大鼠视网膜神经节细胞培养
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大鼠视网膜神经节细胞培养步骤及配方
1.成年SD大鼠摘除眼球,取出视网膜组织。
2.在木瓜蛋白酶中37o C,孵育25分钟
木瓜蛋白酶溶液配制:木瓜蛋白酶34个单位/ml(或2mg/ml)
DL-半胱氨酸3.3mM(或0.4mg/ml)
BSA 0.4mg/ml
溶解于Neurobasal medium中
3.RGC培养基漂洗3次
RGC培养基配制:Penicillin 100单位/ml
Streptomycin 100ug/ml
Pyruvate 1mM(无)
Glutamine 2mM
Insulin 5ug/ml
Transferring 100ug/ml
BSA 100ug/ml
Progesterone 60ng/ml
Putrescine 16ug/ml
Thyroxine 40ng/ml
Tri-iodothyronine 40ng/ml(无)
BDNF 50ng/ml
CNTF 10ng/ml
bFGF 10ng/ml
froskolin 5um(无?)
fetal calf serum 1%
培养基:neurobasal/B27
各浓缩液配制:penicillin: 10000单位/ml (每100ml培养基加入1ml)
Streptomycin 10mg/ml (每100ml培养基加入1ml)
Glutamine(分子量:146.15) 29.23mg/ml或200mM (每100ml培养基加入1ml)
Insulin 5mg/ml (每100ml培养基加入100ul)
Transferring 10mg/ml (每100ml培养基加入1ml)
BSA 10mg/ml (每100ml培养基加入1ml)
Progesterone 600ug/ml (每100ml培养基加入10ul)
Putrescine 1.6mg/ml (每100ml培养基加入1ml)
Thyroxine 400ug/ml (每100ml培养基加入10ul)
BDNF 500ug/ml (每100ml培养基加入10ul)
CNTF 100ug/ml (每100ml培养基加入10ul)
bFGF 100ug/ml (每100ml培养基加入10ul)
fetal calf serum
Neurobasal/B27
4.将细胞吹打成悬液
5.将1x103-3x103接种到8孔细胞培养板中,孔板由多聚赖氨酸和层连蛋白
包被(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ)。