分子实验常用试剂配制(精)

分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法1.常见试剂配制方法：(1)磷酸盐缓冲液（PBS）的配制方法：-配制PBS需要使用NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4等化学品。

-以10倍浓度配制PBS的浓缩溶液，然后稀释为需要的浓度。

-例如，1倍浓度的PBS可以通过将1升的10倍浓度PBS溶液加入9升蒸馏水来制备。

(2) 神经元无血清培养基（Neurobasal Medium）的配制方法：- 配制Neurobasal Medium需要使用神经元培养基基本成分及其他补充物质。

-根据制造商提供的配方，按照相应比例将各种化学品溶解在无菌蒸馏水中。

-配制好的培养基可以用于维持和培养神经元体外培养。

(3) 洗涤缓冲液（Washing Buffer）的配制方法：-配制洗涤缓冲液需要使用磷酸盐缓冲液（PBS）及其他添加剂。

- 将PBS溶液中加入适当浓度的Tween-20或者Tris-HCl来制备洗涤缓冲液。

-根据实验需求，可以调整洗涤缓冲液的成分和浓度。

(4) 乙醇（Ethanol）溶液的配制方法：-配制乙醇溶液常用的浓度有70%和100%。

- 70%的乙醇溶液可以通过将70ml无菌蒸馏水加入30ml无水乙醇中配制得到。

-100%的乙醇溶液可以直接使用无水乙醇。

2.常见缓冲液配制方法：(1) Tris/Tricine缓冲液的配制方法：- 配制Tris/Tricine缓冲液需要使用Tris（三羟甲基氨基甲烷）和Tricine（三甘胺酸）等化学品。

- 根据实验要求，在一定PH范围内，按照不同比例混合Tris和Tricine，溶解于适量的蒸馏水中。

(2) 氯化钾缓冲液（KCl Buffer）的配制方法：- 配制KCl Buffer需要使用KCl和其他添加剂。

-将适量的KCl和其他缓冲液成分溶解在蒸馏水中。

-根据实验要求，调整KCl的浓度和缓冲液的PH值。

(3) Tris/Acetate缓冲液的配制方法：- 配制Tris/Acetate缓冲液需要使用Tris和乙酸等化学品。

TAKARA实验室常规试剂配制方法TAKARA实验室是一家提供生命科学研究和临床诊断解决方案的公司。

其产品线包括分子生物学试剂、细胞培养耗材、蛋白质研究试剂和临床诊断试剂等。

在TAKARA实验室产品的使用过程中，常规试剂的配制方法是非常重要的一部分。

本文将介绍一些TAKARA实验室常规试剂的配制方法。

1. Tris缓冲液的配制方法Tris缓冲液可用于蛋白质电泳，DNA和RNA电泳等实验中。

配制方法如下：1）将Tris酸粉末称取至容器中。

2）加入蒸馏水溶解，并调节pH至所需值（一般为8.0）。

3）使用0.22μm的滤器进行过滤。

2.PBS缓冲液的配制方法PBS缓冲液是一种常用的生理盐水缓冲液，在细胞培养和免疫染色实验中经常使用。

配制方法如下：1）将NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4按指定比例称取至容器中。

2）加入蒸馏水溶解，并调节pH至所需值（一般为7.4）。

3）使用0.22μm的滤器进行过滤。

3.LB培养基的配制方法LB培养基是一种常用的大肠杆菌培养基，在分子生物学实验中经常使用。

配制方法如下：1）将Tryptone、Yeast Extract和NaCl按指定比例称取至容器中。

2）加入蒸馏水溶解，并使用自动调pH仪调节pH至所需值（一般为7.0）。

3）将容器密封，并在121℃高压灭菌器中高压灭菌15-20分钟。

4. RNase-Free水的制备方法RNase-Free水在RNA实验中非常重要，保证实验的可靠性和准确性。

制备方法如下：1）将蒸馏水倒入洁净的玻璃烧杯中。

2）放入微波炉中加热，每隔一段时间取出搅拌一次，直至水沸腾。

3）冷却后，使用0.22μm的滤器进行过滤。

4）将过滤后的水贮存在RNase-Free的容器中。

5.甲醛溶液的配制方法甲醛溶液可用于细胞固定和染色实验。

配制方法如下：1）将甲醛溶液称取至容器中。

2）加入蒸馏水溶解，使浓度达到所需值（一般为4%）。

3）使用0.22μm的滤器进行过滤。

实验室常用溶液及试剂配制表一普通酸碱溶液的配制表二常用酸碱指示剂表三混合酸碱指示剂表四容量分析基准物质的干燥表五缓冲溶液的配制实验室常用试验方法2九、柠檬酸（C6H8O7·H2O）称取试样1.5g（精确到0.0002g）于三角瓶内，加入水50ml溶解，加酚酞指示剂3滴，用1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至粉红色为终点，同时做空白试验。

