伊红染色液溶液的配制方法

一、常用染色液的配制⒈碘—碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂.配方:碘化钾2g ;蒸馏水300ml ；碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内.用时可将其稀释2—10倍,这样染色不致过深，效果更佳。

⒉苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ)能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。

配方：（1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油（2)先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70％酒精50ml.（3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液.⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。

配方：洋红1g ；45％醋酸100ml煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀)，放入棕色瓶中备用.⒋改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine) 核染色剂。

配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。

原液A:3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。

原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。

原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）.（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1～，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著(若立即用，则着色能力差）。

适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。

山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。

⒌中性红(neutral red)溶液用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。

冰冻切片染色的步骤如下：
冰冻切片染色的步骤如下：
1.配制染色液和分化液。

根据所需的染色效果，配制染色液和分化液。

例如，
伊红染色液的配方是在95%乙醇100ml中加入1g伊红，玻璃棒搅拌均匀；
1%盐酸酒精分化液的配方是36%-38%的盐酸1ml加入75%乙醇99ml中混匀。

2.将切片放入苏木精染液中染色一定时间，根据实际需要决定染色时间。

3.自来水洗去浮色。

4.进入分化液进行分化处理。

5.自来水冲洗半小时以上，使切片蓝化。

6.过滤后加入伊红染色液染色一定时间。

7.再次自来水洗去浮色。

8.加入伊红染色液染色一定时间，使切片呈现出所需的染色效果。

9.最后进行脱水、透明、封片等处理，完成染色过程。

请注意，在进行冰冻切片染色时，应调整试剂和制片过程中各步骤的时间，所制冰冻切片应染色鲜明，结构清晰。

HE（Hematoxylin & Eosin）染色基本流程苏木精—伊红染色法简称HE染色法，它是最常用的普通染色方法。

苏木精是阳离子染料，将细胞核内的嗜碱性物质染成蓝紫色。

伊红是阴离子染料，将细胞质和胶原纤维等染成粉红色。

1、二甲苯脱蜡三道，每道30min2、无水乙醇两道，每道5min3、95%乙醇两道，每道5min4、80%乙醇5min5、70%乙醇5min6、50%乙醇5min7、蒸馏水3-5min8、苏木素染色液5-10min，根据染色结果和气温调整时间9、浸自来水冲洗多余的染色液10、0.5%盐酸酒精分色（70%酒精配制）3-10seconds11、水洗蓝化15-30min12、50%乙醇5min13、70%乙醇5min14、80%乙醇5min15、伊红染色液（95%乙醇配制）60seconds16、95%乙醇两道，每道5min17、无水乙醇两道，每道5min18、乙醇+二甲苯（1:1）5min19、二甲苯三道，每道5min20、中性树胶封片HE染色注意事项：1. 染色时调节pH值很重要。

如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。

因此，自来水中冲洗时间要长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。

染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2. 切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。

如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。

3. 切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。

4. 在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。

5. 切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。

6. 最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。

常用染色剂及配制常用染色剂及配制供组织学诊断用的优秀常规染色剂，不仅须使细胞核和细胞浆有选择性着染，也要使结缔组织着色。

苏木素-伊红染色的切片适当分色，可使这些结构得以区分，胞核表现为蓝色，胞浆和结缔组织纤维呈各种色调的粉红，因此这是一种最常用的常规染色剂。

一、苏木素-伊红染色的基本原理苏木素是最早用于生物学上的天然染色剂之一，百余年来，一直是生物学实验室最常用的组织学中细胞核的染料，它是从苏木树的树心中提炼出来的，为浅褐色结晶或淡黄褐色的粉末状物。

