姜半夏总生物碱含量测定

[ 3 ] 马建兵 ,沙浩渡 ,李向阳 1兔实验性膝性骨关节炎的组织病 理学及发病机理 [ J ]1中国矫形外科杂志 , 2001, 1: 45 - 471
[ 4 ] 汪青春 ,沈培芝 ,王海彬 1骨关节炎动物模型的建立及选择 [ J ] 1中医正骨 , 1998, 10: ( 3) : 39 - 401
修回日期 : 2007 - 03 - 23 © 1994-2011 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
第 6期 林 昶 1姜半夏总生物碱含量测定
216 加样回收率试验 取 0125g过 60 目筛半夏粉末 ,精 密称定 ,共取 6份 ,每份样品中分别加入 213936mg·mL - 1 盐酸 麻 黄 碱 15μL , 其 余 步 骤 照 213 项 下 同 法 处 理 , 于 413nm 下测定吸光度 ,计算 。结果如表 3。
表 3 加样回收率试验结果
D - 葡萄糖醛酸 、脂质 、鸟苷及类黄酮等 [3 ] 。半夏经不同炮 制处理分为法半夏 、清半夏 、姜半夏 。半夏的含量测定多 限于对未炮制的半夏的研究 ,未见对姜半夏含量测定的相 关研究 ,故现将用酸性染料比色法对姜半夏总生物碱的含 量测定结果报告如下 : 1 实验材料 、仪器与试剂 111 材料 姜半夏 [4 ] (市售半夏 ,照《中国药典 》1995 版
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一部半夏炮制项下炮制后使用 )粉碎备用 ,盐酸麻黄碱对 照品 (中国生物制品鉴定所 ,批号 0714 - 9903) 。 112 仪器 PHS - 3CW 微机型酸度计 , DU - 70 型可见 紫外分光光度计 。
113 试剂 氨水 ,柠檬酸 ,柠檬酸钠 ,溴麝香草酚蓝 ,氢氧 化钠 ,氯仿 ,硫酸 ,乙醚 ,无水硫酸钠等均为分析纯 。 2 方法与结果 211 对照品溶液的制备 取盐酸麻黄碱对照品 010599g, 用水定容于 25m1容量瓶中 ,摇匀 ,即得每 1m l含 213936mg 盐酸麻黄碱对照品溶液 ,备用 。 212 提取方法考查 21211 供试液 a的制备 称取过 60目筛的半夏约 015g, 加入浓氨水 015m l将药粉搅拌至湿润 , 10m l氯仿浸泡 25h, 置 70℃水浴锅中回流提取 5h,过滤 ,残渣以 10m l氯仿分 3 次洗涤 ,合并提取液 , 70℃下回收氯仿至干 ,精密量取氯仿 10m l溶解 ,平行两份 。编号为 a1 , a2。 21212 供试液 b的制备 称取过 60目筛的半夏约 015g, 加浓氨水 015m l,氯仿 10m l,冷浸 3h后 ,冰浴超声提取 1h, 过滤 ,残渣以 10m l氯仿分 3次洗涤 ,合并滤液 , 70℃下回收 氯仿至干 ,精密量取氯仿 10m1 溶解 ,平行两份 。编号为 b3 , b4。 21213 供试液 c的制备 称取过 60 目筛的半夏约 015g 于 100m1 磨口三角烧瓶中 ,分别加入浓氨水 015m l, 10m l 氯仿 ,室温放置 24h,其间振摇 5次 ,每次 5m in,又置恒温振 荡器上于 60℃振荡 2h,速度适中 。之后过滤 ,残渣以 10m l 氯仿分 3次洗涤 ,合并氯仿液 , 70℃下回收氯仿至干 ,精密 量取氯仿 10m l溶解 ,平行两份 。编号为 c5 , c6。 213 最大波长的制定 精密吸取对照品溶液 110m l,置于 干燥的 60m1分液漏斗中 ,加 5m1 柠檬酸 - 柠檬酸钠缓冲 液 ( PH = 6100) ,加 011%溴麝香草酚蓝 1m l,振摇 1m in,静 置 1h,分取氯仿层 。将氯仿作为空白对照品溶液 ,并将标 准对照品溶液和空白对照品溶液分别在 400nm ～700nm 处 扫描 ,所得离子对化合物于 413nm 处有最大吸收 ,而空白 对照品溶液结合文献资料 ,确定最大吸收波长为 413nm。 