计算：X%（一水）= （V1-V0）×C×0.06404x m×（1-0.08566）×100X%（无水）= （V1-V0）×C×0.06404x m×100V1-----消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml；V0-----空白所消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml；C------氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L；m---样品质量。

十、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等）称取2g（精确到0.0002g）样品，用10ml盐酸（1+1）溶解，转移至100ml容量瓶中定溶，用移液管吸取10ml于250ml锥形瓶中，加50ml水，5ml蔗糖溶液（25g/L），2ml三乙酸胺（1+1），1ml乙二胺（1+1），1滴孔雀绿指示液（1g/L），滴加氢氧化钾溶液（200g/L）至无色，再过量10ml，加0.1g盐酸羟胺（每加一种试剂都要摇匀），加钙黄绿素少许，在黑色背景下用0.05mol/L的EDTA标准溶液滴定至绿色荧光消失呈现紫红色为滴定终点。

Ca%= C×V×0.4008x m ×100C------EDTA标准溶液的浓度，mol/L；V-----消耗EDTA标准溶液的体积，ml；m----样品质量。

（二）氟（Fˉ）含量的测定：1、标准曲线的绘制；2、试样含量的测定：称取0.5g（精确到0.0002g）置于50ml纳氏比色管中，加1mol/L盐酸10ml，密闭提取1h （不时摇动），避免粘于管壁，提取后加总离子强度缓冲液25ml，加水至刻度，以滤纸过滤。

实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl7.4 约70mL7.6 约60mL8.0 约42mL4. 将溶解定容至1L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl（pH8.8）□配制量1L□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L□配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500 mM EDTA（pH8.0）20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。

4. 室温保存。

4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠（pH5.2）□配制量100mL□配置方法1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。

分子生物学实验常用试剂配制分子生物学实验常用试剂配制(1) 0.01M PBS缓冲液：一袋粉制PBS缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。

0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。

(2) 0.01M枸橼酸盐缓冲液：一袋粉制枸橼酸盐缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。

0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠3g，柠檬酸0.4g。

(3)1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl 调至pH8.0,加水至1000ml。

(4) 1‰DEPC水：1mlDEPC加入1000ml新鲜三蒸水中，剧烈震荡20分钟使充分混匀，37o C至少放置2h或过夜，HIRAYAMA HV-50高压灭菌器高温高压30分钟降解DEPC，4℃保存。

(5) 1%琼脂糖凝胶：取琼脂糖0.2g置烧杯中，加入20ml的1×TAE缓冲液，封闭锥形瓶口，放入微波炉内加热，不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液，待琼脂糖全部熔化后取出摇匀，冷却至60℃左右，加入10mg/ml溴化乙锭（EB）1μl，EB的终浓度为0.5μg/ ml，充分混匀。

将温热的凝胶倒入已经放好梳子的凝胶槽中，厚度约为3-5mm，注意不要有气泡，将凝胶放置室温待其自然凝固。

凝固后从胶槽中轻轻取出梳子。

(6)0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0，加水至1000ml。

(7) 50×TAE缓冲液：Tris碱242g，17.4mol/L冰乙酸57.1ml，0.5mol/L EDTA (PH8.0)100ml加蒸馏水至1000ml。

