第十九章临床常见标本的细菌学检验

鉴定：葡萄糖、麦芽 糖发酵阳性
药敏：CLSI标准
脑膜炎奈瑟菌菌落
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（2）特殊细菌培养与鉴定
血液 骨髓
♦草绿色链球菌
胰酶解酪蛋白 大豆肉汤培养瓶
血琼脂平板 （35℃, 5％～10％C02、
需氧和厌氧环境）
鉴定 药敏试验
7天培养无细菌生长，培养至第4周，仍无细菌生长则报告“经4周 培养无草绿色链球菌生长”
验、结果评价及建议 ♦ 阴性报告：48小时无细菌生长者，报告“48小时培养
无细菌生长”
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（三）临床意义
♦ 尿液中细菌数少于104cfu／ml或104～105cfu/ml之间， 反复多次查出同一细菌时，一般也认为是病原菌。 ♦ 同份尿液中检出三种或以上不同微生物，应认为标本采 集或处理不当被污染。 ♦ 尿液细菌学检查结果，应结合临床考虑综合
4.结果报告 采取分级和限时报告制度 ♦初报告：将镜检结果电话通知主管医生 ♦预报告：6～8小时内报告直接药物敏感结果 ♦最终报告：报告细菌种属、药敏试验、结果评价及建 议 ♦阴性报告
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（三）临床意义
♦排除杂菌污染，从血液和骨髓标本中检出任何细菌都具 有临床意义 ♦葡萄球菌是血液感染最常见的细菌 ♦草绿色链球菌是亚急性心内膜炎的主要致病菌 ♦尿路、胆道、胃肠道炎症粘膜损伤引起的败血症以大肠 埃希菌多见 ♦产单核李斯特菌主要引起新生儿败血症
第二节 临床常见标本的细菌学检验
四、粪便标本的细菌学检验
（一）标本的采集 1.自然排便法 ♦ 脓血、黏液粪便2～3克 2.直肠拭子法 ♦ 成人4～5厘米 ♦ 幼儿2～3厘米 3.标本的运送和保存 ♦ 卡-布（Cary-Blair）运送培养基
直肠肛拭子
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
草绿色链球菌 草绿色链球菌菌落
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦伤寒沙门菌及其他沙门菌
血液 骨髓
葡萄糖胆汁 或胆盐肉汤
MAC、SS 35℃培养
鉴定;KIA、生化反应、 血清学试验等 药敏试验
♦布鲁菌
血液 骨髓
肝浸液肉汤
肝浸液平板或血平板
（35℃, 5％～10％C02 ）
涂片、生化鉴定 血清学试验
培养4周无细菌生长，报告“经4周培养无细菌生长”
（2）尿液细菌计数 ♦ 计算：cfu/ml=菌落数×稀释倍数
或cfu/ml= 菌落数
接种尿量（ml）
菌落数 接种尿量（ml）
♦ 意义
革兰阳性球菌大于104cfu/ml,革兰阴性杆菌大于 105cfu/ml，应考虑为泌尿系统感染
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（3）分离培养与鉴定 ♦ 普通细菌培养：沉淀物→血平板和麦康凯平板
♦颜色、是否粘稠、是否浑浊、是否脓性、是否带血等 性状
第一节 概述
2.涂片检查 ♦不染色标本检查 ：检查细菌的动力 ♦染色标本检查
革兰染色
抗酸染色
墨汁染色
第一节 概述
3.细菌的分离培养 ♦目的：得到单个纯菌落 ♦甄别污染菌方法 ①观察菌落是否在划线上 ②观察菌落是否与直接涂片染色结果相符 ③观察菌落是否符合拟培养细菌的生长特点 ④注意培养时间
第一节 概述
一、临床标本的采集、送检与处理原则
（一）临床标本的采集 1.核对检验单信息 ♦ 信息完整、无误 2.选择适当的容器
第一节 概述
3.早期采集 ♦ 使用抗菌药物前
4.无菌采集 ♦ 严格无菌操作技术
第一节 概述
5.选择采集部位和方法
第一节 概述
6.充足的标本量 ♦ 足量、适量
7.标记标本 8.归放标本
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦厌氧菌
标本
牛心脑浸液 或肝浸液
血平板或巧克力平 板
35℃、厌氧培养
生化鉴定
♦真菌： 真菌增菌肉汤增菌→沙保弱培养基（25℃或37℃）→菌落
特征→生化鉴定、报告 ♦L型细菌
高渗液体培养基→血琼脂平板和L型细菌培养基→典型“ 油煎蛋”菌落→返祖、鉴定
第二节 临床常见标本的细菌学检验
第一节 概述
4.细菌的鉴定 ♦选择细菌检验鉴定方法的原则 ★选择有鉴定价值的试验：两种细菌出现不同的结果 ★选择快速、简易的试验：如触酶、氧化酶 ★综合考虑试验的敏感性和特异性
第一节 概述