易溶于乙醇、甘油，也可溶于热水。

苏木素本身没有染色能力，它经过氧化后，能产生具有染色能力的苏木红，苏木红又称为氧化苏木素或苏木因。

苏木素变成苏木红的过程叫作“成熟”。

成熟的方法一般有两种：一种是把配制好的苏木素液在开口瓶中放置两个月以上，让其在日光和空气中的氧的作用下使之氧化。

故一般地盛苏木素的瓶子放在向阳处，时间愈长，染色的效果愈好。

常配制一大瓶，备长期使用。

另一种方法是在苏木素液中加入氧化剂，如磺酸钠，过锰酸钾，氧化汞，双氧水等。

用这种方法成熟与用第一种方法者不同的是，它放置时间愈长，染色的效果愈低。

这是因为苏木红被继续氧化可生成无色的化合物，故一次不宜配制过多，还应放置40C冰箱内避光保存以延长使用时间。

它的优点是配制后即可使用。

成熟的苏木素对组织并无亲和力，须加入含金属离子的媒染剂，才能达到染色的目的。

一般用于明矾苏木素的媒染剂为钾明矾或氨明矾。

主要是利用明矾中的铝离子和苏木红结合形成的铝沉淀色素为紫蓝色，对染色质有很大的亲和力，水和酒精都不能使其褪色。

用于铁苏木素的媒染剂是三价铁离子，苏木红的铁沉淀色素为黑蓝色，不溶于水，因此，故不能配制大量含媒染剂的混合液，一般用时现配，或在染色过程中，先用铁明矾媒染，然后再染苏木素，如磷钨酸苏木素染色即是。

常规苏木素染色的对比染色是用伊红，也有采用焰红，因为焰红比伊红色泽更鲜明，此外还有采用橘黄G，比布里希猩红，波尔多红等作为对比染色。

伊红染色液(醇溶)操作步骤及注意事项规格：100ml/500ml货号：G1108保存：常温避光保存，有效期为1年。

产品说明：伊红(Eosin)又称曙红，属人工合成染料中的呫吨类染料，为桃红色或粉红色的粉末。

伊红(醇溶)分子式为C20H8Br4O5，分子量为649.9。

伊红最适宜不苏木精配合染色以显示正常或病理组织的形态结构。

伊红染色液(醇溶)采用特有防腐剂，操作简单，丌使用汞、甲醇等有毒试剂。

常用于组织切片或培养细胞的染色，染色后细胞浆呈粉红色或红色。

自备材料：系列乙醇、4%多聚甲醛操作说明：1、样品处理a)对于石蜡切片：1)二甲苯（I）中脱蜡5-10min。

2)换用新鲜的二甲苯（Ⅱ），再脱蜡5-10min。

3)无水乙醇5min。

4)90%乙醇2min。

5)70%乙醇2min。

6)蒸馏水2min。

b)对于冰冻切片：经固定的切片置蒸馏水2min。

c)对于培养细胞：①4%多聚甲醛固定10min以上，②蒸馏水洗涤2min，③换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。

2、伊红染色对于上述处理好的样品，伊红染色液染色0.5-2min(根据染色结果和要求调整时间)。

如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。

如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。

注：如果用于免疫组化等染色后的复染，参考上述步骤在其它染色完成后进行伊红染色。

3、脱水、透明、封片或进行其它染色a)脱水、透明、封片：1)95%乙醇脱水2min。

2)更换新鲜的95%乙醇再脱水2min。

3)二甲苯透明5min。

4)更换新鲜的二甲苯，再透明5min。

5)用中性树胶或其它封片剂封片。

6)显微镜下观察，细胞浆呈粉红色或红色。

b)进行其它染色：如果进行免疫荧光染色或进行Hoechst等荧光染料的染色，在伊红染色液染色后：70％乙醇洗涤2次，每次2min。

PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5min。

苏木素伊红(HE)染色试剂盒货号：AG1120规格：3×10ml/3×100ml保存：常温保存，复检期至少1年。

注意：环境温度低时，分化液可能会结晶析出，将分化液37℃水浴融化后即可，不影响使用。

产品说明：苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining )，简称HE 染色法，是病理学常规制片中最基本的染色方法。

苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。

例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。

胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。

本产品所包含试剂均为工作液，可直接使用。

操作说明（以下步骤仅供参考）：（一）石蜡组织切片染色。

1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，切片。

2．石蜡切片脱蜡水化：①二甲苯（I ）中脱蜡5min 。

②换用新鲜的二甲苯（Ⅱ），再脱蜡5min 。

③无水乙醇5min 。

④95%乙醇2min 。

⑤80％乙醇2min⑥70%乙醇2min 。

⑦蒸馏水2min 。

3．苏木素染液染色5-20min(具体时间根据染色结果和实验要求调整)，自来水冲洗。

4．分化液分化30s 。

5．自来水浸泡15min 或温水（约50℃）5min 。

6．置伊红染液几秒-2min(具体时间根据染色结果和实验要求调整)，自来水冲洗。

7．自来水浸泡1-2min 。

8．脱水，透明，封片：①95％乙醇（I ）1min②95％乙醇（Ⅱ）1min③100％乙醇（I ）1min 产品内容AG1120-10AG1120-100苏木素染液10ml 100ml 分化液10ml 100ml 伊红染液10ml 100mlShanghai Acmec Biochemical Co.,Ltd.Tel ：400-900-4166WEB ：④100％乙醇（Ⅱ）1min⑤二甲苯石炭酸（3：1）1min⑥二甲苯（I）1min⑦二甲苯（Ⅱ）1min⑧中性树胶封固，镜下观察。