常用试剂配方常用试剂：储存于阴凉、通风的地方；远离火种、热源。

避免光照。

室温不超过30℃，相对湿度不超过80％。

包装必须密封，切勿受潮。

应与易（可）燃物、还原剂、碱类、醇类、食用化学品分开存放，切忌混储，储区应备有合适的材料收容泄漏物。

操作注意事项：尽量在通风橱操作，加强通风，避免粉尘扩散。

远离易燃、可燃物，避免与还原剂、碱类、醇类接触，防止包装及容器损坏。

使用后应留意剩余量，注意及时订购。

8M Urea（尿素）组份浓度： 8mol/L Urea（MW：60.07）配制量： 1L配制方法： 1.称取尿素480g，置于1L的蓝盖瓶中。

2. 加水至1L，置于磁力搅拌器上充分搅拌。

3. 于棕色瓶中，4℃保存。

4.使用前，先在常温放置，使析出的尿素溶解。

0.25％AgNO3 （硝酸银）组份浓度：0.25％（W/V）AgNO3（MW：169.87）配制量： 500ml配制方法: 1.准确称取硝酸银1.25g。

2.加入500ml的去离子水，充分溶解。

3.于棕色瓶中,常温保存。

0.5M EDTA（PH 8.0）组分浓度: 0.5 mol/L EDTA（MW：372.24）配制量: 500ml配制方法: 1．称取93g Na2EDTA·2H2O置于500ml蓝盖瓶中。

2．加入400ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。

3．用NaOH调节调节pH值至8.0（约需加入20g固体NaOH），当pH接近8.0时， EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。

4．高温高压灭菌后，室温保存半年。

5M NaCl组份浓度： 5mol/L NaCl (MW：58.5)配制量： 1L配制方法： 1.准确称取氯化钠292.5g，置于1L的蓝盖瓶中。

2.用去离子水溶解并稀释至1L。

3.高温高压灭菌后，常温保存。

50% 甘油组分浓度： 50%(V/V) glycerol配制量： 100ml配制方法: 1. 量取下列试剂，置于250ml蓝盖瓶 中：100% glycerol 50ml2.加入50ml去离子水，充分搅拌溶解。

一、实验背景分子生物学是一门研究生物大分子如核酸、蛋白质等结构与功能的科学。

在分子生物学实验中，试剂的选择和使用对实验结果的准确性至关重要。

本实验报告将详细介绍分子生物学实验中常用的试剂及其作用。

二、实验试剂1. 核酸提取试剂（1）酚/氯仿：用于从细胞中提取DNA和RNA，具有强烈的蛋白变性作用。

（2）异丙醇：用于DNA的沉淀，降低DNA的溶解度。

（3）无水乙醇：用于RNA的沉淀，降低RNA的溶解度。

（4）RNA酶抑制剂：防止RNA降解，保证实验结果的准确性。

2. DNA提取试剂（1）Tris-HCl缓冲液：用于DNA的提取，调节pH值，保持酶的活性。

（2）EDTA：抑制金属离子与DNA结合，防止DNA降解。

（3）SDS（十二烷基硫酸钠）：用于蛋白质的变性，使蛋白质与DNA分离。

（4）蛋白酶K：降解蛋白质，去除蛋白质杂质。

3. DNA纯化试剂（1）琼脂糖凝胶：用于DNA的分离和纯化。

（2）DNA纯化试剂盒：用于DNA的纯化和回收。

4. DNA扩增试剂（1）PCR反应缓冲液：提供反应所需的pH值、盐浓度等。

（2）dNTPs（脱氧核苷三磷酸）：作为PCR反应的原料。

（3）引物：用于PCR反应的特异性扩增。

（4）Taq酶：DNA聚合酶，负责DNA的合成。

5. DNA检测试剂（1）溴化乙锭（EB）：用于DNA的染色，便于在紫外光下观察。

（2）琼脂糖凝胶电泳缓冲液：用于DNA的电泳。

（3）DNA标记物：用于DNA的定量分析。

6. 蛋白质提取试剂（1）裂解缓冲液：用于蛋白质的提取，保证蛋白质的完整性。

（2）蛋白酶抑制剂：防止蛋白质降解。

（3）SDS：使蛋白质变性，便于与核酸分离。

7. 蛋白质纯化试剂（1）柱层析：用于蛋白质的纯化。

（2）凝胶过滤：用于蛋白质的纯化。

8. 蛋白质检测试剂（1）考马斯亮蓝G-250：用于蛋白质的定量分析。

（2）BCA法：用于蛋白质的定量分析。

（3）SDS-PAGE凝胶：用于蛋白质的分离和纯化。

分⼦⽣物学实验常⽤缓冲液的配制⽅法各种缓冲液的配制⽅法Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液24。

