第十九章临床常见标本的细菌学检验
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临床标本的细菌学检验临床标本的细菌学检验,从各种标本中查找病原菌及其对抗生素的敏感性,在明确诊断、指导用药、预防和流行病学调查等方面具有重要意义。
对各种标本,应根据实际要求和标本特点选择适当的检验步骤及方法,准确、快速地检测病原菌,分析检验结果并报告,同时应注意低耗和安全防护。
分离细菌的目的是查找与疾病相关的病原体及其对抗生素的敏感性,对临床诊断、治疗、预后和流行病学调查很有价值。
1临床标本的采集与送检临床标本的质量对于细菌学检验的结果至关重要,严格按操作规程的要求进行标本采集、运送、保存和处理,才能保证检验结果准确、可靠。
1.1临床标本的采集1.1.1细菌学检验申请单的检查与登记:应仔细检查检验申请单上的内容,如标本类型、来源、送检目的、患者姓名、性别、年龄、临床诊断(如未明确,应注明主要症状)及是否已用抗生素等,并及时登记。
1.1.2标本盛放容器:采集的标本,尤其是采自无正常菌群寄居部位的标本如血液、脑脊液、穿刺液等,必须盛放于无菌容器内[1]。
容器灭菌应采用干热、湿热等物理方法灭菌。
容器上应贴上标签,注明待检患者姓名、床号等信息。
1.1.3无菌操作:在采集血液、脑脊液、穿刺液、骨髓时,应严格进行无菌操作,避免杂菌污染标本。
采集粪便、痰液、咽拭子、肛拭子等标本,虽无需严格无菌操作,但也应尽量避免杂菌污染。
1.1.4采集时间和部位:选择合适的采集时间是很重要的,一般情况下,标本应尽量在疾病早期或在症状、体征明显时,在抗生素治疗之前采集,一些特殊检验的标本应按规定的时间采集。
根据感染的具体情况,选择适当的部位采集标本。
1.1.5安全防护:采集的标本可能含有病原菌,因而采集、运送、保存和处理过程中必须注意安全,防止标本中的病原菌溢出导致污染甚至传播;同时还需防止自身感染。
1.2标本的送检与保存采集标本后,在盛装标本的容器上应贴好标签,并在标签上写明相关信息,立即将标本送至检验室。
标本收集时间应加以准确记录,使检验人员接种时能判断标本是否延误。
痰标本临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道,上呼吸道定植有大量的正常菌群,而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道,通常无菌或仅有少量细菌侵入。
在呼吸道标本细菌学检验中,上呼吸道标本(咽拭子)由于有正常菌群的存在,不易判断出何为与疾病有关的细菌,进行普通培养无特别意义《插入表上呼吸道存在的正常菌群》。
下呼吸道感染是最常见的呼吸道感染症,临床常取痰液标本进行细菌学检验,以明确感染病原及其药敏结果,有助于疾病治疗、流行病学调查和医院感染的监测。
痰标本须经上呼吸道排出,常受该处正常菌群的污染,因此,判断下呼吸道分泌物中是否有病原菌存在,须对上呼吸道的正常菌群有所了解。
上呼吸道的正常菌群有α、γ链球菌、微球菌、拟杆菌、梭杆菌、厌氧球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟菌、嗜血杆菌、棒状杆菌。
标本的验收遇有不合格标本,应及时与临床联系,报告不合格标本拒收的具体理由。
拒收标准:a.肉眼观察痰标本呈水样或唾液样。
b.标本涂片白细胞数<10/低倍镜和鳞状上皮细胞数>25/低倍镜,表示该标本已污染正常菌群,建议重送标本。
c.容器错误标本容器必须符合规定,溢漏、无盖者拒收。
分离培养1.痰标本培养前处理(均质化)2.分离培养(1)一般细菌培养应同时划区接种(痰半定量原则)痰半定量方法:用接种坏将痰液在血平板和巧克力平板上作三区划线接种标本,进行培养。
痰半定量培养的临床意义三区划线法:首先用无菌棉签挑取痰液的脓或血性部分(或将接种坏通过火焰灭菌,冷却后挑取标本少许,尽量取有脓或血部分)然后将其涂布在平板第一区,并作数次划线,再在二、三区依次用接种环划线,每划一个区域,应将接种环烧灼一次,待冷却后再划下一区域。
1)血平板(5%CO2环境)适用于分离肺炎链球菌和其他细菌。
2)巧克力平板(5%CO2环境)适用于分离嗜血杆菌。
3)麦康凯/中国蓝平板(需氧环境)适用于分离革兰阴性杆菌。
(2)分离培养血平板和巧克力平板置5%CO2环境,麦康凯平板/中国兰平板置普通孵箱,35℃孵育。