214 线性关 系 精 密 吸 取 对 照 品 溶 液 5μl, 10μl, 20μl, 30μl, 40μl分别置于干燥的 60m l分液漏斗中 ,以下按 213 项 ,自“加 5m l柠檬酸 - 柠檬酸钠缓冲液 ( PH = 6100) ”起 , 同法操作 , 于 413nm 处 测 定 吸 光 度 , 以 吸 光 度 为 纵 坐 标 ( y) ,盐酸麻黄碱 (mg)为横坐标 ( x)进行线性回归 ,得盐酸 麻黄 碱 的 回 归 方 程 为 : y = 81087624x - 0103473, R = 019995。结果表明 :盐酸麻黄碱在 12100～96100μg呈线性 范围 。
第 29卷 第 6期
贵阳中医学院学报
No16 Vo l129
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2007年 11月
J GC TCM
Novem be r 2007
列改变 ,出现多个裂隙 ,部分软骨面靡烂 、剥脱 ,形成缺损 区 ,表面出现多个空隙窝 ,窝内软骨细胞消失 ;部分软骨细 胞因固缩偏于一侧 ,并出现簇积现象 ,潮标线多不完整或 可见双重潮线 。 3 评述
姜半夏总生物碱含量测定
林 昶 指导老师 :刘 文
(贵阳中医学院 ,贵州贵阳 550002)
内容提要 :目的 :利用酸性染料比色法测定姜半夏中总生物碱含量 。方法 :酸性染料比色法 , PH = 6100柠檬酸来自百度文库—柠檬 酸钠缓冲液 ,现配现用的 0101%溴麝香草酚 。结果 :供试品制备方法 a回流法优于其它方法 。结论 :姜半夏中总生物碱含 量测定可采用酸性染料比色法 ,此法可行 。
取样量 生药总生 对照品加 实测值 回收率 平均回 实验号
RSD
(g) 物碱 (mg) 入量 (mg) (mg) (% ) 收率 (% ) (% )
1 012499 010362 010359 010711 97109 2 012494 010366 010359 010715 97124
人类骨关节炎在出现明显可觉察病变前较难发现 ,发 生机制复杂 ,一般认为是多因素综合所致的慢性退行性关 节病变 ,以关节软骨变性 、破坏及骨质增生为主要特征 。 因此研究 OA早期病理生化改变有很大困难 。一旦出现明 显临床症状及病理生理改变时 ,却又难以分辨众多病理生 理改变之间的因果关系 。其发病与年龄 、体质量 、炎症 、外 伤 、遗传等多种因素有关 ,无明显地域及种族差异 ,是人类 致残的重要病因之一 。在研究 OA 中 ,诱发 OA 动物模型 往往是通过短时间改变动物关节生物力学来达到诱发疾 病的目的 ,利用这种动物模型可以较为精确的观察关节组 织对某一种特定的干预反应 ,关节组织病变的开始及发 展 。要建成与临床相似的 OA模型 。但不同种动物及不同 方法造成的 OA模型 ,其病理表现不尽一致 。故在选择动 物模型时 ,应考虑动物的种属 (包括其生活习性 、关节结 构 、组织学及病理学特征 ) 、不同方法的造模机制和 OA 模 型的特点 ,并应参照研究目的加以选择 [4 ] 。最近 M ari jnis2 sen等提出一种新的关节刻痕 OA 模型 ,他们认为 ,以往通 过切断前交叉韧带等关节内手术途径所得到的 OA 模型 , 由于关节不稳定是一个长期存在促进骨关节进展的因素 , 对于观察如何延缓骨关节的进展是一个较好的模型 ,但同 时也可能会使一些有效的治疗的疗效显示不出来 ; 同时 , 在这类 OA模型中 ,关节的退变部分是因为滑膜的炎症的
存在 ,这又会影响主要针对软骨保护和修复的治疗措施的 治疗效果 。所以 ,他们提出一种新的模型 ,观察关节软骨 的生化表现与临床非常相似 。由于关节的退变是一过性 软骨损伤造成的 ,且炎症反应轻微 ,被认为是一个观察 OA 早期表现及治疗效果的理想模型 。尤其是观察主要针对 软骨保护和修复的治疗措施疗效应更为敏感 。这为临床 上尤其是骨关节科主要研究关节软骨的保护和修复为主 的研究提供了一个理想的模型 。我们经过实验进一步改 进这一模型的可操作性及成功率 。在造模时利用小针刀 进行刻痕 ,这样就可以不用打开关节腔 ,不用缝合 ,大大减 少了造模时的损伤 ,无手术创伤性滑膜炎的干扰 ,也减少 了对其他因素的影响 。同时造模方法简单 ,成功率高 ,时 间短 ,更符合临床病理生理过程 。