2柠檬酸. H2O，分⼦量=210.14 0.1mol/L溶液含21.01g/L2柠檬酸钠.2H2O，分⼦量=294.12；0.1mol/L溶液含29.4g/L2（1）醋酸盐溶液的配制：醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.6)取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml，再加⽔稀释⾄250ml,即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.7)取⽆⽔醋酸钠20g,加⽔300ml溶解后，加溴酚蓝指⽰液1ml及冰醋酸60～80ml，⾄溶液从蓝⾊转变为纯绿⾊，再加⽔稀释⾄1000ml，即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.8)取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加⽔稀释⾄1000ml，即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.5)取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加⽔稀释⾄1000ml,即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.6)取醋酸钠5.4g,加⽔50ml使溶解，⽤冰醋酸调节pH值⾄4.6，再加⽔稀释⾄100ml，即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH6.0)取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加⽔稀释⾄500ml，即得。

⽤醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C(NaAc)/C(HAc)]（在此，C(HAc)指醋酸的浓度，C(NaAc)指醋酸钠的浓度,Ka 是醋酸的解离常数=1.8*10-5（1.8乘10的-5次⽅），PKa=-lgKa=4.75，将PH=5.5代⼊，可得C(NaAc)/C(HAc)=5.6 通常我们配制时会使C(HAc)=0.1mol/L，或是C(HAc)=0.2mol/L等。

若是配制C(HAc)=0.1mol/L，则C(NaAc)=0.56mol/L 称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克量取冰醋酸体积为0.1*1000/17.5=5.7mL。

分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法1.离心管清洗液配制方法：将500mL蒸馏水加入500mL乙醇中配制而成。

2.TE缓冲液配制方法：将1 M Tris-HCl (pH 8.0) 溶液和0.5 M EDTA (pH 8.0) 溶液以1:200的比例混合，加入蒸馏水配制而成。

最终pH值约为8.0。

3.LB培养基配制方法：将10g/L氯化钠、5g/L酵母浸粉、10g/L蛋白胨加入1L蒸馏水中，调整pH至7.0-7.5、将溶液加热，搅拌溶解，然后使用纸滤器滤过，装入含有取10g搅拌均匀的琼脂糖的培养皿中。

灭菌后冷却到45°C左右，然后再倒入培养皿中。

4. 蒸馏水（Milli-Q水）配制方法：使用商用蒸馏水设备如 Milli-Q等，生成去离子水，再通过0.22 μm的滤器进行过滤，获得蒸馏水。

5. LB/Agar培养基配制方法：将10g/L氯化钠、5g/L酵母浸粉、10g/L蛋白胨、15g/L 琼脂加入1L蒸馏水中，调整pH至7.0-7.5、将溶液加热，搅拌溶解，然后使用纸滤器滤过。

将过滤后的溶液倒入培养皿中，灭菌后冷却到45°C 左右。

1.TBE缓冲液配制方法：将1 M Tris-Borate 溶液、0.1 M EDTA 溶液、10% (w/v) Boric acid 溶液按5:19:75的比例混合，加入蒸馏水配制而成。

最终pH值约为8.0。

2.TAE缓冲液配制方法：将40 mM Tris、20 mM 醋酸和1 mM EDTA 按1:0.5:0.1的比例混合，加入蒸馏水配制而成。

最终pH值约为8.0。

3. Tris-HCl缓冲液配制方法：将1 M Tris-HCl 溶液加入蒸馏水，调整pH值至所需范围。

4.PBS缓冲液配制方法：将0.2g/LKH2PO4、0.2g/LNa2HPO4、8.5g/LNaCl和0.2g/LKCl加入1L蒸馏水中，调整pH值至7.45. Tris-EDTA缓冲液（TE缓冲液）配制方法：将1 M Tris-HCl (pH 8.0) 溶液和0.5 M EDTA (pH 8.0) 溶液以1:200的比例混合，加入蒸馏水配制而成。

