Wip1过表达转基因小鼠模型的制备与鉴定

Ｅｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｍｅ ｎｔ ａ ｎ ｄ Ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｗｉ ｐｌ Ｏｖ ｅ ｒ — ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ Ｔｒ ａ ｎｓ ｇ ｅ ｎ ｅ Ｍｉ ｃ ｅ Ｍｏ ｄ ｅ ｌ ＧＡＯ Ｑｉ ａ ｎ， ＨＵ Ｙａ ｎ － ｑ ｉ ｎ ｇ， Ｔ ＡＮＧ Ｙｉ － ｔ ｉ ｎ ｇ， ＭＵ Ｙｕ － ｌ ｉ ａ ｎ
Ａｂｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｔｈ ｉ ｓ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｗａ ｓ ａ ｉ ｍｅ ｄ ｔ ｏ ｂｕ ｉ ｌ ｄ Ｗｉ ｐ ｌ ｏ ｖ ｅ ｒ — ｅ ｘ ｐｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ｔ ｒ ａ ｎｓ ｇｅ ｎ ｅ ｍｉ ｃ ｅ，ｗｈｉ ｃ ｈ ｃ ｏｕ ｌ ｄ ｐ ｒ ｏ— ｖ ｉ ｄｅ ａ ｎ ａ ｎｉ ｍａ ｌ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｆ ｏ ｒ ｃ ｌ ａ ｒ ｉ ｆ ｙ ｉ ｎｇ ｔ ｈｅ ｐ ａ ｔ ｈｏ ｇ ｅ ｎｅ ｔ ｉ ｃ ｍｅ ｃ ｈａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｏｆ ａ ｔ ｈｅ ｒ ｏｓ ｃ ｌ ｅ ｒ ｏｓ ｉ ｓ，ａ ｎ ｄ ｔ ｈｅ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ — ｇｅ ｎｅ ｍｉ ｃ ｅ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｅ ｄ ａ ｔ ＲＮＡ ｌ ｅ ｖ ｅ １ ．Ｍ ｉ ｃ ｅ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｓ ｃ ＤＮＡ ｗｅ ｒ ｅ ｏ ｂ ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ｂ ｙ ｒ ｅ ｖｅ ｒ ｓ ｅ ｔ ｒ ａ ｎｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ ｉ ｏ ｎ
（ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ａ ｎ ｉ ｍａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ａｃ ａ ｄ ｅ ｍｙ ｏ ｆ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ， Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ １ ９ ３ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
中国畜牧兽医
Biblioteka Baidu
２ ０ １ ６ ， ４ ３ （ １ ２ ） ： ３ ０ ９ ４ — ３ １ ０ ０
Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ａｎ ｉ ｍａ ｌ Ｈｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｒ ｙ ＆ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
ｄ ｏ ｉ －ｌ ｏ ． １ ６ ４ ３ １ ／ ｊ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． １ ６ ７ １ — ７ ２ ３ ６ ． ２ ０ １ ６ ． １ ２ ． ０ ０ ２
ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ ｃ ｈ ａ ｉ ｎ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ（ ＲＴ— Ｐ ＣＲ），ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｗｅ ｒ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｎ ｅ ｘ ｔ ＰＣＲ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｍｐ ｌ ａ ｔ ｅ 。
动 脉 粥样 硬 化 的 发 生 机 制 提 供 一 种 动 物 模 型 。通 过 逆 转 录 聚 合 酶 链 式 反 应 （ Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ） 获 得 小 鼠组 织 的 ｅ ＤＮ Ａ， 并 以其为模板进行 Ｐ Ｃ Ｒ扩增 ， 对 扩 增 片段 进 行 胶 回 收 ， 然后进 行扩增 片段 和空载体 的双酶 切 ， 将 酶 切 后 胶 回 收 得 到
Ｔｈｅ ａ ｍｐｌ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ｆ ｒ ａ ｇ ｍｅ ｎ ｔ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｕｓ ｅ ｄ ｆ ｏｒ ｇ ｅ ｌ ｒ ｅ ｃ ｏｖ ｅ ｒ ｙ ． Ｔｈｅ ｎ，ｔ ｈｅ ａ ｍｐｌ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ｆ ｒ ａ ｇ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ ｅ ｍｐ ｔ ｙ ｖｅ ｃ — ｔ ｏ ｒ ｗｅ ｒ ｅ ｄ ｏｕ ｂｌ ｅ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｄｉ ｇ ｅ ｓ ｔ ｅ ｄ ． Ｆｕ ｌ ｌ — ｌ ｅ ｎ ｇｔ ｈ ｇ ｅ ｎｅ ｏ ｆ Ｗｉ ｐ ｌ， ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｗａ ｓ ｏ ｂｔ ａ ｉ ｎｅ ｄ ｂｙ ｇ ｅ ｌ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖｅ ｒ ｙ，
的 ｗ 声 １ 基 因全长与载体 ｐ ｃ Ｄ ＮＡ３ ． １ （ ＋） 进行连 接 ， 获得 Ｗｉ ｐ ｌ — ｐ ｅ Ｄ ＮＡ３ ． １ （ ＋） 过表达载体 ， 最 终 得 到 Ｗｉ ｐ ｌ过 表 达
转 基 因原 代 小 鼠 ， 并利 用 Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ ｔ ｉ ｎ ｇ方 法 和 实 时 荧 光 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ方 法 对 小 鼠进 行 鉴 定 筛 选 。试 验 获 得 Ｗ ｉ ｐ ｌ
Ｗｉ ｐ ｌ过表 达转 基 因小 鼠模 型 的 制备 与鉴 定
高 倩 ， 胡言青 ， 唐 懿挺 ， 牟 玉 莲
（ 中 国农 业 科 学 院北 京 畜 牧 兽 医研 究所 ， 北京 １ ０ ０ １ ９ ３ ）
摘 要： 本 研 究 旨在 构 建 Ｗｉ ｐ ｌ 过 表 达 转 基 因小 鼠 ， 并对 Ｗｉ ｐ ｌ 过 表 达 转 基 因 小 鼠进 行 Ｒ ＮＡ 水 平 上 的筛 选 ， 为 研 究
过 表 达 转 基 因原 代 小 鼠 ３ Ｏ只 ， 利用Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ ｔ ｉ ｎ ｇ 方 法 鉴定 出 阳 性 小 鼠 １ １ 只， 阳性 率 为 ３ ６ ． ６ ７ ， 实 时 荧 光 定 量
Ｐ Ｃ Ｒ 筛 选 Ｗｉ ｐ ｌ 过 表 达 转 基 因小 鼠 阳性 率 为 ３ ２ ． ８ ４ 。以 上 结 果 表 明 ， 试 验 成 功 构 建 了 Ｗｉ ｐ ｌ — ｐ ｃ Ｄ ＮＡ３ ． １ （ ＋） 过 表 达载体 ， 并 且 经 过 Ｗｉ ｐ１ 基 因在 小 鼠组 织 Ｄ ＮＡ 和 Ｒ ＮＡ 水 平 上 的鉴 定 筛 选 ， 成功获得 了 Ｗｉ ｐ ｌ 过 表 达转 基 因 小 鼠 。 关键词 ： Ｗｉ ｐ ｌ ； 过表达 ； 小 鼠 模 型 中 图分 类 号 ： Ｑ ７ ８ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：１ ６ ７ １ — ７ ２ ３ ６ （ ２ ０ １ ６ ） １ ２ － ３ ０ ９ ４ — ０ ７