中药化学试验黄柏中生物碱的提取

誅兽药黄柏由芸香科植物黄皮树干燥树皮制成。

黄柏含有多种生物碱成分，主要为小檗碱。

其他生物碱有黄柏碱、巴马丁、白瓜蒌碱、蝙蝠葛任碱等，其总生物碱具有抗溃疡及抗腹泻作用，对免疫功能具有调节作用。

本篇文字以几个实验的形式，以小檗碱含量作为判定标准，研究能影响黄柏提取效率的因素。

希望能对广大读者生产提供一定的参考意见，与之分享。

1仪器与试药医用电子天平（瑞士梅特勒公司产），M202/LC 电磁炉（广东美的电器股份有限公司），电热套（河南爱博特科技发展有限公司），RE-5205旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），紫外可见分光光度计（上海谱元仪器有限公司），高效液相色谱仪（美国生产制造）。

本实验中使用的硫酸、生石灰、乙醇均为分析纯试剂。

盐酸小聚碱对照品来自中国药品生物制品检定所。

黄柏药材购自河北安国市药昌药材有限公司。

试验中所用的水为双蒸水。

2测定方法与结果盐酸小檗碱含量测定方法：色谱条件为使用高效液相色谱仪其流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（50: 50），每100毫升，加十二烷基磺酸钠0.1克。

流速为1.0毫升每分钟，高效液相色谱仪柱温：35℃。

标准曲线制备，用医用电子天平称量适量的干燥至恒重的盐酸小檗酸对照品后加乙3醇，制成每毫升含0.120毫克的溶液，吸取其2、4、6、8微升注入液相色谱仪，连续进样5次。

以对照品进样量为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，盐酸小檗碱在0.30~1.02微克范围内线性良好。

配置供试品溶液的方法：取精确上述样品50毫克，置100毫升量瓶中，加乙醇85毫升，超声处理40分钟，加乙醇定容，用0.2微米滤膜过滤。

制备对照品溶液的方法：准确称取1.5毫克盐酸小檗碱标准品，置50毫升容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，即得。

加0.05摩尔/升硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，另取乙醇1毫升，置100毫升量瓶中，加0.05摩尔/升硫酸溶液稀释至刻度，作为空白对照溶液，检测波长：345纳米。

实验一 黄柏皮中小檗碱的提取、分离与鉴定一、 实验目的1掌握从黄柏皮中提取小檗碱的原理和方法。

2掌握柱层析的基本操作方法以及其在中药有效成分提取分离过程中的应用。

3掌握生物碱的鉴别方法。

二、 实验原理1、概述生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物,大都有明显的生理活性,是许多中草药中的有效成分。

它们是人类对植物研究得最早最多的一类有效成分,现已分离出有六千余种。

这些生物碱在植物体内一般均与有机酸或无机酸结合成盐而存在,只有弱碱性生物碱往往呈游离状态,还有一些是与糖结合成苷而存在。

小檗碱又名黄连素,是最先由毛莨科黄连（Coptis chinensis Fran ）和芸香科黄柏(Phellodendron amurense Rup.)等植物中提出的一种黄色生物碱。

黄连属植物的根茎、须根、叶中等都含有小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马亭等生物碱,我国黄连药材产量占世界第一位。

现已发现，唐松草属（Thalictrum ）、小檗科的小檗属(Berberis L.)、十大功劳属(Mahomia Nuff )及防己科的天仙藤属（Fibraurea ）等都可作为提取小檗碱的资源植物本实验是从黄柏皮中提取小檗碱。

黄柏皮是豆科植物黄皮树（Phellodendron chinense Schneid ）或黄檗（P.amurense Rupr .）的树皮，其主要有效成分为小檗碱，小檗碱及其盐类有较好的抗菌作用，临床用以治疗菌痢和一般炎症。

小檗碱是一种季铵碱,其游离碱为黄色针晶,Mp.145℃(乙醚),微溶于水,能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油醚。

小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成加成物。

不同小檗碱盐类在水中的溶解度均有较大差别。

小檗碱盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。

溶解度分别为:小檗碱,1∶２０（冷水）,1∶100(冷乙醇);盐酸盐,1∶500(冷水);硫酸盐,1∶30(冷水),利用这些特性提取盐酸小檗碱。

一、实验模块1. 黄柏的提取2. 黄柏中盐酸小檗碱的鉴定3. 黄柏的药理活性研究二、实验标题黄柏的提取、鉴定及药理活性研究三、实验目的1. 提取黄柏中的有效成分。

2. 鉴定黄柏中盐酸小檗碱的含量。

3. 研究黄柏的药理活性。

四、实验日期、实验操作者实验日期：2021年X月X日实验操作者：XXX、XXX、XXX五、实验原理黄柏（Phellodendron amurense Rupr.）为芸香科植物，其干燥树皮具有清热解毒、燥湿止痒、抗菌消炎等功效。