分子生物学常用实验技术第一章质粒 DNA 的分离、纯化和鉴定第二章 DNA酶切及凝胶电泳第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第四章 RNA的提取和 cDNA 合成第五章重组质粒的连接、转化及筛选第六章基因组 DNA 的提取第七章 RFLP和 RAPD 技术第八章聚合酶链式反应 (PCR扩增和扩增产物克隆第九章分子杂交技术第十章测序技术第一章质粒 DNA 的分离、纯化和鉴定第一节概述把一个有用的目的 DNA 片段通过重组 DNA 技术 , 送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体 (Vector。

细菌质粒是重组 DNA 技术中常用的载体。

质粒 (Plasmid是一种染色体外的稳定遗传因子 , 大小从 1-200kb 不等 , 为双链、闭环的 DNA 分子 , 并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。

质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力 , 能在子代细胞中保持恒定的拷贝数 , 并表达所携带的遗传信息。

质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质,如离开宿主细胞则不能存活 , 而宿主即使没有它们也可以正常存活。

质粒的存在使宿主具有一些额外的特性 , 如对抗生素的抗性等。

F 质粒 (又称F 因子或性质粒、 R 质粒 (抗药性因子和 Col 质粒 (产大肠杆菌素因子等都是常见的天然质粒。

质粒在细胞内的复制一般有两种类型 :紧密控制型 (Stringent control和松驰控制型 (Relaxed control 。

前者只在细胞周期的一定阶段进行复制 , 当染色体不复制时 , 它也不能复制 , 通常每个细胞内只含有 1个或几个质粒分子 , 如 F 因子。

后者的质粒在整个细胞周期中随时可以复制 , 在每个细胞中有许多拷贝 , 一般在 20个以上 , 如 Col E1质粒。

在使用蛋白质合成抑制剂 -氯霉素时 , 细胞内蛋白质合成、染色体 DNA 复制和细胞分裂均受到抑制 , 紧密型质粒复制停止 , 而松驰型质粒继续复制 , 质粒拷贝数可由原来 20多个扩增至 1000-3000个 , 此时质粒 DNA 占总DNA 的含量可由原来的 2%增加至 40-50%。

氨苄青霉素﹡组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素﹡配制量 50ml﹡配制方法1.称取 5g Ampicillin置于 50ml 塑料离心管中。

