Wip1过表达转基因小鼠模型的制备与鉴定

转基因小鼠制备方法一、引言转基因小鼠是指通过基因工程技术将外源基因导入小鼠基因组中，使其表达或缺乏特定基因，从而研究基因功能、疾病模型等方面的动物模型。

转基因小鼠制备方法是实现转基因小鼠研究的重要步骤之一，本文将详细介绍转基因小鼠制备的一般步骤和常用技术。

二、转基因小鼠制备的一般步骤1. 选择目标基因和载体转基因小鼠制备的第一步是选择目标基因和适当的载体。

目标基因可以是外源基因、特定基因的突变体或基因敲除。

载体通常是带有选择标记（如抗生素抗性基因）和目标基因的质粒。

2. DNA构建在DNA构建过程中，首先需要将目标基因和选择标记基因插入到载体的适当位点上。

这可以通过限制性内切酶切割和连接、PCR扩增等方法实现。

构建完成后，需要进行酶切鉴定和测序确认。

3. 体外培养胚胎干细胞（ES细胞）转基因小鼠制备中常用的方法是利用ES细胞技术。

首先，从小鼠胚胎中获得内源性干细胞（ES细胞），并进行体外培养。

然后，将构建好的转基因载体导入ES细胞中，通过抗生素筛选获得带有目标基因的转基因ES细胞克隆。

4. 转基因小鼠制备转基因ES细胞的制备完成后，可以进行转基因小鼠的制备。

这一步骤通常有两种方法：内源性重组和外源性重组。

内源性重组是将转基因ES细胞注射到小鼠早期胚胎中，使其整合到小鼠的生殖细胞中，从而获得转基因小鼠。

外源性重组是将转基因ES细胞直接注射到小鼠的细胞团中，形成转基因胚胎，再将转基因胚胎移植到雌性小鼠子宫中，使其发育成为转基因小鼠。

5. 转基因小鼠鉴定转基因小鼠制备完成后，需要对其进行鉴定。

通常采用PCR、Southern blotting、Western blotting等分子生物学方法，检测转基因小鼠是否成功表达目标基因。

三、常用技术1. CRISPR/Cas9技术CRISPR/Cas9是一种新兴的基因编辑技术，可以实现高效、精确地对基因组进行编辑。

通过CRISPR/Cas9技术，可以直接在小鼠胚胎中进行基因编辑，从而制备转基因小鼠。

一种过表达nlrp3的转基因小鼠模型及其构建方法和
应用
一种过表达Nlrp3的转基因小鼠模型及其构建方法和应用，涉及基因工程技术、动物模型构建及应用，特别涉及一种过表达Nlrp3的转基因小鼠模型及其构建方法和应用。

转基因小鼠模型构建方法，包括以下步骤：
1. 设计并合成包含目的基因Nlrp3的DNA序列的质粒载体；
2. 将合成的质粒载体注射到小鼠受精卵中；
3. 将注射了质粒载体的受精卵移植到代孕母鼠体内；
4. 代孕母鼠产下幼崽后，提取幼崽的基因组DNA进行PCR检测，筛选出
转基因小鼠。