5.细菌对抗菌药物敏感性试验 ♦纸片扩散法 ♦肉汤稀释法 ♦自动化仪器法 ♦E-test法等。
第一节 概述
3份（1～2小时） 2份
2～3份
2份
6.标本的运送和保存 立即送检，室温保存，切勿冷藏
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2. 检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）普通细菌的培养与鉴定
♦增菌培养：培养阳性指证及疑似菌列表
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2.检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）涂片检查 ♦ 霍乱弧菌检查： ①动力检查：动力及制动试验 ②染色镜检：革兰染色，发现鱼群状排列的革兰阴性弧菌， 可做出初步报告 ♦ 酵母样菌检查
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（1）涂片检查 ♦葡萄球菌、艰难梭菌、弯曲菌检查
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.采集方法 ♦严格无菌操作
4.采血量
♦比例：1:10 ♦成人8～10ml/瓶 ♦儿童1～5ml/瓶 ♦婴儿1～2ml/瓶 ♦骨髓1～2ml/瓶
第二节 临床常见标本的细菌学检验
5.采血时间和頻度
疾病
24小时内
24小时后
菌血症、败血症 细菌性心内膜炎 不明原因发热
2～3份
可疑菌落→形态、镜检及生化反应等鉴定。 ♦厌氧菌
标本→血平板、厌氧血琼脂平板和硫乙醇酸钠肉汤 →35℃需氧、厌氧培养→可疑菌落→染色镜检及生化鉴 定、药敏试验
第二节 临床常见标本的细菌学检验
4.结果报告 ♦初报告：报告标本直接涂片结果 ♦预报告：报告标本直接药敏试验结果 ♦最终报告：报告细菌种属、药敏试验、结果评价及建 议 ♦阴性报告
即接种
第一节 概述
二、培养基及培养方法的选择 1.培养基 选择恰当的培养基或组合
第一节 概述
2.常用培养方法 ♦需氧培养、二氧化碳培养和厌氧培养
电热恒温培养箱
二氧化碳培养箱
厌氧培养箱
第一节 概述
三、细菌学检验的基本流程
（一）细菌学检验的基本程序
第一节 概述
（二）细菌学检验鉴定步骤 1.标本性状观察
♦ 符合生物安全防护要求
第一节 概述
（二）临床标本的保存和送检 ♦ 立即送检，否则应放入运送培养基或保存液中运送
1.普通细菌培养标本 ♦室温：1小时，4℃：24小时，运送培养基：48小时
2.苛养菌培养标本 ♦保温、保湿送检，“床头接种”
第一节 概述
3.厌氧菌培养标本 ♦防干燥，避免接触空气。
4.安全运送 ♦注意安全防护 ♦高致病性传染病标本，按生物安全有关规定包装， 由专人运送
3.检验方法 （1）涂片检查
♦普通细菌检查：取沉淀涂片、染色、镜检 ♦淋病奈瑟菌检查
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦念珠菌检查 ♦结核分枝杆菌检查：应与耻垢分枝杆菌相鉴别 ♦钩端螺旋体检查：暗视野显微镜下，发现一串细密亮珠、两 端呈钩状且沿纵轴旋转运动的螺旋体时，报告找到螺旋体
第二节 临床常见标本的细菌学检验
→35℃培养→菌落观察→染色镜检、生化反应、抗菌药物 敏感试验
♦ 淋病奈瑟菌培养：标本→TM或MTM平板→ 35℃、 5 ％～10％CO2环境→疑似菌落→涂片镜检、生化反应鉴定
淋球菌菌落
第二节 临床常见标本的细菌学检验
4.结果报告 ♦ 初级报告：标本涂片染色镜检结果，如“找到革兰阴
性双球菌，存在于细胞内（外），形似淋病奈瑟菌” ♦ 最终报告：报告细菌种属、菌落计数、药物敏感性试
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（三）临床意义 ♦脑膜炎奈瑟菌引起细菌性脑膜炎 ♦结核分枝杆菌引起的结核性脑膜炎 ♦真菌性脑膜炎最常见的病原体是新型隐球菌，白假丝酵 母菌、球孢子菌好发于免疫功能低下和恶性疾病患者
第二节 临床常见标本的细菌学检验
三、尿液（泌尿生殖道）标本的细菌学检验
（一）标本的采集
第二节 临床常见标本的细菌学检验
互动讨论 草绿色链球菌属人体正
常菌群，试分析从血液和痰 液标本中分离出草绿色链球 菌各有何临床意义？
第二节 临床常见标本的细菌学检验
二、脑脊液标本的细菌学检验 （一）标本的采集
1.采集部位 ♦腰椎穿刺法 2.采集量 ♦3～5ml 3.标本的运送和保存 ♦15分钟内送检，最迟不能超过1小时。疑似苛养菌感染时，
应保温送检