苏木素-伊红染色液（H-E）说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。

【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。

【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。

苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。

带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。

伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。

此染色法可观察到清晰的细胞结构。

样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。

伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。

返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。

由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。

使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。

【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。

【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。

保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。

产品使用效期为2年，具体效期见标签。

【适用仪器】不适用【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。

为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。

根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。

伊红溶液配制方法解释说明1. 引言1.1 概述伊红溶液是一种常用的有机染料，在科学研究和实验操作中具有广泛的应用。

其配制方法的准确性和可重复性对于获得准确的结果至关重要。

本文将详细介绍伊红溶液的配制方法，包括材料准备、配制步骤以及需要注意的事项。

1.2 文章结构本文共分为5个章节：引言、伊红溶液配制方法、结果与讨论、应用与意义以及结论。

通过依次阐述这些内容，读者将能够全面了解伊红溶液配制方法及其在科学研究中的应用和意义。

1.3 目的本文旨在提供一个清晰明了的指导，使读者能够正确并有效地配制伊红溶液。

通过深入剖析实验结果和讨论影响因素，我们还希望揭示伊红溶液在某领域中的应用及对其他实验操作的启示和借鉴意义，并展望该领域未来对伊红溶液配制方法研究所能做出的贡献。

最终，通过总结要点，我们希望读者能够获得对伊红溶液配制方法的全面认识，并能够应用于实际科研工作中。

以上是文章“1. 引言”部分的详细内容。

2. 伊红溶液配制方法2.1 材料准备为了配制伊红溶液，我们需要以下材料：- 伊红固体粉末（一般为碳铁蓝或三环蓝）- 无水酒精或蒸馏水- 碱性溶液（如氨水或氢氧化钠溶液）- 醋酸乙酯或二甲苯2.2 配制步骤下面是伊红溶液的配制步骤：1. 量取适量的伊红固体粉末。

根据所需的浓度，可以使用天平准确称取所需的质量。

2. 将伊红固体粉末加入一个干燥的容器中。

3. 慢慢加入一定量的无水酒精或蒸馏水。

用玻璃棒轻轻搅拌混合，直到伊红完全溶解。

4. 在另一个容器中，配置一定浓度的碱性溶液。

5. 将步骤3中得到的伊红溶液倒入配置好的碱性溶液中。

注意要缓慢倾倒，同时用玻璃棒轻轻搅拌混合。

6. 继续搅拌溶液，直到获得均匀的颜色。

根据需要可以再次调整溶液的浓度。

2.3 注意事项在伊红溶液配制过程中，需要注意以下几点：- 配制过程中使用的容器和工具应干燥、清洁，以免杂质污染溶液。

- 每一步骤中加入的溶液量要适量，避免过多或不足导致浓度偏差。

精子活体染色液(伊红-苯胺黑法)染色步骤及结果
货号:G2581
产品组成：
规格10ml20ml Storage
试剂A：伊红染色液4ml8ml RT避光
试剂B：苯胺黑染色液6ml12ml RT避光
有效期：12个月
产品简介：
精子活体染色液(伊红-苯胺黑法)可以常规检测所有精子标本的存活率，通过染料拒染法来鉴别细胞膜完整的精子，从而得出活精子的百分率。

精子活体染色液由伊红染色液、苯胺黑染色液组成，利用了染料拒染原理，即相关基于损伤的细胞膜，如在非活的(死)细胞上的膜，允许非透过膜性染料可进入膜内染色；而活细胞的细胞膜能够抗拒染料进入，产生拒染现象，不着色。

该染色液仅适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤（仅供参考）：
1、取洁净小试管，滴加新鲜精液1滴和伊红染色液1-2滴，混匀，放置30min。