通过上述方法，可以成功构建出过表达Nlrp3的转基因小鼠模型。

该模型可以用于研究Nlrp3基因在疾病发生和发展中的作用，为疾病治疗和药物研发提供有价值的实验动物模型。

同时，该模型还可以用于评估和筛选针对
Nlrp3基因的治疗方法和药物。

以上内容仅作参考，您可以通过相关资料进一步了解有关该技术的详细信息。

甘丙肽过表达转基因小鼠的制作和鉴定陈喜英;刘田福;郭永昌【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2014(045)007【摘要】目的建立甘丙肽(galanin,GAL)过表达转基因小鼠,为后续研究甘丙肽基因功能提供动物模型. 方法重组质粒PDGFβ-GAL经XbaⅠ、HindⅢ双酶切后,将连接有启动子的甘丙肽基因片段回收纯化,用显微注射法将甘丙肽基因注入400枚受精卵的雄原核中,选取发育正常的受精卵移植到假孕母鼠的输卵管壶腹部,待其产仔.用PCR方法鉴定子代小鼠基因型,蛋白印迹分析(Western blot)鉴定子代小鼠体内GAL蛋白表达情况. 结果获得子代小鼠50只,有8只小鼠在基因组上整合有GAL基因,整合率为16％:Western blot显示转入的基因片段PDGF β-GAL在脑组织中的表达水平比肝组织高.结论通过显微注射法成功建立了GAL过表达转基因小鼠模型.【总页数】4页(P584-587)【作者】陈喜英;刘田福;郭永昌【作者单位】山西医科大学实验动物中心,太原030001;山西医科大学实验动物中心,太原030001;山西医科大学实验动物中心,太原030001【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.稳定表达小鼠甘丙肽的N-2a细胞株的建立及内源性过表达甘丙肽对N-2a细胞增殖和凋亡的影响 [J], 荣曼;张锐虎;刘田福2.表达视网膜Müller细胞的转基因小鼠基因鉴定 [J], 姚晓倩; 方媛; 吴继红; 李倩; 牛亮亮; 孙兴怀; 陈君毅3.分泌卷曲相关蛋白4肝脏高表达转基因小鼠的制作及鉴定分析 [J], 关华;郑慧媛;刘恩岐;徐礼鲜;余琦4.活化大鼠肝星状细胞新表达甘丙肽2型受体拮抗甘丙肽增殖抑制作用 [J], 丁永年;李郑红;徐雷鸣;熊静平;陈源文;范建高5.shRNA表达质粒对转基因小鼠HBV的抑制作用 [J], 孔祥平;吴庆洲;尤玉琴;易学瑞;任向荣;陈阳述因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

转基因小鼠制备实验具体步骤及详细说明遗传的基本物质是DNA，基因是位于染色体上有遗传效应的DNA片段，对于储存在生物全套染色体中的全部遗传信息，可称其为基因组。

不同种类、不同个体的生物基因组成是不同的，对动物个体来说，非自身的基因成分属于外源基因，如果把外源基因整合或导入动物染色体基因中，这个外源基因就被称为转基因(transgene)(即转移来的基因)，这种动物就是转基因动物。

实验步骤1. 选取7~8周龄雌性小鼠，阴道口封闭，作为供体，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。

2. 47~48小时后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并与正常公鼠合笼；另取数只适龄母鼠（2月龄以上）作为受体，阴道口潮红，与结扎公鼠合笼。

