酵母菌数及掌握菌检讨.当树立产品的微生物限度检讨法时,应进行需氧菌.霉菌和酵母菌计数办法的实用性实验和掌握菌检讨办法的实用性实验,以确认所采取的办法合适于该产品的需氧菌.霉菌和酵母菌数的测定和掌握菌检讨.按照中国药典2015版,需氧菌.霉菌和酵母菌及掌握菌均采取平皿法进行办法实用性实验.2.实验目标和风险评估：验证目标：确认所采取的需氧菌.霉菌和酵母菌计数办法及掌握菌检讨办法合适我公司所临盆产品的微生物限度检讨.风险评估：3.验证内容：3.1.造就基起源：确认人：确认日期：3.2.检讨用造就基配制办法：确认人：确认日期：3.3.应用仪器确认人: 确认日期：3.4.验证实验用菌种：确认人：确认日期：3.5实验办法：取供试品10 ml加至100ml→1:10供试液.需氧菌.霉菌和酵母菌.掌握菌采取通例法.3.6菌液的制备：取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.大肠埃希菌.枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵,参加胰酪大豆胨液体造就基中置30～35℃造就箱中造就18～24h,取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.大肠埃希菌.枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体造就物1ml参加％无菌氯化钠溶液中,制成10-1 的菌液,依法10倍稀释至10～7,分取各菌悬液1ml注入平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂造就基20ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法造就计数,取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用.取白色念珠菌的沙氏葡萄糖琼脂斜面造就物,参加沙氏葡萄糖液体造就基中置20～25℃造就箱中造就24～48h,取白色念珠菌的沙氏葡萄糖液体造就物1ml参加％无菌氯化钠溶液中,制成10-1 的菌液,依法10倍稀释至10～7,取菌悬液1ml注入平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基25ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法造就计数,取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用.取黑曲霉的新颖造就物接种子沙氏葡萄糖琼脂斜面上,20-25℃造就5-7天,参加3-5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱.取1ml参加含0.05%聚山梨酯80的9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中,制成10-1的菌液,依法10倍稀释至10～7,取,取菌悬液1ml注入平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基25ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法造就计数,取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用.3.7需氧菌.霉菌和酵母菌计数办法实用性实验：供试液制备：取供试品10 ml,加至100ml→1:10供试液.实验前提：需氧菌造就温度：30～35℃3～5天造就箱：霉菌和酵母菌造就温度：20～25℃ 5～7天造就箱：3.7.3实验办法：.1实验组：3.7.3.1.1分离取供试液9.9ml,分离铜绿假单胞菌.金黄色葡萄球菌.枯草芽孢杆菌,混匀后取个中1ml注皿,倾泻温度不超出45℃的胰酪大豆胨琼脂造就基20ml,置30～35℃或造就箱中造就不超出3天,计数,每株实验菌平行制备2个平皿.3.7.3.1.2分离取供试液9.9ml,分离白色念珠菌.黑曲霉菌液,混匀后分离取个中1ml注皿,倾泻温度不超出45℃的胰酪大豆胨琼脂造就基20ml,置30～35℃或造就箱中造就不超出5天,计数,每株实验菌平行制备2个平皿.另分离取个中1ml注皿, 倾泻温度不超出45℃的沙氏葡萄糖琼脂造就基20ml,置20～25℃或造就箱中造就不超出5天,计数,每株实验菌平行制备2个平皿. .2菌液对比组：分离取稀释液9.9ml,分离菌液,按实验组操纵,倾泻温度不超出45℃的胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基,置与实验组雷同前提下造就, 计数.每株实验菌平行制备2个平皿..3供试品对比组：取供试液1ml,倾泻温度不超出45℃的胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基,置与实验组雷同前提下造就, 计数.每株实验菌平行制备2个平皿.实验成果～2规模内.比值=实验组菌落数～供试品对比组的菌落数*对比组菌落数实验次数：1 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期：实验次数：2 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期：实验次数：3 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期：实验次数：1 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期：实验次数：2 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期实验次数：3 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期3.7.5结论:磨练人：日期：复核人：日期：掌握菌微生物检测办法实用性实验：.1实验办法：3.8.1.1实验组：取供试液10ml及不大于100cfu大肠埃希菌菌液参加胰酪大豆胨液体造就基中,置30～35℃造就18-24小时, 取上述造就物1ml接种至100ml麦康凯液体造就基中,42～44℃造就24-48小时.取麦康凯液体造就物划线接种于麦康凯琼脂造就基平板上30～35℃造就18-72小时.实验组应发展优越.3.8.1.2阴性对比组：取稀释剂10ml,参加胰酪大豆胨液体造就基中,置30～35℃造就18-24小时,阴性对比应无菌发展.3.8.1.3阳性对比组：取不大于100cfu大肠埃希菌菌液参加胰酪大豆胨液体造就基中,置30～35℃造就18-24小时, 取上述造就物1ml接种至100ml麦康凯液体造就基中,42～44℃造就24-48小时.取麦康凯液体造就物划线接种于麦康凯琼脂造就基平板上30～35℃造就18-72小时.阳性对比组应发展优越.实验成果：实验次数：1 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期：实验次数：2 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期：实验次数：3 供试品批号:结论：磨练人：日期：复核人：日期：4. 办法剖断：本品按《中国药典》2015年版（1105）.（1106）非无菌产品微生物限度检讨项下：“微生物计数法”“掌握菌检测法”进行实验.细菌数测定可用.霉菌.酵母菌数测定可用.掌握菌,可用.5.再验证周期：当产品的微生物限度检讨办法转变.产品组分.工艺转变时,应进行再实验. 6.参考文献：中国药典2015版7．成果评价及结论：验证尺度,该实用性实验办法接收 .审核人/日期：同意人/日期：。