2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容至 50ml 。

3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。

卡那霉素 (可配 25mL﹡组分浓度 50mg/ml卡那霉素﹡配制量 50ml﹡配制方法1.称取2.5g 卡那霉素置于 50ml 塑料离心管中。

2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。

3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。

RNase A﹡组分浓度 10mg/ml RNase A﹡配制量 50ml﹡配制方法1.取 0.5g RNase A置于 50ml 塑料离心管中。

2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。

3. 100℃煮沸 15min, 缓慢冷却至室温,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。

IPTG﹡组分浓度 24mg/ml IPTG﹡配制量 50ml﹡配制方法1.称取 1.2g IPTG置于 50ml 塑料离心管中。

2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。

3.用0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。

X-Gal﹡组分浓度 20mg/ml X-Gal﹡配制量 50ml﹡配制方法1.称取 1g X-Gal置于 50ml 塑料离心管中。

2.加入 40mlDMF (二甲基甲酰胺 ,充分混合溶解之后定容至 50ml 。

3.小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。

DTT﹡组分浓度 1M DTT﹡配制量 10ml﹡配制方法1.称取 1.54g DTT置于 15ml 塑料离心管中。

2.加入 8ml 的 10mM NaAc(pH5.2 ,充分混合溶解之后定容至 10ml 。

3.用0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。

实验室常用试剂缓冲液的配制方法实验室中常常需要使用各种试剂和缓冲液，以下是一些常用试剂和缓冲液的配制方法及其用途。

1.NaCl溶液配制：NaCl作为实验室常用的盐类试剂，可用于生化、分子生物学等多个实验室操作中。

常用浓度为0.9%（w/v）的生理盐水。

配制方法如下：称取对应质量的NaCl加入蒸馏水中，搅拌溶解，用蒸馏水调整至最终体积。

2.血红蛋白溶液配制：血红蛋白溶液可用于实验室的一些生化、免疫学等实验。

常用方法如下：从新鲜血液中分离出血红蛋白，加入适量的生理盐水或缓冲液，控制pH值为7.4-7.6，并用密闭容器保存。

3. Tris-HCl缓冲液配制：Tris-HCl缓冲液在生物化学实验中广泛应用于DNA/RNA电泳、蛋白质电泳等实验。

常用方法如下：按需求称取Tris固体加入一定量的去离子水中，搅拌溶解，用强碱（比如氢氧化钠）或强酸（比如盐酸）调整pH值至所需范围。

1. Tris缓冲液配制：Tris缓冲液常用于酶反应、凝胶电泳等实验中，配制方法如下：称取适量的Tris固体加入适量的去离子水中，搅拌溶解，用浓盐酸或盐酸调节pH值至所需范围，并用去离子水稀释至最终体积。

2.PBS缓冲液配制：PBS缓冲液在生物学实验中用于细胞培养、免疫染色等操作中。

配制方法如下：称取适量的NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4固体加入适量的去离子水中，搅拌溶解，并用去离子水稀释至最终体积，调整pH值至所需范围。

3. Tris-Borate-EDTA（TBE）缓冲液配制：TBE缓冲液常用于核酸凝胶电泳中，配制方法如下：称取适量的Tris固体加入适量的去离子水中，搅拌溶解，用浓盐酸或盐酸调节pH值至所需范围，然后加入Boric acid和EDTA固体，继续搅拌溶解，并用去离子水稀释至最终体积。

以上仅是一些常见的试剂和缓冲液的配制方法，实验室中还会使用到很多其他试剂和缓冲液。

在配制试剂和缓冲液时，需要注意选择合适的纯度的试剂、使用无菌器具和操作台，并遵循相应的实验操作规范和安全要求。

细胞培养PBS配方PBS即磷酸盐缓冲生理盐水，都是含有H2PO4-、HPO42- 缓冲体系和NaCl，用于调节渗透压，达到与人体相当的水平，分为含钾离子和不含钾离子两种。

1、不含钾离子的PBS配方（由NaCl，Na2HPO4和NaH2PO4三种成分组成，用于其它实验缓冲和稀释用）母液的配制：0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各种浓度PB（pH=7.4）的配制：先配 0.2M PB （pH=7.4，100ml）：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4，即可。

然后只需将0.2M PB （pH=7.4）按相应比例适当稀释即可，如：0.1M PB（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

配好后加入 NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。

* 其他各种另 PH值的 0.2M PB（100ml）配方：pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml）5.7 93.56.55.8 92 85.9 90 106.0 87.7 12.36.1 85 156.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51 496.9 45 557.0 38 627.1 33 677.2 28 727.3 23 777.4 19 817.5 16 847.6 13 877.7 10.5 0.57.8 8.5 91.57.9 7 938.0 5.3 94.7 .2、含钾离子的PBS配方（由NaCl，KCl，Na2HPO4和KH2PO4四种成分组成，一般用于组织培养）0.01M磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法：(免疫组化常用)称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可，高压灭菌。

实验室常用溶液及试剂配制实验室常用溶液、试剂的配制表一普通酸碱溶液的配制表二常用酸碱指示剂表三混合酸碱指示剂表四容量分析基准物质的干燥表五缓冲溶液的配制1、氯化钾-盐酸缓冲溶液2、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液3、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液4、乙酸-乙酸钠缓冲溶液5、磷酸二氢钾—氢氧化钠缓冲溶液6、硼砂-氢氧化钠缓冲溶液7、氨水-氯化铵缓冲溶液8、常用缓冲溶液的配制实验室常用试验方法2九、柠檬酸（C6H8O7·H2O）称取试样1.5g（精确到0.0002g）于三角瓶内，加入水50ml溶解，加酚酞指示剂3滴,用1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至粉红色为终点,同时做空白试验。

计算：X%（一水）= (V1-V0)×C×0。

06404 m×（1—0。

08566)×100X％(无水）= （V1—V0)×C×0.06404 m×100V1——-—-消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml;V0-—-—-空白所消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml；C--—-—-氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L；m-—-样品质量。

十、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等）称取2g（精确到0.0002g）样品，用10ml盐酸（1+1)溶解,转移至100ml容量瓶中定溶，用移液管吸取10ml于250ml 锥形瓶中，加50ml水,5ml蔗糖溶液（25g/L），2ml三乙酸胺（1+1）,1ml乙二胺（1+1）,1滴孔雀绿指示液(1g/L），滴加氢氧化钾溶液（200g/L）至无色，再过量10ml，加0。