215 提 取 方 法 的 比 较 分 别 取 药 材 供 试 品 溶 液 a、b、 c10m l于 60m l干燥分液漏斗中 ,加柠檬酸 —柠檬酸钠缓冲 液 (pH = 6100) 5m l和 011%溴麝香草酚蓝 1m l,振摇 1m in, 静置 1h,分取氯仿层 ,于 413nm 下测定吸光度并计算含量 , 结果如表 1。
故在观察 OA早期的病理生理变化 ,研究对软骨的保 护和修复的治疗方法及措施疗效时是一种较理想的模型 。
参考文献
[ 1 ] Marijnissen ACA Van Roermund PM , et al1The canine“groove” model, compared with the ACLT model of osteoarthritis [ J ] 1oste2 oarthritis and cartilage, 2002, 10: 145 - 1551
编号 1 2 3 4 5 6
表 1 提取方法的比较实验结果
供试品
吸光度 总生物碱 (mg/ g)
a1
01463
010615
a2
01484
010642
b3
01442
010589
b4
01427
010571
c5
01215
010308
c6
01215
010309
方差分析的结果表明 :三种提取方法之间有显著性差 异 。直观分析可得 :样品 a >样品 b >样品 c。所以药材供 试晶溶液采用样品 a制备方法 。 216 重复性试验 取过 60 目筛的半夏约 015g,精密称 取 ,共取 6份 ,分别加入浓氨水 015mL 将药材搅拌至湿润 , 10m l氯仿浸泡 25h,置 70℃水浴锅中回流提取 3h、1h、1h, 过滤 ,合并提取液 , 70℃下回收氯仿至干 ,精密量取氯仿 10mL溶解 ,其余步骤照 213 项下 ,自“加 5m1 柠檬酸 - 柠 檬酸钠缓冲液 ( PH = 6100 ) ”起 ,同法处理 ,于 413nm 下测 定吸光度 ,计算含量 ,结果如表 2。
关键词 :姜半夏 ;酸性染料比色法 ;含量测定 ;总生物碱 中图分类号 : R28216 文献标识码 : B 文章编号 : 1002 - 1108 (2007) 06 - 0064 - 02
半夏为天南星科植物多年生草本植物 ( Pinelliatemata ( Thunb1) Berit)的干燥块根 ,味辛性温 ,归脾 、胃 、肺经 ,有 毒 。有燥湿化痰 、降逆止呕 、消痞散结之功效 ,中医认为半 夏还具有润燥 、催吐 、补益作用 [1 ] ,现代研究表明半夏兼有 抗肿瘤的作用 [2 ] ,故临床上应用较广 。半夏中有效成分 有 :生物碱类 、凝集素 、氨基酸类 、刺激性成分 、无机元素 、 麻黄碱 、β - 谷甾醇 、精油 、脂肪酸 、D - 葡萄糖 、L - 鼠李糖 、
[ 2 ] Mari jnissen ACA Van Roermund PM , et al1Steady p rogression of osteoarthritic features in the canine groove model[ J ] osteoarthritis and Cartilage, 2002, 10: 282 - 2891
编号 1 2 3 4 5 6
表 2 重复性试验结果
样品称重 ( g)
吸光度
014996
01462
015000
01470
015035
01461
014936
01468
015027
01495
014981
01478
总生物碱 (mg/ g) 010614 010623 010613 010621 010655 010633