2、滴加苯胺黑染色液3滴，混匀，即为精液-伊红-苯胺黑染色液，放置30-60秒。

3、滴加上述精液-伊红-苯胺黑染色液1滴于载玻片上，制成涂片。

4、晾干、镜检。

油镜下观察，未着色的精子为白色，死精子呈红色，背景呈黑色。

5、计数200个精子，计算未着色（活精子）占200个精子的百分率。

染色结果
活精子不着色
死精子红色
背景黑色
注意事项：
1.精液标本一旦液化应立即检测精子存活率，最好在30min内，在任何情况下都不能
超过1h，以免因脱水或温度变化导致精子失活而使染色检测结果不准。

实验室常用‎染色液配方‎1、吕氏(Loeff‎l er)美蓝染色液‎A液：美蓝(Methy‎l ene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配‎制A液和B‎液，然后混合即‎成。

2、齐氏(Ziehl‎)石炭酸复红‎染色液A液：碱性复红(Basic‎fuchs‎i n) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红‎溶于95%酒精中，配成A液。

将石炭酸溶‎于蒸馏水中‎，配成B液。

将两者混合‎即成。

3、结晶紫染色‎液(Huclk‎e r改订)A液：结晶紫(Cryst‎a i viole‎t) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4‎H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研‎细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。

将草酸铵溶‎于蒸馏水，配成B液。

两液混合即‎成。

4、路戈氏(LugoI‎)碘液(革氏鉴别染‎色用)碘 1.0克碘化钾‎2.0克蒸馏水‎300毫升‎先将碘化钾‎溶于少量蒸‎馏水中，再将碘溶于‎碘化钾溶液‎中，溶时可稍加‎热，最后加足蒸‎馏水量。

5、番红染色液‎(革氏鉴别染‎色用)番红O(Safra‎n in O) 2.0克蒸馏水100毫升‎6、孔雀绿染色‎液(芽孢染色用‎)孔雀绿(Malac‎h ite green‎) 5.0克蒸馏水‎100毫升‎先将孔雀绿‎研细，加少许95‎%酒精溶解，再加蒸馏水‎。

7、Dorne‎r黑素液(英膜染色用‎)黑素(Nigro‎s in) 10.0克蒸馏水‎100毫升‎福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑‎素在蒸馏水‎中煮沸5分‎钟，加入福尔马‎林作为防腐‎剂，用玻璃棉过‎滤。

8、刚果红染色‎液刚果红(Congo‎red)2.0克蒸馏水‎100毫升‎9、稀释结晶紫‎染液(放线菌染色‎用)结晶紫染色‎液(同3) 5.0毫升蒸馏‎水95.010、乳酸石碳酸‎棉蓝染色液‎（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸‎(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏‎水10.0毫升将碳‎酸加在蒸溜‎水中加热溶‎化，加入乳酸和‎甘油，最后加入棉‎蓝，溶解即成。

伊红，是我们常用的染料，英文名为Eosin，又叫四溴荧光素，是一种混合物。

伊红是生物学上常用的染料，一般观察细胞用的HE染色，其中的E就是伊红的简称。

伊红的分子式，但是实际试用的是混合物，而非纯净物，根据溶解度不同，分为水溶性和醇溶性的两种，水溶性的并不是不溶于醇，而是溶解度较小的缘故。

加入浓盐酸之后，原来的水溶液，竟然分成两层了。

因为常用，所以科里面有许多以前购买的伊红试剂，反正我们上班之后一直用的就是那些试剂，技术员说，从来没有购买过。

不过最近技术员说配置的伊红不怎么着色，她用的方法大概是2.5-5g伊红，溶于500毫升蒸馏水中配称伊红染液；后来我看了一下，还有其他的方法，就用另外一种方法：伊红0.5克，蒸馏水75毫升，95%的酒精25毫升，以前用这种方法配的着色还行，不过这次用这种方法配，着色效果也不是很好。

大家找不到原因，最后担心是不是试剂时间太长，过了失效期了？不过试剂瓶上并没有有效期一说。

就想到到病理技术网上问问，后来丁老师给了一个方法：2.5克溶于500毫升水当中，然后加入10毫升浓盐酸，静置过夜然后过滤，之后把放置烤箱内烤干，用这些干燥物，加95%的酒精1000毫升配称原液，用时可以用1：1到1：2的比例稀释。