黄柏中的主要有效成分是盐酸小檗碱，具有显著的抗菌、抗病毒、抗肿瘤等药理活性。

本实验采用溶剂提取法提取黄柏中的有效成分，利用高效液相色谱法（HPLC）鉴定盐酸小檗碱的含量，并研究黄柏的药理活性。

六、实验步骤1. 黄柏的提取（1）称取干燥黄柏粉末5.0g，置于100mL圆底烧瓶中。

（2）加入50mL 70%乙醇，回流提取1小时。

（3）过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩至干。

（4）加入5mL甲醇溶解，备用。

2. 黄柏中盐酸小檗碱的鉴定（1）标准品溶液的制备：准确称取盐酸小檗碱标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，配制成浓度为1.0mg/mL的标准品溶液。

（2）样品溶液的制备：取上述提取得到的黄柏溶液1.0mL，用甲醇稀释至10mL，配制成样品溶液。

（3）HPLC分析：色谱柱：C18柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（70:30）；流速：1.0mL/min；检测波长：345nm；柱温：30℃。

（4）标准曲线绘制：取不同浓度的盐酸小檗碱标准品溶液，按上述HPLC条件进行分析，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

（5）样品中盐酸小檗碱含量测定：将样品溶液按上述HPLC条件进行分析，根据标准曲线计算样品中盐酸小檗碱的含量。

3. 黄柏的药理活性研究（1）抗菌活性研究：将金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌分别接种于平板上，用无菌棉签蘸取不同浓度的黄柏提取液涂布于平板上，37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈的大小。

黄柏中黄连素的提取摘要：报道了黄柏中黄连素的提取方法，用川黄柏中的荥经6年生的优质黄柏皮作为材料。

通过乙醇回流提取、减压回收溶剂、结晶得出黄连素的粗品，重结晶得黄连素的精品。

收率7.42%,含量为98.4%。

关键词：黄柏; 黄连素; 提取; 含量测定Abstract:CorkwerereportedBerberineextractionmethod,thePhellodendronofYingjingsix-year-old Huang Baipi quality as a material. By ethanol extraction and solvent recovery decompression, drawn berberine crystallization of crude goods, recrystallization in berberine excellent. Yield of 7.42%, the content of 98.4%。

Key words：Cork，Berberine，Extraction，Determination1. 前言1.1 天然药用植物植物中含有很多次生代谢物，是药物天然宝库。

世界有75%的人依赖从植物中获得的药物，除化学合成之外，人类大量依赖植物次生代谢物作为药物。

药用植物是中药的主要来源，我国的传统中草药已有数千年的历史，是世界上首屈一指的中草药生产和应用大国。

可用于治疗疾病的药用植物有11146种，其中有280种可以通过人工栽培获得原料，其余种类全部来源于野生资源。

与化学合成相比，植物药具有低毒性.天然性.成本低等特点，植物产生的药物在微生物中很少发现，且结构复杂.多样，合成难度大.耗时长。

并且天然的植物药在药用等方面比较安全，比化学合成药物的副作用要小。

1.2 黄柏药用价值黄柏别名黄薜、薜木、黄坡椤，为芸香科植物。

据有关资料介绍，黄柏内皮性味苦寒，含有黄柏酮、甾醇类化合物，是清热解毒、燥湿泻火的良药，可治疗阴虚火旺、骨蒸盗汗、风湿性关节炎、细菌性痢疾、黄疸等疾病。

一、实验目的1. 通过对黄柏的性状、显微特征和化学成分的观察，了解黄柏的药用价值和鉴定方法。

2. 培养学生的实验操作技能和观察分析能力。

二、实验原理黄柏（Phellodendron amurense Rupr.）为芸香科植物，具有清热燥湿、泻火解毒、祛风除湿、通经活络等功效。

黄柏主要成分为小檗碱，具有抗菌、消炎、镇痛、降血压等作用。

本实验通过观察黄柏的性状、显微特征和化学成分，验证其药用价值。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：黄柏根茎、乙醇、盐酸、硫酸、苯、水等。

