拟南芥培养Protocol

拟南芥培养Protocol

拟南芥生长的适宜温度白天为22℃-24℃,夜温最好比日温低2℃,适宜的湿度为60-70%,生长期适宜的光强为150μmol·s-1·m-2(6支36W日光灯下35cm处测得)。幼苗期不耐高光强,可适当遮荫.光质也较重要,应选用植物生长专用的日光灯(如荷兰产TLD型Philip豪华直管荧光灯).拟南芥在日照长于12小时下才会开花,一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳

1.准备发苗培养基:1/2 MS,Sucrose:10g/L,pH5.7,agar:0.7-0.8%.灭菌后,在超净台上分装入培养皿.

2.种子消毒:种子放在1.5ml试管中, 加入1ml10%NaClo,混匀,消毒5min,用无菌水洗5次以上(用移液枪吸).

3.播种:用移液枪将种子吸到培养皿上,可多加些水,将种子铺均匀(不要太密,太密根缠在一起不好移苗),用移液枪吸干水,在超净台上让培养皿干了,密封盖子,4℃暗处理两天后,移到光照培养箱(22℃,光周期12h),若种子较密,则在光照培养箱中生长1周后即可移苗,否则根长太长后易缠在一起,但太小的苗移栽后,需适当遮荫.最好是在每皿<30株这样的密度下,让其生长两周后再移苗.

4.移苗:将蛭石与珍珠岩按(3:1)的比例混好,装入花盆,将花盆放入有水的塑料周转框中,框中的水就会通过花盆底部的孔渗上来,待花盆中的基质湿透后即可移苗.小心轻轻用镊子从培养皿中连根拉出小苗,把根平放在蛭石表面,用镊子把根轻轻压下.移苗结束后,用保鲜膜覆盖3-4天后揭膜.从苗期直至开花,可在塑料周转框中始终保持1-3cm的水层,在开始收籽期,不再需要过多的水分,可保持塑料周转框干燥,此时每隔2-3天浇一次水即可.整个生长期可浇3-4次拟南芥营养液.

5.收籽:在种荚变黄,变干时可以收籽.将种子抖落在纸上,用金属滤网过一下以除去杂质,将种子装入写了标记的小纸袋中,放于干燥的环境中让种子进一步干燥后,封存于1.5ml试管中.

附拟南芥营养液配方

nutrient solution containing:

5mM KNO3, 2.5mM KH2PO4, 2mM MgSO4, 2mM Ca(NO3)2, 50µM Fe-EDTA, 70µM H3BO4,14µM MnCl2, 0.5µM CuSO4, 1µM ZnSO4, 0.2µM Na2MoO4, 10µM NaCl, 0.01µM CoCl2, adjusted to PH 5.7

具体配法（药品刚好50L水培液用）:

1)大量元素（包括25.25gKNO3，24.65gMgSO4·7H2O ,）：溶解，加水至500ml,

配制成100倍母液Ⅰ。

2)23.6g Ca(NO3)2·4H2O：溶解，加水至500ml,配制成100倍母液Ⅱ。

3)铁盐：0.69gFeSO4.7H2O，0.93gNa.EDTA.2H2O两种药品分别溶解，混合后

定容至500ml，配制成100倍母液Ⅲ。

4)微量元素母液（母液Ⅳ）：1000倍。4340mgH3BO4，2772mgMnCl2.4H2O，

125mgCuSO4.5H2O，287.5mgZnSO4.7H2O，72.6mgNa2MoO4.2H2O，

58.5mgNaCl, 2.38mgCoCl2.6H2O，加水至1000ml。

5)17.0g KH2PO4加水至500ml,配制成100倍母液Ⅴ。

6)K2SO4:10.88g,溶解加水至500ml,配制成100倍母液Ⅵ。

正常培养液：

每升各取10ml母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅴ,1ml母液Ⅳ,pH 5.7;