实验1拟南芥室内培养观察与农杆菌转化拟南芥

发育生物学实验
2016年
实验1 拟南芥室内培养观察及 农杆菌转化拟南芥
一、拟南芥简介
二、实验技术---农杆菌介导拟南芥转化
农杆菌介导拟南芥的转化
实验目的
1、学习真核生物的转基因技术及农杆菌介导的转化原理 2、掌握农杆菌介导转化拟南芥 的实验方法 3、了解拟南芥的生理特点及在基因工程实验中应用。
实验材料
叶盘法 原生质体共培养 创伤植物感染法
原生质体培 养
农杆菌介导拟南芥的转化
实验原理 农杆菌的感染与生存
农杆菌介导拟南芥的转化
实验原理
技术应用
一种方便，高效的植物转基因方法，多用于转化双子叶植物， 经过改进后也逐渐用于单子叶植物的转化。
McKinney et al 2001
拟南芥转基因技术：
8、高压灭菌
（1） MS培养基（121ºC,15分钟）。 （2）玻璃烧杯：200ml 2个、500ml 1个、 50ml的三角瓶
20个、培养皿8个（ 4培养皿装滤纸，6片/平皿）。 （3）枪型镊子、剪刀各2把。 （4）1ml、200ul、20ul的tip头各1盒。 (5)无菌水500～700mL*2
农杆菌GV3101重组菌株，重组双元表达载体pCAMBIA1300 ， 拟南芥
实验试剂
LB液体培养基，Kan（卡那霉素），Rif（利福平）； 转化介质 ：MS培养基、5%蔗糖，0.03%SilwetL-77，KOH调 pH 5.7。
ຫໍສະໝຸດ Baidu
农杆菌介导拟南芥的转化
实验原理
浸花法
双子叶植物
无宿主限制， 技术限制
In planta Agrobacterium-mediated gene transfer by infiltration of adult Arabidopsis thaliana plants. C R Acad Sci Ser III Sci Vie Life Sci 1、影响因素
MS salts, hormone, OD of bacteria, vacuum, etc. 无影响 Plant health 非常重要因素 2、转化效率： 1% 3、转化步骤 a、Grow healthy Arabidopsis plants until they are flowering.
拟南芥转基因技术： McKinney et al 2001
1、影响因素 MS salts, hormone, OD of bacteria etc.
2、 3、 4、
作业
预习：烟草叶片愈伤组织诱导和器官发生
课后各组查阅资料，设计3个不同浓度的NAA和 6-BA，用于诱导不同器官，如芽、根、叶等