2. 实验仪器：显微镜、烧杯、酒精灯、试管、蒸馏器、离心机、pH计等。

四、实验步骤1. 性状鉴定（1）观察黄柏根茎的形状、颜色、气味等特征。

（2）将黄柏根茎横切，观察其断面特征，包括木栓层、皮层、韧皮部、木质部等。

2. 显微鉴定（1）取黄柏粉末，制成临时装片，在显微镜下观察其显微特征，包括细胞形状、细胞壁、细胞间隙等。

（2）观察黄柏粉末中淀粉粒、纤维、导管等组织的特征。

3. 化学成分鉴定（1）提取黄柏中的盐酸小檗碱，采用盐析法进行分离。

（2）用紫外分光光度法测定盐酸小檗碱的含量。

五、实验结果与分析1. 性状鉴定黄柏根茎呈圆柱形，表面黄棕色或暗棕色，有纵皱纹。

断面呈淡黄色，皮层与木质部界限明显。

气微，味苦。

2. 显微鉴定显微镜下观察黄柏粉末，可见细胞壁呈网状纹理，细胞间隙较大。

淀粉粒呈椭圆形，直径约20μm。

纤维呈长条形，直径约10μm。

导管呈圆形或椭圆形，直径约20μm。

3. 化学成分鉴定（1）盐酸小檗碱的提取：经过盐析法分离，得到淡黄色固体。

（2）盐酸小檗碱含量测定：紫外分光光度法测定结果显示，盐酸小檗碱含量为0.75mg/g。

六、实验结论1. 黄柏具有清热燥湿、泻火解毒、祛风除湿、通经活络等功效，具有很高的药用价值。

2. 本实验通过性状鉴定、显微鉴定和化学成分鉴定，验证了黄柏的药用价值。

3. 实验过程中，学生掌握了黄柏的性状、显微特征和化学成分的观察方法，提高了实验操作技能和观察分析能力。

实验一黄柏皮中小檗碱的提取实验一 黄柏皮中小檗碱的提取、分离与鉴定一、 实验目的1掌握从黄柏皮中提取小檗碱的原理和方法。

2掌握柱层析的基本操作方法以及其在中药有效成分提取分离过程中的应用。

3掌握生物碱的鉴别方法。

二、 实验原理1、概述生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物,大都有明显的生理活性,是许多中草药中的有效成分。

它们是人类对植物研究得最早最多的一类有效成分,现已分离出有六千余种。

这些生物碱在植物体内一般均与有机酸或无机酸结合成盐而存在,只有弱碱性生物碱往往呈游离状态,还有一些是与糖结合成苷而存在。

小檗碱又名黄连素,是最先由毛莨科黄连（Coptis chinensis Fran ）和芸香科黄柏(Phellodendron amurense Rup.)等植物中提出的一种黄色生物碱。

黄连属植物的根茎、须根、叶中等都含有小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马亭等生物碱,我国黄连药材产量占世界第一位。

现已发现，唐松草属（Thalictrum ）、小檗科的小檗属(Berberis L.)、十大功劳属(Mahomia Nuff )及防己科的天仙藤属（Fibraurea ）等都可作为提取小檗碱的资源植物本实验是从黄柏皮中提取小檗碱。

黄柏皮是豆科植物黄皮树（Phellodendron chinense Schneid ）或黄檗（P.amurense Rupr .）的树皮，其主要有效成分为小檗碱，小檗碱及其盐类有较好的抗菌作用，临床用以治疗菌痢和一般炎症。

小檗碱是一种季铵碱,其游离碱为黄色针晶,Mp.145℃(乙醚),微溶于水,能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油醚。

小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成加成物。

不同小檗碱盐类在水中的溶解度均有较大差别。

小檗碱盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。

溶解度分别为:小檗碱,1∶２０（冷水）,1∶100(冷乙醇);盐酸盐,1∶500(冷水);硫酸盐,1∶30(冷水),利用这些特性提取盐酸小檗碱。

一、实验目的1. 了解升华现象及其应用。

2. 掌握黄柏中有效成分的提取方法。

3. 分析黄柏升华产物的性质。

二、实验原理升华是指固体直接从固态转变为气态，不经过液态的过程。

黄柏中含有的盐酸小檗碱等有效成分具有升华性质，通过升华法可以将这些成分从药材中提取出来。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：黄柏粉末、蒸馏水、乙醇、盐酸、氢氧化钠、活性炭等。

2. 实验仪器：电子天平、干燥箱、升华装置、蒸发皿、酒精灯、烧杯、漏斗、滤纸等。

四、实验步骤1. 准备黄柏粉末：将黄柏药材研磨成粉末，过筛，取适量备用。

2. 提取有效成分：将黄柏粉末放入烧杯中，加入适量蒸馏水，加热煮沸，使有效成分充分溶解。

3. 升华操作：将提取液倒入蒸发皿中，置于升华装置中。

用酒精灯加热，使水分蒸发，待蒸发皿中出现固体时，停止加热。

4. 冷却结晶：将升华产物置于干燥箱中，冷却至室温，观察固体是否结晶。

5. 精制：将结晶固体用滤纸过滤，收集滤液，加入适量的活性炭，搅拌，静置。

再次用滤纸过滤，收集滤液。

6. 结晶：将滤液倒入烧杯中，加入适量的乙醇，搅拌，静置。

待固体结晶后，用滤纸过滤，收集滤液。

7. 干燥：将滤液倒入蒸发皿中，置于酒精灯上加热，使水分蒸发，待蒸发皿中出现固体时，停止加热。

8. 分析：观察升华产物的性状，并与文献报道进行比较。

五、实验结果1. 黄柏粉末经加热后，有效成分盐酸小檗碱升华，形成白色固体。

2. 冷却结晶后，观察到白色固体结晶，表明盐酸小檗碱已从药材中提取出来。

3. 精制后，滤液颜色变浅，固体含量增加，说明盐酸小檗碱的纯度提高。

4. 干燥后，得到白色固体，具有盐酸小檗碱的典型性状。

六、实验结论通过升华法，成功从黄柏中提取出盐酸小檗碱，并对其进行了精制。

实验结果表明，升华法是一种有效的黄柏有效成分提取方法，为黄柏药材的开发利用提供了实验依据。

七、注意事项1. 实验过程中，注意加热温度的控制，防止过度加热导致有效成分分解。

2. 升华操作过程中，注意防止水分过多，影响升华产物的质量。