1g盐酸羟胺（每加一种试剂都要摇匀）,加钙黄绿素少许，在黑色背景下用0。

05mol/L的EDTA标准溶液滴定至绿色荧光消失呈现紫红色为滴定终点。

Ca%= C×V×0。

4008 m ×100C--—-—-EDTA标准溶液的浓度，mol/L；V-——--消耗EDTA标准溶液的体积，ml；m—-——样品质量。

分子生物学常用缓冲液、试剂和贮存液的配制1、6*Loading Buffer（DNA电泳用，50ml配方）组分浓度：100mM EDTA, 40%(V/V) 蔗糖, 0.05%（W/V）xylene cyanol FF, 0.05%（W/V）溴酚蓝配制方法：称取25mg溴酚蓝，25mg xylene cyanol FF，5ml 0.5MEDTA，加入约20ml去离子水，加热搅拌，充分溶解，加入20g蔗糖，去离子水定容至50ml。

2、10*PBS（pH7.2～7.4，分子克隆推荐配方）组分浓度：NaCl 137 mmol/L，KCl 27 mmol/L，Na2HPO4 100 mmol/L，KH2PO4 20 mmol/L配置方法：用800ml去离子水溶解80 g NaCl, 2 g KCl，14.4 g Na2HPO4和2.4 g KH2PO4。

用盐酸调节pH 至7.4，加水定容至1 L，高温高压灭菌，室温保存。

3、20*SSC （pH约7.0）组分浓度：300 mmol/L 柠檬酸三钠，3 mol/L 氯化钠配制方法：称取柠檬酸三钠·2H2O 88.23 g，氯化钠175.3 g，加入800 ml去离子水充分溶解，用14 N HCl 调pH为7.0，去离子水定容至1 L，高温高压灭菌后室温保存。

4、10*Tris-甘氨酸转膜液（pH约8.3）1 L组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸配制方法：甘氨酸144.13 g，Tris 30.29 g，去离子水溶解定容至1 L。

使用前，100 ml 10*转膜液，加入200 ml甲醇，700 ml去离子水成为1*转膜液5、10*Tris-甘氨酸-SDS 电泳缓冲液（SDS-PAGE电泳缓冲液，pH约8.6）组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸，1%（W/V）SDS配制方法：称取30.29 g Tris，,144.13 g甘氨酸，5 g SDS，加入800 ml去离子水搅拌溶解，定容至1 L，常温保存。

核酸、蛋白技术参数资料、分子量标准及常用试剂的配制•一、核酸及蛋白质常用数据1．核苷三磷酸的物理常数2．常用核酸的长度与分子量3．常用核酸蛋白换算数据〔1〕重量换算1μg=10-6g 1pg=10-12g 1ng=10-9g 1fg=10-15g 〔2〕分光光度换算：1A260双链DNA=50μg/ml 1A260单链DNA=30μg/ml 1A260单链RNA=40μg/ml 〔3〕DNA摩尔换算：1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端1μg pBR322 DNA=0.36pmol 1pmol 1000bp DNA=0.66μg 1pmol pBR322=2.8μg 1kb双链DNA〔钠盐〕=6.6×105道尔顿1kb 单链DNA〔钠盐〕=3.3×105道尔顿1kb单链RNA〔钠盐〕=3.4×105道尔顿〔4〕蛋白摩尔换算：100pmol分子量100，000蛋白质=10μg 100pmol分子量50，000蛋白质=5μg 100pmol分子量10，000蛋白质=1μg 氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿〔5〕蛋白质/DNA换算：1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质10，000MW蛋白质=270bp DNA 30，000MW蛋白质=810bp DNA 50，000MW蛋白质=1.35kb 100，000MW蛋白质=2.7kb DNA4．常用蛋白质分子量标准参照物5．常用DNA分子量标准参照物a：以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22μm滤器过滤除菌。

以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。

所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。

b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基〔如LB培养基〕。

五、常用贮存液的配制1．30%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。

分子实验常用溶液配制一. 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml 水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g 的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

分子生物学实验常用实验试剂配制（一）溶液I（TEG缓冲液）：使用浓度为（25mmol/L Tris-HCl, 10mmol/L EDTA, 50mmol/L葡萄糖，pH8.0）。