3. 第二天上午9:00前观察供体、受体，有精栓者拿出备用。

受体笼拿出作好隔离措施。

4. 10:30左右，断颈处死供体，手术取出整个输卵管，放入透明质酸酶~0.3 mg/M2液中。

显微镜下，用镊子撕开输卵管壶腹部，受精卵随同颗粒细胞即一同流出。

5. 仔细观察放在透明质酸酶M2液中的受精卵，当受精卵周围的颗粒细胞脱离时，将受精卵吸出，放入M2液中洗涤，最后放在M16液中放入5%CO2，37℃培养箱培养。

6. 在显微镜下观察，挑选细胞饱满，透明带清晰，雄原核清晰可见的受精卵待用。

7. 安装持卵针和注射针，使其末端平行于载物台，在凹玻片的中央滴入一滴M2液，覆盖石蜡油，移入待注射的受精卵。

DNA在注射针中的气泡应在先前全部弹走。

8. 在高倍镜下，将注射针轻触持卵管，使DNA缓慢流出并控制其流量；反复吹吸受精卵，使其处于最佳位置，将注射针刺入受精卵的雄原核，直至看到原核膨大即退出。

将注射过的和未注射过的受精卵上下分开放置，不致于混搅，注射完毕后，放入5% CO2，37℃培养箱培养。

9. 将受体麻醉，注射计量为1%戊巴比妥钠0.01 ml/g，腹腔注射。

手术取出卵巢连接输卵管，用脂肪镊固定，在显微镜下找到输卵管开口。

《利用原核显微注射技术制备VEGF164转基因小鼠及其检测》篇一一、引言随着生物医学技术的飞速发展，转基因动物模型在生物学、医学和药理学等领域的应用越来越广泛。

其中，原核显微注射技术作为一种有效的基因编辑手段，被广泛应用于制备转基因小鼠模型。

本文旨在探讨利用原核显微注射技术制备VEGF164转基因小鼠及其检测方法，以期为相关研究提供参考。

二、材料与方法1. 材料（1）实验动物：选用适合实验的野生型小鼠。

（2）转基因载体：含有VEGF164基因的转基因载体。

（3）显微操作设备：显微操作仪、显微镜、显微注射针等。

2. 方法（1）构建转基因载体：将VEGF164基因插入到合适的载体中，构建转基因载体。

（2）显微注射：将转基因载体显微注射到小鼠原核中。

（3）筛选阳性小鼠：通过PCR、 Southern blot等技术检测小鼠基因组中VEGF164基因的插入情况。

（4）繁殖及传代：将阳性小鼠进行繁殖，传代后得到稳定的VEGF164转基因小鼠。

（5）检测VEGF164表达：通过免疫组化、Western blot等技术检测转基因小鼠中VEGF164的表达情况。

三、实验结果1. 转基因小鼠制备成功：通过原核显微注射技术，成功将VEGF164基因导入小鼠原核中，筛选出阳性小鼠。

2. 阳性小鼠基因检测：通过PCR和Southern blot等技术检测，证实了VEGF164基因成功插入到小鼠基因组中。

3. 稳定传代：将阳性小鼠进行繁殖传代，得到了稳定的VEGF164转基因小鼠。

4. VEGF164表达检测：通过免疫组化和Western blot等技术检测，发现转基因小鼠中VEGF164的表达情况良好。

四、讨论原核显微注射技术是一种有效的基因编辑手段，可以精确地将外源基因导入到动物基因组中。

在本文中，我们利用该技术成功制备了VEGF164转基因小鼠，并对其进行了基因和蛋白水平的检测。

实验结果表明，该技术可以有效地将VEGF164基因导入到小鼠基因组中，并在转基因小鼠中表达良好。

《蛛丝蛋白八聚体转基因小鼠的制备及检测》篇一一、引言蛛丝蛋白八聚体转基因小鼠的制备与检测是现代生物技术领域中的一项重要研究。

通过将蛛丝蛋白八聚体的基因片段转移到小鼠体内，我们能够研究其表达、功能及其在生物医学中的潜在应用。

本篇范文将详细阐述该类转基因小鼠的制备方法、关键步骤和后续检测方法，旨在为相关研究人员提供有益的参考和指导。

二、制备过程1. 基因构建首先，我们需要从蛛丝腺体中提取蛛丝蛋白八聚体的基因片段，并进行序列分析和优化。

接着，利用基因工程手段构建转基因载体，为后续的转基因操作做好准备。

2. 转基因小鼠制备在确认基因构建无误后，我们采用显微注射法将转基因载体注入小鼠受精卵中。

随后，将受精卵移植到假孕母鼠体内，待其发育成转基因小鼠。

三、关键步骤1. 基因选择与优化选择合适的蛛丝蛋白八聚体基因片段是制备成功的关键。

我们需从蛛丝腺体中提取基因，并进行序列分析，确保所选基因片段具有较高的表达活性和稳定性。

2. 转基因载体构建构建转基因载体时，需确保载体的安全性、稳定性和高效性。

我们采用常用的基因工程手段，如酶切、连接、转化等，构建出适合转基因小鼠的载体。

3. 显微注射与移植显微注射过程中，需确保注射的准确性和效率。

移植后，需密切关注假孕母鼠的情况，确保其能够正常孕育小鼠。

四、检测方法1. 基因检测通过PCR、Southern Blot等技术，检测转基因小鼠的基因组中是否成功插入了蛛丝蛋白八聚体的基因片段。

2. 蛋白表达检测利用免疫组化、Western Blot等技术，检测蛛丝蛋白八聚体在小鼠体内的表达情况。

同时，我们还需要分析其表达模式、分布及功能。

3. 生物学功能检测通过观察转基因小鼠的生长发育、行为习性等，评估蛛丝蛋白八聚体对小鼠生物学功能的影响。

此外，我们还可以进行相关实验，如力学测试、组织学分析等，以更全面地评估其生物学功能。

五、结论通过本篇范文详细阐述了蛛丝蛋白八聚体转基因小鼠的制备及检测过程。

专利名称：一种条件性过表达AQP4转基因小鼠的模型制作方法
专利类型：发明专利
发明人：肖明,王临梅,冯维熙
申请号：CN201710086794.1
申请日：20170217
公开号：CN106893740A
公开日：
20170627
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种条件性过表达AQP4转基因小鼠的模型制作方法。

(1)插入基因片段的启动序列为胶质纤维酸性蛋白(GFAP)启动序列，可保证该基因片段的表达局限在神经系统中的星形胶质细胞内；(2)所转基因片段含有强力霉素诱导表达系统，在上述特定的组织内，rtTA3G在特异启动子驱动下表达，此时rtTA3G的构象不能结合到pTRE3G启动子上；当加入强力霉素后，改变rtTA3G的构象，使其结合到pTRE3G启动子上，启动Aqp4的表达，以实现时间和空间上的诱导表达。