其实这个方法以前看到过，只不过没有看明白。

最主要的疑惑就是不知道用水溶解之后过滤剩余的该如何处理？难道要把这些滤液倒掉吗？所以一直有着用的一个疑问。

这个疑问是因为我们用的是水溶性的伊红，在水中的溶解度比较高，简单的方法直接就可以使用，这些滤液倒掉岂不可惜。

但是实际操作的时候，发现原来自己的担心是多余的。

因为伊红溶解添加浓盐酸10毫升之后，原来的水溶液逐渐出现浑浊，最后慢慢地出现分层，上层的是淡黄色的清亮液体，而下面粉红色的絮状沉淀。

原来是添加酸之后，水溶液里出现了絮状沉淀。

这样伊红是不会随着过滤流掉的。

看到这个现象才明白了这样做的目的，这样第二天过滤之后，原来的伊红不仅没有减少，似乎反而多了点。

HE染色程序1．取材与固定：一般取0.5立方米，基本不用再次修形。

置于4%甲醛溶液中，至少固定24小时。

室温保存即可。

2．水洗：视组织块大小而定。

一般与固定时间相等或至少水洗24小时。

3．脱水：70％酒精（过夜或2h）→80％酒精（过夜或1h）→90％酒精（1h）→95％酒精Ⅰ（1h）→95％酒精（1h）Ⅱ→100％酒精Ⅰ(1h)→100％酒精Ⅱ(1h)，梯度酒精脱水注：当酒精浓度逐渐升高时，特别是100%的酒精，注意观察组织块情况，不能脱水脱过了，如果拖过了，切片时，组织易碎。

如果水脱的不彻底，则浸蜡时，蜡不能完全浸入，也会影响后期切片。

4、透明：二甲苯Ⅰ（10min）→二甲苯Ⅱ(10min) 。

5、浸蜡：58℃ 1.5-2h （一般用新蜡）6、包埋：叠好的蜡槽，一般深1cm，宽1cm，长7cm，放4个组织块为宜。

注：包埋一般采用旧蜡，避免产生气泡。

包埋时用来夹取组织块的镊子，要同时放在蜡箱里预热。

先向蜡槽内倒蜡，然后用预热的镊子夹取浸蜡缸中的组织，放到蜡槽底部，尽量避免漂浮。

包埋后，就不要挪动蜡槽了，否则组织漂浮在蜡槽的表面。

7、常规切片，一般组织3-5微米，神经组织切7微米。

展片温度为52摄氏度。

捞片时刻直接从95%的酒精中取载玻片直接捞片，不必擦干载玻片上的酒精。

捞好片后，置于37度温箱恒温干燥过夜。

8、切片脱蜡：二甲苯Ⅰ（5min）→二甲苯Ⅱ(8min)，9、水化：100％酒精（1min）→90％酒精(1min)→80％酒精(1min)→70％酒精(1min)10、水洗2-5min11、苏木素染色15-20min12、水洗至灰黄色13、分化：1%盐酸酒精分化30s至桃粉色，14、水洗返蓝：2-3h15、伊红染色：15min16、脱水：70％酒精（10s）→80％酒精（20s）→90％酒精（30s）→95％酒精（1min）→100％酒精(2min)→100％酒精(2min)17、二甲苯透明：二甲苯Ⅰ（5min）→二甲苯Ⅱ(5min)18、中型树胶封片，镜检。

此文档收集于网络，如有侵权请联系网站删除只供学习与交流伊红染色液配制方法溶液的配制方法如下：华越洋伊红染色液：100ml伊红染料配方较多在常规配方中，有的染色效果好，但操作较繁琐，且消耗较多试剂。

有的操作简单，但染色时间长，染液有效期短，常需加入冰醋酸，但加入剂量不易掌握，量少达不到促染作用，加入过多染液易沉淀，且引起色调不正，特别是容易褪色，染色结果不能长期保存。

为此，对伊红Y染色液配制进行了改进。

改进后的方法具有操作简便、经济、染色性质稳定、着色力强且持久颜色鲜艳等优点；制备方法：伊红Y1G，蒸馏水90ML，苦味酸饱和水溶液10ML。

将蒸馏水加入伊红，待其全部溶解后，加入苦味酸饱和水溶液。

染色结果观察：染色时间0.5-1分钟。

伊红所着的颜色鲜艳，层次分明，与蓝色的细胞核对比突出。

伊红Y（四嗅荧光素二钠盐，分子式：C20-H6O5Br4NO2）是一种酸性红色胞浆性染料，室温下，在水中的溶解度度远大于在酒精中的溶解度。

它在溶液反应中，由于钠离子的存在而呈碱性状态。

苦味酸[分子式：（NO2）3C6HOH]是一种较强的酸性染料，它的颜色是由硝基发色团所致，染色性能是由羟基助色团产生的。

苦味酸具有三种作用：1本身是一种胞浆染料，具有染色作用。

2又是一种酸，加入伊红Y染色液中，使染色造成比胞浆等电点略为酸性的环境，抑制了部分氨基酸中羟基官能团，从而使氨基酸中氨基官能团和酸性染料结合，增加了染液与组织间的亲和力，起到促染作用。

