HIV实验室检测及规范操作课件

►HIV抗体筛查试剂 ▪酶联免疫：初筛实验室的常用基本试剂。 ▪明胶颗粒凝集 ▪其它快速诊断试剂：在尚未建立艾滋病筛
查实验室的偏远地区由经过培训的技术人员 在规定的场所使用。 ►HIV抗体确认试剂
▪免疫印迹试剂
快速检测试剂的优缺点
硒标记法和金标记法 与ELISA相比 ►优点 所需时间短 操作简便，不需特殊设备。 试剂贮存于室温。 ►缺点 特异性和敏感性与ELISA有差距。 费用较高。
►病程监控：帮助确定Leabharlann Baidu病发展的阶段。
►指导治疗方案及疗效测定
►预测疾病进程
国家对HIV抗体检测试剂的要求
◆初筛试剂
筛查试剂必须是HIV1+2混合型的、经国 家食品药品监督管理局注册批准、批批检合 格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。
◆确认试剂
必须经国家食品药品监督管理局注册批准。
我国常用的HIV抗体检测试剂
3、筛查试验的流程图
样品
原有试剂加 另一种筛查试剂
筛查检测 阳性反应 重复检测
均阳性反应
一阴一阳
送确认实验室 进行确认
筛查试剂 阴性反应
均阴性反应 阴性报告
HIV抗体筛查结果的报告和处理
►筛查试验呈阴性反应，出具HIV抗体阴性报告 （提示应考虑窗口期的可能）。
►筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV待复查”报 告，不能出阳性报告。同时尽快进行以下处理：
艾滋病检测方法的意义
HIV核酸检测
►辅助诊断：在特殊情况下，如出现某些非典型的抗 体反应，特别是不确定反应时，RNA的测定可提供有用 的证据。
►感染早期：在HIV感染的窗口期，无法使用抗体检测 进行诊断，此时RNA的测定具有特殊的意义，提示是否 有感染的可能，但仍需追踪检测HIV抗体，最终根据抗 体的检测情况做出诊断。
酶球（酶标记抗原） 抗体
HIV抗体初筛检测 ELISA夹心法
原理
将HIV抗原包被到固相载体上，标本中的HIV抗体 与包被的HIV抗原结合形成复合物，利用抗体的多 价性，又与酶（HRP）标记的同类HIV抗原也即酶 标板内的球状复合物，形成一个HIV抗原抗体酶标 记的HIV抗原复合物，最后加入底物，避光30分钟， 在酶作用下，产生显色反应，加2N硫酸终止后呈 黄色，在450/620nm双波长下测定光密度值，与 标准进行比较，以判定标本 的结果。
(4)以前接种过HIV疫苗。
HIV抗体初筛检测结果解释
如何判断婴儿是否感染了HIV？
通过胎盘，感染了HIV的母亲所生的婴儿可 能带有来自母体的HIV抗体，此时HIV抗体检 测阳性并不意味着已被感染。 ►建议在婴儿9个月时进行HIV初筛检测 如阴性，则判定为未感染HIV。 如阳性，则应在婴儿18个月时进行复检
HIV抗体初筛检测结果解释
造成检测结果不确定的原因
(1)处于窗口期,血清中还没有形成典型的HIV抗 体。
(2)艾滋病进展到终末期,人体免疫力缺陷,抗体 水平下降。
(3)与其他非病毒蛋白抗体有交叉反应.自身免疫 性疾病、恶性肿瘤、怀孕、输血或器官移殖 等，此时，身体产生的一些抗体与Ｐ２４核 心蛋白抗体相似。
阴性：判定为未感染。 阳性：则将血样送至省CDC确认中心进 行 HIV抗体的确认试验。
HIV抗体初筛检测
酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA） ELISA法中有间接法、夹心法和竞争 法。目前使用最多的是夹心法。
HIV抗体初筛检测（ELISA实验原理）
▪ 填写HIV阳性标本送检单，并随标本送至
当地筛查中心实验室，或直接送确认实验室。
▪ 筛查中心实验室应尽快用两种试剂进行复
测，如结果均阳性或一阴一阳，则应将该标本 和送检单一并送至省艾滋病确认实验室确认。
▪阳性标本必须送省确认中心，筛查实验室不 能随意处理。
▪ 做好检测后的咨询
结果的解释 问题: HIV抗体检测结果阴性是否表明未感染? 对不确定结果如何解释? 怎么样知道婴儿是否感染了HIV?
HIV抗体初筛检测结果解释
什么是不确定结果？
HIV抗体确认试验时,试验条带上出现的蛋白带型 不足以判断为HIV抗体阳性,应建议其3个月后复查. ►如果复查结果阳转,表明受检者已感染HIV; ►如复查时条带全部消失,则为阴性结果; ►如复查时条带没有变化或有变化但仍不足以判断 为阳性,则应建议其3个月后再复查一次,如还不能 判断为阳性结果,则应作为阴性对待.
HIV抗体检测程序及流程图
1、筛查试验 标本验收合格后，用筛查试剂进行检测，如 呈阴性反应，报告为HIV抗体阴性；对呈阳性 反应的标本须进行重复检测。
2、重复检测 用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家 的试剂重复检测，如两种试剂复测均呈阴性 反应，则报告HIV抗体阴性；如均呈阳性反应， 或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确 认。
酶联免疫吸附试验 ▪间接法 ▪直接法（双抗原夹心法） ▪抗体竞争法 明胶颗粒凝集试验（PA） 快速法
HIV/AIDS的筛查，但初筛阳性结果不能做为艾滋 病诊断依据，需将该标本送地区筛查中心实验室用两 种方法进行复核，仍为阳性或一阴一阳则须送省确认 中心。
艾滋病检测方法的意义
HIV抗体确认检测（免疫印迹试验） HIV/AIDS诊断的唯一依据,省CDC确认实验室负责全省 监测哨点以及常规检测中阳性及可疑标本的确认和省内 HIV初筛实验室的质量管理.另外,省检疫系统有一个确认 实验室,设在省检疫局保健中心.
HIV抗体初筛检测结果解释
阴性 (1)未感染HIV (2)可能感染了HIV,但处于窗口期,或HIV-1/2抗
体和HIV-1O亚型抗体低于检测下限。 (3)疾病晚期,免疫功能缺损,抗体可能呈阴性. 确认阳性
感染了HIV,样品含有HIV-1/2抗体和 HIV-1O亚型抗体(未满18个月的婴儿除外). 不确定:建议追踪检测.
HIV实验室检测及规范操作
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艾滋病检测的方法
HIV抗体检测
HIV抗体初筛检测 HIV抗体确认检测（免疫印迹试验）
HIV核酸检测
▪核酸序列依赖性扩增（NASBA） ▪HIV定量逆转录PCR系统（RT－PCR） ▪HIVRNA定量检测的分支测定法（bDNA)
艾滋病检测方法的意义
HIV抗体检测