由本发明所制备的条件性过表达小鼠在实际应用中有助于研究AQP4蛋白在脑内水平衡、星形胶质细胞功能、代谢废物清除、物质转运以及神经精神类疾病发病等方面的作用机制以及靶向AQP4药物的临床前药效评价，提供有效的模式动物。

申请人：南京医科大学
地址：211100 江苏省南京市江宁区天元东路818号
国籍：CN
代理机构：南京睿之博知识产权代理有限公司
代理人：陈琛
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MTA1转基因小鼠的构建及鉴定薛洪省;王海娟;刘健;张丽;林晨;詹启敏;赵志龙;钱海利【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2013(023)009【摘要】目的将人的MTA1外源基因整合到C57BL/6J小鼠中,构建稳定高表达MTA1的小鼠模型.方法通过RT-PCR方法克隆人的MTA1编码序列,将MTA1插入真核表达载体pcDNA3.1构建pcDNA3.1-MTA1载体,回收片段后利用显微注射技术将目的基因片段注入到受精卵的雄原核中,使用MTA1特异性的引物经PCR 鉴定出基因型阳性的转基因小鼠,再利用Western-blot及免疫组化方法检测MTA1在转基因小鼠全身级织表达情况.结果成功构建了MTA1转基因注射片段.在320枚显微注射受精卵中挑选出300枚存活卵移植到10只ICR小鼠假孕受体的输卵管中,10只ICR小鼠均怀孕,移植成功率为100％,共生出子代鼠80只,经PCR检测其中共有9只整合了MTA1基因,整合率为11.25％.经PCR鉴定MTA1整合阳性的F1代小鼠,再经Western-blot和免疫组化分析检测MTA1表达水平在脑、肺、肝、肠等组织中表达明显增高,肾、骨骼肌表达无差异.结论成功构建了脑、肝、肺、结肠高表达MTA1的转基因小鼠,为进一步MTA1研究奠定了良好的研究模型.【总页数】6页(P31-35,封2)【作者】薛洪省;王海娟;刘健;张丽;林晨;詹启敏;赵志龙;钱海利【作者单位】大连大学附属中山医院胸心外科,大连116001;中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京100021;中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京100021;中国医学科学院实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室,北京100021;中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京100021;中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京100021;大连大学附属中山医院胸心外科,大连116001;中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京100021【正文语种】中文【中图分类】R332【相关文献】1.心肌组织特异性高表达核仁素转基因小鼠的构建与鉴定 [J], 刘艳娟;周斌;蒋碧梅;童中艺;孙丽;李媛彬;肖献忠2.pG-miR-7-Sponge转基因小鼠载体的构建及鉴定 [J], 李永菊;周涯;陈超;朱顺飞;胡燕;秦娜琳;郑静;徐林3.miR-5572转基因小鼠构建病态窦房结综合征疾病模型的繁殖与鉴定 [J], 张进;李颖;范洁4.钙蛋白酶抑制蛋白转基因小鼠的构建和鉴定 [J], 叶廷巧;马双陶;李丹;郑曦;王强;苏立男;张彦;杨芸;杨永健5.Cramp转基因小鼠的构建及鉴定 [J], 石桂英;全雄志;陈显达;陈陟阳;董伟;张连峰;鞠振宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Wip1基因重组慢病毒表达载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响研究李宗涛;顾笑梅;孙国贵;李娟;张浩【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2017(046)033【摘要】目的构建Wip1基因重组慢病毒表达载体,研究其对乳腺癌细胞生物学行为的影响.方法以慢病毒感染方法将Wip 1的短发夹状RNA(shRNA)转入乳腺癌MCF-7细胞.采用qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测转染前后细胞Wip1 mRNA、蛋白的表达,MTT法、流式细胞术及Transwell侵袭实验检测Wip1-shRNA对MCF-7细胞增殖、凋亡、周期及侵袭转移的影响.筛选具有抑制p53基因表达的干扰RNA分子p53dsRNA,并分析其干扰后对乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移的影响.结果转染48 h后,Wip1-shRNA组细胞荧光较强,NC-shRNA组较弱.Wip1-shRNA组细胞Wip1 mRNA和蛋白的表达分别为0.291±0.025、0.203±0.021与NC-shRN A组0.954±0.090、0.963±0.092比较,差异有统计学意义(P<0.05).两组各时间点细胞存活率比较,差异有统计学意义(P<0.05).NC-shRNA组早期与晚期细胞的凋亡数少于Wip1-shRNA组,差异有统计学意义(P<0.05).NC-shRNA组细胞G0+G1期、S期细胞数分别为53.5±3.6、27.3±1.5,Wip1-shRNA组分别为72.3±5.2、14.6±0.8,差异有统计学意义(P<0.05).Transwell侵袭转移结果表明,NC-shRNA组细胞的穿膜数均多于Wip1-shRNA组(P<0.05).对照组细胞中p53 mRNA的表达、细胞侵袭转移的穿膜数与p53dsRNA组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 RNA干扰可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞Wip1表达,Wip1可能通过调控蛋白表达影响乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期与侵袭转移,p53dsRNA干扰p53基因下调后增加乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移的能力.