1、先称取0.3g Tris加入0.1mol/L HCl溶液14.6mL，配制成pH8.0 Tris-HCl 缓冲液100mL；（1mol/L HCl溶液：即取8.6毫升36%的盐酸加水、搅拌、定容至100毫升即可；或37% 的HCL相当于约12mol/L，即稀释12倍）2、再加入0.37g EDTA·Na2·2H2O和[0.99g（Glucose.H2O，分子量198.17）或0.9g Glucose，分子量180.1572]葡萄糖，灭菌后4℃保存备用。

（二）溶液II （碱裂解液）：使用浓度为（0.2 mmol/L NaOH, 1% SDS）。

配制母液：0.4M NaOH 称1.6g NaOH 定溶于100 mL蒸馏水；2% SDS 称2 g定溶于100 mL蒸馏水。

常温保存，使用时等体积混合。

（三）溶液III（乙酸钾溶液）：使用浓度（pH8.0, [K +]=3mol/L, [Ac -]=5mol/L）。

1、先配制60mL 5 mol/L KAc；称g KAc 定容至60 mL。

2、再加入11.5mL冰乙酸和28.5mL蒸馏水。

4℃保存备用。

（四）LB培养基配制：LB（液体）：称取0.5g 氯化钠，0.5g腋蛋白胨，0.25g酵母提取粉，加水50ml。

LB（固体）：称取0.5g 氯化钠，0.5g腋蛋白胨，0.25g酵母提取粉，0.75g琼脂粉，加水50ml。

（五）琼脂糖凝胶：琼脂糖凝胶的配制是分子实验室比较基本的操作，大体流程如下：称量、熔胶、倒胶、拔梳。

1.称量：我们通常所说的0.8%、1%的胶都是指的质量体积分数，即所称取的琼脂糖粉的质量（g）比所加的TBE缓冲液的体积（mL）即胶的浓度。

缓冲液的体积根据胶板的大小而定。

1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)□配制量1L□配制方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl7.4 约70mL7.6 约60mL8.0 约42mL4. 将溶解定容至1L。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl(pH8.8)□配制量1L□配制方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1L。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA(pH 7.4,7.6,8.0)□配制量1L□配制方法1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。

1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL500 mM EDTA(pH8.0)20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。

3. 将溶液定至1L后,高温高压灭菌。

4. 室温保存。

4、3 M醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠(pH5.2)□配制量100mL□配制方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL 的去离子水搅拌溶解。

2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。

4. 高温高压灭菌后,室温保存。

1DEPC水(1‰) 1000ml 水1ml DEPC根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。

配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。

20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris1000ml DEPC水用HCL调ph至7.5，高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0)40g PFA1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。

30.2% 甘油/0.1M tris20ml 甘油980ml 0.1Mtris4 20XSSC Nacl 175.3g（ph 7.0）柠檬酸钠88.2gDEPC水1000ml分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用5 HEPES 溶液HEPES 23.8g(ph6.8-8.0)DEPC H2O 100ml6 50X Denhaldt′s 液聚蔗糖（Ficoll 400）0.2g聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g牛血清蛋白（BSA）0.2gDEPC 水20ml7 预杂交bufferDeinoized formanmid 5ml20X SSC 1.5ml1M HEPES 0.5ml50X Denhanldt′s液1ml龟精DNA 0.6ml(4ug/ul)DEPC水 1.4ml龟精要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。

杂交buffer分装后-20℃保存。

8Washing buffer(ph7.5) maleic acid 5.8gNACL 4.4gTween（吐温） 1.5ml定容至溶质浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween9Maleic acid buffer(ph7.5) Maleic acid 5.8gNacl 4.4g定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl10Detection buffer(ph 9.5)0.1M Tris-Hcl 7.9g (9.0g)0.1M Nacl 2.9g定容至500ml.使溶质的终浓度为0.1M Tris-Hcl ,0.1M nacl.11blocking reagent（封闭液）(2-8℃保存)(bottle 5) 5gmaleic acid buffer 50ml12blocking solution封闭液（新鲜配制）1mlMaleic acid buffer 10ml13抗体（AP）10000rpm离心5min，吸上清，1：5000稀释，考虑先稀释100倍，用时再稀释。