3苦味酸又是一种氧化剂，在染色体中经过氧化物作用后，使染色剂与组织成份结合的更牢固。

组织着色鲜艳，染色后不易褪色，因而切片可长期保存。

华越洋伊红染色液操作简单，不使用汞、甲醇等有毒试剂，可以用于组织切片或培养细胞的染色。

本伊红染色液染色后细胞浆呈粉红色或红色。

本染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。

一方面可以在本伊红染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行伊红复染。

H-E染色概述苏木精（Hematoxylin）-伊红（Eosin）染色也称普通染色，简称为H-E染色。

是生物组织学、病理学及细胞学工作必不可少的最常用的染色方法，故又称常规染色H-E染色应该是红蓝相映，层次浓淡均为分明稳恒定优质各种固定、包埋方法所制作的组织切片和冰冻切片等，均可用采用常规染色H-E染色原理组织细胞的不同成分对苏木精染料的亲合力不同，经苏木精染色的组织切片，再利用酸乙醇的分化作用，可使细胞核等酸性成分着色清晰，而其它成分脱色再经伊红染细胞质等碱性成分，则各种组织与病变的一般形态结构均可显示出来一张优质的染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据再根据此染色切片所见，分别进行不同的特殊染色到目前为止人类所积累的病理组织学知识，绝大部分是从观察苏木精-伊红染色标本所得来的第一节染液及溶液的配制一、明矾苏木精染液的配制苏木精染液的配法很多，普通、常规染色多用明矾苏木精，常用的有哈瑞（Harris）、埃利希（Ehrlich）、德拉菲而德（Delafield）及迈耶（Mayer）等明矾苏木精染液用钾明矾或铵明矾中的铝离子作为苏木精的媒染剂利用氧化汞等氧化剂进行人工氧化或通过自然氧化成熟的方法，使苏木精具有较强的染色效果还需用冰醋酸作为促染剂，以增强染色能力（一）哈瑞斯（Harris）苏木精染液1．配方（1）甲液苏木精1g无水乙醇10ml（2）乙液钾明矾（硫酸铝钾）20g蒸馏水200ml（3）其他氧化汞0.5～1g冰醋酸0.5～1ml2．配制法分别配制甲、乙液，将乙液（加温并搅拌），待全部溶解后，再加入甲液，混合后煮沸1～2分钟，然后改用小火加温，慢慢加入氧化汞，同时不停地摇荡或搅拌使其充分氧化，当液体变为深紫蓝色时，即迅速将容器放入入冷水中使之迅速冷却，室温静置数小时至一夜。

第二天过滤，每100毫升滤液内加0.5～1毫升冰醋酸，以增强其染色力染色时间为3～15分钟此液为人工氧化剂，配制方便，配后第二天即可应用，且染色时间较短，为临床病理常用之方法，保存时间不能太长，经2～6个月后染色作用渐弱，故现用现配为好，一次不宜配制过多，应按需要量随用随配钾明矾为媒剂，氧化汞为氧化剂，冰醋酸为促染剂二、伊红染液的配制为砖红色粉末状或酱红色结晶，是最常用的胞浆染料伊红有水溶性和醇溶性，黄光（Y）与蓝光（B）之分病理组织学常规染色一般多用水溶性伊红Y伊红染液的一般浓度为0.25％～1％。

苏木素-伊红染色液(H-E)说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液(H-E）【型号】苏木素染色液分别为：Mayer型、改良Harris型、型改良Lillie-Mayer型；伊红染色液分别为：水溶型、醇溶型。

【包装规格】货号：DH0006单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为：2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。

【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。

【检验原理】苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法，在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值，细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强；细胞浆则相反，它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。

因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色，细胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色，红细胞则呈橙红色。

【主要组成成分】试剂组成主要成分苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)或苏木素染色液(改良Harris)或木素染色液(Mayer) 苏木色精伊红染色液(水溶)或伊红染色液(醇溶) 伊红【储存条件及有效期】5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