%Objective To construct the Wip1 gene recombinant lentiviral expression vector and to investigate its effects on breast cancer cell biological behaviors .Methods Wip1 gene short hairpin RNAs (shRNA) was transfected into breast cancer MCF-7 cells through lentiviral infection method .Wip1 mRNA and protein expressions before and after transfection were detected by u-sing qRT-PCR and Western blotting .The effects of Wip1-shRNA on the proliferation ,apoptosis ,cell cycle ,invasion and metastasis in MCF-7 cells were determined by using the MTTassay ,flow cytometry and transwell invasion test .Interfering RNA molecule p53dsRNA inhibiting p53 gene expression (p53 dsRNA) was screened ,and the effect of p53 inhibition on MCF-7 cells invasion and metastasis was analyzed .Results After transfection for 48 h ,the cellular fluorescence in the Wip1-shRNA group was stronger , while which in the NC-shRNA group was weaker .Cellular Wip1 mRNA and protein expressions in the Wip1 shRNA group were 0 .291 ± 0 .025 and 0 .203 ± 0 .021 respectively ,which in the NC-shRNA group were 0 .954 ± 0 .090 and 0 .963 ± 0 .092 respectively , the difference between the two groups was statistically significant (P<0 .05) .The cellular survival rate at various time points had statistical difference between the two groups (P<0 .05) .The early and late cell apoptosis number in the NC-shRNA group was less than that in the Wip1-shRNA group ,the difference was statistically significant(P<0 .05) .The cells numbers at phase G0 +G1 and phase S in the NC-shRNA group were 53 .5 ± 3 .6 and 27 .3 ± 1 .5 respectively ,which in theWip-shRNA group were 72 .3 ± 5 .2 and 14 .6 ± 0 .8 respectively ,the difference was statistically significant(P<0 .05) .The Transwell invasion and metastasis results showed that the cell transmembrane number in the NC-shRNA group was more than that in the Wip1-shRNA group(P<0 .05) .The cellu-lar p53 mRNA and protein expression had statistical difference between the control group and p53dsRNA group(P<0 .05) .Conclu-sion RNA interference can effectively suppress Wip1 expression in MCF-7 cells .Wip1 may affect the proliferation ,apoptosis ,cell cycle ,invasion and metastasis of breast cancer cells by modulating proteinexpression .p53dsRNA increases the invasion and metas-tasis ability of breast cancer MCF-7 cells by interfering p53 gene down-regulation .【总页数】4页(P4609-4612)【作者】李宗涛;顾笑梅;孙国贵;李娟;张浩【作者单位】河北省唐山市工人医院乳腺外科 063000;河北省唐山市妇幼保健院妇产科 063000;河北省唐山市人民医院放化疗科 063000;河北省唐山市妇幼保健院妇产科 063000;河北省唐山市妇幼保健院妇产科 063000【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.MiR-214对人乳腺癌 MCF-7细胞生物学行为的影响 [J], 田延锋;李芳;刘擘;赵增仁;代拥军;魏明2.siRNA沉默PACE4基因对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的作用 [J], 王菲菲;王林;潘继红3.PPARγ在ER+乳腺癌中的表达及对MCF-7细胞生物学行为的影响 [J], 邹琳; 倪启超; 王东林; 兰建云; 徐骏飞; 邵伟伟; 江颖4.阿帕替尼对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞生物学行为的影响 [J], 任章霞;李凡;杨蕙嘉;官念5.5-氮杂-2′-脱氧胞苷对MCF-7乳腺癌细胞生物学行为影响的研究 [J], 胡志立;李汉贤;刘亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。