western 转膜条件蛋白来源：RAW264.7 总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：40~70 KDWB用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400 mA 转膜时间：60~90 minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15 min 就拆下来了

Western实验步骤1. 电泳(Electrophoresis)（1）SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶进行配制，配方试剂去离子水，Arc-HCL(29:1)，10%APS，SDS,TEMED。一般按分子大小配胶，现实验分离胶配12%-15%的胶，浓缩胶10%的胶。配胶步骤：1.清洗玻璃板，装好（注意不要漏即玻璃板要对齐）。2.按比例配分离胶（8

Western-blot实验方法步骤..

Western Blot技术专辑之PAGE胶电泳和转膜PAGE倒胶的仪器我们在前面WesternBlot仪器之选已经介绍过了，除了顺手的工具能防止漏胶，PAGE配胶的试剂和配方比例对电泳结果的质量当然有决定性的影响，这个配胶的比例，在《分子克隆》上有详细的论述，相信大家都不难查到。容易忽视的问题主要在于过硫酸铵（AP）一定要新鲜——最好用小指管配AP（写日期

Western实验步骤1. 电泳(Electrophoresis)（1）SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶进行配制，配方试剂去离子水，Arc-HCL(29:1)，10%APS，SDS,TEMED。一般按分子大小配胶，现实验分离胶配12%-15%的胶，浓缩胶10%的胶。配胶步骤：1.清洗玻璃板，装好（注意不要漏即玻璃板要对齐）。2.按比例配分离胶（8

Western 转膜步骤 操作方法

western blot转移电泳一般操作流程总的来说，半干转、湿转的程序和基本原理是相同的。胶和膜预稀释并用电转缓冲液平衡；滤纸/胶/膜/滤纸三明治放入电转设备中；正确的方向确保蛋白转移到膜上。合适的电压/电流条件对于电转的成败是非常重要的。电转缓冲液和电转条件的选择对于不同的电转设备，当选用不同的胶和缓冲液时，要求不同的电压/电流。变性凝胶需要增加电转时间

w e s t e r n转膜条件蛋白来源：RAW264.7总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：40~70KDWB用膜类型、孔径：0.45NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400mA转膜时间：60~90minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，?曾经因为失误，转了15min就拆下来了，但

Western blot ,帮你理解

Western实验步骤1. 电泳(Electrophoresis)（1）SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶进行配制，配方试剂去离子水，Arc-HCL(29:1)，10%APS，SDS,TEMED。一般按分子大小配胶，现实验分离胶配12%-15%的胶，浓缩胶10%的胶。配胶步骤：1.清洗玻璃板，装好（注意不要漏即玻璃板要对齐）。2.按比例配分离胶（8

北京雷根生物技术有限公司Western 转移缓冲液(NC,PVDF)简介：Western 转移缓冲液又称蛋白印迹转移缓冲液或转膜缓冲液，适用于Western Blot 实验中把蛋白质转移到PVDF 膜或硝酸纤维素(NC)膜上，以便进行抗体的孵育和下游实验。Leagene Western 转移缓冲液(NC,PVDF)主要成分为Tris、甘氨酸、甲醇等，不适用于

转膜（Trarsmembran）1 转膜的定义将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白转移，所用缓冲液少。2 转移膜的选择杂交膜的选择是决定West

转膜（Trarsmembran）1 转膜的定义将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白转移，所用缓冲液少。2 转移膜的选择杂交膜的选择是决定West

western转膜条件蛋白来源：RAW264.7 总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：40~70 KDWB用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400 mA转膜时间：60~90 minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15 min就拆下来了，但从

Bio-Rad Western Blot半干法转膜的十大注意事项Do not immerse the unit in liquid. Use special care when cleaning the anode plate to avoid scratching or marring the platinum. Do not use abrasives

Western实验步骤Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。Western可以参考如下步骤进行操作。1. 收集蛋白样品(Protein sample preparation)可以使用适当的裂解液，例如碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA

转膜:小分子量的蛋白半干转效果比较好，大分子量（100KD）以上建议湿转。具体转膜条件需要多摸一下。30-80KD半干转恒流1mA/cm2，1-1.5h 都可以，大分子湿转100V，2.5h以上应该可以，转完膜丽春红染出的条带比较清楚的话，一般都能有结果。湿转，Buffer一定要预冷，最好提前一天配好放4度；滤纸不要大过PVDF膜，防止短路；胶在负极，膜靠近

1，转膜不充分/过转对于非小分子量尤其是大分子量（>100kd）蛋白而言，一般不会出现过转情况，转膜不充分是主要原因，增加转膜力度无非是加大电压/电流，延长时间。但对于小分子蛋白（2，封闭时间不足这一点似乎多数人都不重视，所以有时候会有些意外。我一般室温2~4h，但4度过夜确实是最好的。另外在平皿中摇似乎比封口膜更容易掌握并获得较好的效果，对新手似乎更好。3

转膜（T r a r s m e m b r a n）1转膜的定义将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白转移，所用缓冲液少。2转移膜的选择杂交膜的

信号放大灵敏度高（多个二抗 结合位点）免疫特异性不受标记影响对照内参的选择• 目的蛋白分子量 相差5KD以上• 实际的试验环境 组织缺氧、糖尿病： GAPDH升高 凋亡及移除核膜：