心肌细胞培养

原代培养的心肌细胞的准备

将出生1-3天的Wistar乳鼠浸泡75%的酒精中消毒，开胸后取心室肌，用Hank's液清洗2次，剪碎，放入10ml离心管中；离心管中装有5倍体积的0.25%胰酶，37℃消化10分钟后，加等体积的DMEM全培养液终止消化，自然沉淀；取出沉淀物，放入另一盛有胰酶的离心管中，重复上述消化过程4次，每次37℃20分钟；收集除第一次以外的上清液，1500 r/min 离心15分钟，弃上清，用含10％胎牛血清及青霉素和链霉素(终浓度均为100U/ml)的高糖DMEM培养液充分而轻柔地吹打成单细胞悬液，经 200目筛网过滤去除未消化组织块。然后按差速贴壁分离法37℃、5%CO

孵育 1-1.5小时，去除贴壁的非心肌细胞，纯化心肌细胞。细胞计

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条件下培养。于培养后12h即可见部数，相同密度接种于培养瓶中，37℃，5%CO

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分细胞收缩,24h后换液,此时心肌细胞约90%以上都在收缩, 速率达70/min～120/min。细胞培养72h后用于实验。