实验二淋巴细胞分离实验

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T淋巴细胞提取

细胞计数 试剂和仪器 实验步骤 注意事项试剂和仪器血球计数板，盖玻片，Hanks液， RPMI1640，2ml（5ml）吸管，华氏 管，移液尖，微量移液器，显微镜实验步骤 1、准

c11实验步骤1、准备计数板： 2、制备细胞悬液：收集细胞，制成单个细胞悬液 3、加样：用吸管轻轻吹打细胞悬液，取少许细胞悬液，在计数板上盖玻片的一侧加微量细 胞悬液， 4、计数：

1.实验一获取的小鼠脾脏载玻片研磨 （研磨同时滴加1640培养液，保持细 胞活性）2. 细胞混合液静置数分钟后吸管吸取， 沿倾斜的管壁缓缓加入淋巴细胞分层 液上方（Ficoll：血

从小鼠脾脏中分离淋巴细胞方法一:１用注射器内芯或者研棒研磨过100目筛网，Hank’s液冲洗，收集分离的脾细胞悬液。２另取无菌试管，先加入淋巴细胞分离液，然后将试管倾斜，略放平，吸取刚刚制备的细胞悬液缓慢的加入试管中，一般分离液和细胞悬液的

小鼠脾脏单个核细胞的分离一、实验目的1. 熟悉细胞分离的基本原理2. 掌握小鼠脾脏单个核细胞的分离的方法3. 掌握流式细胞术检测细胞表面标志的方法二、实验原理1.台盼蓝染色：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内。丧

人外周血淋巴细胞的分离（1）抽取正常人外周血(5人x10ml/人),每mL加5-10IU肝素钠，一般建库需30mL-40mL血。（2）取新鲜抗凝血10 mL与Hanks液1: 1混匀后,沿管壁小心加于10mL淋巴细胞分离液面上。（3）低速台

B淋巴细胞分离技术 一、实验原理 膜表面免疫球蛋白(SmIg)，是B细胞特有的表面标志，它既是B细胞识别抗原的受体，与相应抗原特异性结合；又是表面抗原，能与相应的抗Ig的抗体结合，故可用荧光标记的抗Ig抗体作免疫荧光镜检，以查出B淋巴细胞。

离心分离技术与淋巴细胞分离及鉴定【实验目的】1.了解离心分离技术的原理与分类。2.掌握应用密度梯度离心法分离单个核细胞及B淋巴细胞鉴定的方法。【实验原理】1.利用离心力将悬浮液中的悬浮微粒快速沉降，借以分离比重不同的各种物质成分。因此用比重

高。三、淋巴细胞的分离与纯化PBMC悬液富含淋巴细胞，但有混杂有单核细胞、红 细胞和血小板。 红细胞的去除: 无菌蒸馏水低渗裂解法或0.83%氯化铵处理法。 血小板的去除: 离心洗

从小鼠脾脏中分离淋巴细胞１小鼠断颈处死，酒精浸泡５分钟，超净台内打开左侧腹部皮肤，小心分离皮下组织和腹部肌肉暴露出脾脏，提起，剪去周围结缔组织，放入有PBS的小瓶中。无菌镊子夹碎，挤压脾脏，将获得的细胞悬液移入无菌试管中。２另取无菌试管，先

细胞计数板实验结果细胞数量： 单个核细胞浓度（细胞数/ml)=2个大方格内细胞总数 2×104×10 (稀释倍数）细胞活力检测：（死细胞被染成蓝色，活细胞不着色）活细胞百分率=ห้

离心之前一定要配平四、家兔红细胞分离 心脏采血 把采取的血液轻轻沿壁注入到试管中．并轻轻摇晃几次． 取家兔阿氏液混合的血液，以Hanks洗三次（2000r/min离心10分钟）

实验步骤3.20℃，2000r/min，离心20min4.沿管壁周缘轻轻吸取PBMC层移入 另一试管中实验步骤5.加足量稀释液充分洗涤，1500 r/min 离心10min ，弃上

淋巴细胞提取一实验目的：小鼠脾淋巴细胞提取二实验对象：B／C 小鼠三实验器材：1．试剂：淋巴细胞分离液、1640培养基2．器材：无菌培养皿、200目尼龙网（裁成90mm*90mm正方形，灭菌）、10mL玻璃注射器内活塞（灭菌）、不同规格的镊

人淋巴细胞分离液使用说明产品名称: 人淋巴细胞分离液产品货号: LTS1077产品展商: 佰易聚生物商城产品规格: 200ml产品品牌: TBD本品为带有乳光或微乳光的灭菌水溶液。主要成分是葡聚糖与泛影酸葡甲胺。适用于从血液及组织匀浆中分离

实验原理T淋巴细胞在有丝分裂原PHA等刺激后，细 胞的形态和代谢发生变化，发生一系列增殖反应， 如出现细胞体积增大、核染色质疏松、蛋白质和 核酸合成增加，并转化为淋巴母细胞。试剂与

取10ul于细胞计数板上细胞计数细胞计数数上不数下，数左不数右。细胞计数板实验结果细胞数量：单个核细胞浓度（细胞数/ml)= 2个大方格内细胞总数×104×10 (稀释倍数）2细胞