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2.检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）涂片检查
♦革兰染色
肺炎链球菌
脑膜炎奈瑟菌
流感嗜血杆菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦抗酸染色
♦墨汁负染色
结核杆菌
新型隐球菌
♦阳性培养瓶处理
阳性培养瓶
涂片染色镜检 直接药敏试验
报告 报告
分离培养
细菌鉴定 药敏试验
报告
♦阴性培养瓶处理 于12～18小时、第3天和第7天至少 做3次盲传，7天无细菌生长报告阴性
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（2）特殊细菌培养与鉴定
♦脑膜炎奈瑟菌
血液 骨髓
胰胨肉汤或 专业培养瓶
巧克力培养基
（35℃, 5％～10％C02）
国家卫生和计划生育委员会规划教材
微生物学检验
《微生物学检验》
国家卫生和计划生育委员会规划教材
《微生物学检验》
第十九章 临床常见标本的细菌学检验
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本章内容
1 第一节 概述 2Hale Waihona Puke Baidu第二节 临床常见标本的细菌学检验
学习目标及重点
学习目标： 掌握临床常见标本的采集、送检和处理的原则 临床常见标本细菌学检验程序、检验方法及结果报告 熟悉TAT、危急值在临床实际工作中的应用 临床标本常见病原菌的检验方法及鉴定要点 了解临床标本细菌学检验的临床意义 临床标本中正常菌群的分布及常见致病菌 本章重点： ★病毒标本采集和运送原则 ★病毒学诊断及鉴定常用方法 ★病毒培养的基本操作
1.中段尿采集法 2.导尿法 3.膀胱穿刺采集法 4.集尿法 5.标本的运送和保存
♦立即送检、及时接种 ♦室温不超过2小时，4℃不超过8小时 ♦淋病奈瑟菌感染尿液标本不能冷藏
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2.检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
葡萄球菌
艰难梭菌
弯曲菌
♦粪便中优势菌检查：推定主要优势菌并及时报告结果
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（2）分离培养与鉴定
♦ 沙门菌及志贺菌培养 粪便或直肠拭子→SS平板、麦康凯平板、GN增菌液→35℃、 需氧培养→可疑菌落→生化试验、血清学反应鉴定
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（2）分离培养与鉴定 ♦普通细菌
标本→血琼脂平板和巧克力平板（35℃，CO2环境）→ 可疑菌落→形态、生化试验及血清学试验、药敏试验 ♦结核分枝杆菌
标本→罗-琴培养基或米氏7H-10培养基→35℃温箱孵 育→可疑菌落→鉴定
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦真菌 标本→血平板或沙保弱培养基→25℃及37℃孵育→
四、细菌学检验报告原则
♦标本周转时间（TAT）：从标本采集起到临床医生收到检验 结果的时间 ♦危急值：指危及到患者生命健康安全的检验结果
检验报告原则 ♦初报告 ♦预报告 ♦最终报告 ♦报告抗菌药物敏感性试验结果
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
一、血液及骨髓标本的细菌学 检验
（一）标本的采集 1.皮肤消毒 ♦严格执行三步法 2.采血部位： ♦肘静脉 ♦肘动脉或股动脉采血 ♦婴幼儿采颈静脉血
第一节 概述
（三）临床标本的处理
♦核对标本与申请单信息 常见标本处理方式 • 组织：无菌粉碎研磨后，加生理盐水制成悬液，接种 • 体液：3000r/mim离心10分钟后，接种。 • 棉拭子：置运送培养基送检，避免污染。 • 粪便：挑取带脓、血及黏液部分接种。 • 痰液：检查标本是否有血液、脓液、颗粒、干酪样物等 • 血液：采集后立即增菌培养 • 厌氧菌培养：检查标本、运送方式是否适合厌氧培养，立
培养基性状改变 均匀混浊，指示剂变色 微混浊，有绿色变化 有菌膜，均匀混浊有绿色荧光 上层澄清，下层有沉淀 细胞层自上而下的溶血 混浊、有胶冻状凝固现象 灰白色菌膜、培养基清晰
疑似病原菌 革兰阴性杆菌 肺炎链球菌 铜绿假单胞菌 链球菌 溶血性链球菌 葡萄球菌 枯草芽孢杆菌或类白喉棒状杆菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验