【样本要求】涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。

【检验方法】l、石蜡切片于二甲苯I、II中脱蜡；2、经无水乙醇和95%乙醇，经8O%乙醇，自来水冲洗；3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer或改良Harris)染色，自来水洗；或苏木素染色液(Mayer)染色；4、苏木素染色后用l%盐酸乙醇溶液分化数秒(l%盐酸乙醇溶液配制：99m1 75%乙醇加1ml浓盐酸）；若用苏木素染色液(Mayer)染色后则不需分化；5、自来水冲洗返蓝；亦可用碳酸锂水溶液返蓝，自来水洗；6、入伊红染色液(水溶)染色，稍洗；若用伊红染液(醇溶），切片应先经80%乙醇脱水后，再入伊红染液(醇溶)染色(忌水洗）；7、95%乙醇I、II中调色；8、无水乙醇I、II中脱水，二甲苯I、II中透明；9、封片胶封片，镜检。

两种染色试剂和方法如下。

000000一、HE染色000000试剂：000000苏木素染液：苏木精1g；无水乙醇25mL；硫酸铝钾10g；蒸馏水350mL；碘酸钾0.1g；冰醋酸10mL。

A 液：用25mL 无水乙醇溶解1g苏木精，摇动即可溶解。

B 液：用350mL 蒸馏水溶解10g硫酸铝钾，摇动或振荡即可溶解。

把A 液和 B 液混合，加入碘酸钾摇动至颜色加深。

最后加入10mL冰醋酸，摇动颜色变为深葡萄酒红色。

染液配制当日即可应用于染色。

酸化液：醋酸20-35mL加蒸馏水至700mL。

000000伊红染液：储液：取1g伊红，溶于100mL 95%的乙醇，待溶解完全后加几滴冰醋酸至染液呈半透明状，避光保存备用。

工作液：取一定量的伊红储液，加入等量70%乙醇，此液即为伊红染液的工作液。

000000染色步骤：000000（1）细胞爬片放用PBS漂洗3次，每次5min，无水乙醇固定5min，风干。

000000（2）95%乙醇1min，75%乙醇1min，三蒸水1min。

000000( 3 ) 浸洗5 % 的醋酸液 ( 酸化液 ) 数秒。

000000( 4 ) 苏木精染液 3 - 5 m i n，胞核呈橙红色。

000000( 5 ) 自来水冲洗至颜色变蓝。

000000( 6) 盐酸乙醇液分化数秒，颜色再次返红。

000000(7) 自来水再次冲洗，返蓝。

000000( 8) 伊红染液5min，流水漂洗15min左右。

000000二、吉姆萨染色000000试剂：000000吉姆萨染液配制：取吉姆萨粉末1g溶于66ml甘油中研磨混匀，然后放置55-60℃水浴2h，冷却后加入66ml甲醇中混匀，过滤后棕瓶分装保存。

0000 00PBS甲醇液：PBS与甲醇一比一混合。

000000染色步骤：000000（1）细胞爬片使用PBS漂洗3次，每次5min。

000000（2）加PBS甲醇液静置2min，去掉PBS甲醇液。

000000（3）加甲醇固定10min，去掉甲醇，加入新无水甲醇漂洗去掉。

HE染色试剂配置A：~1%的伊红酒精溶液：称取伊红~1g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状;以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可100毫升溶解;B：苏木素染液配方：配制3000ml,可按比列减少苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,最后加入冰醋酸和碘酸钠;C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可;染色流程1二甲苯Ⅰ15min2二甲苯Ⅱ15min3二甲苯：无水乙醇=1:12min4100%乙醇Ⅰ5min5100%乙醇Ⅱ5min680%乙醇5min7蒸馏水5min8苏木精液染色5min9流水稍洗去苏木精液1-3s101%盐酸乙醇1-3s11稍水洗10-30s12蒸馏水过洗1-2s13%伊红液染色1-3min14蒸馏水稍洗1-2s1580%乙醇稍洗1-2s1695%乙醇Ⅰ2-3s1795%乙醇Ⅱ3-5s18无水乙醇5-10min19石炭酸二甲苯5-10min20二甲苯Ⅰ2min21二甲苯Ⅱ2min22二甲苯Ⅲ2min23中性树胶封固注：①第11、12步可省去,13步冲水时间需延长至20-30min;②第21步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇;冷冻切片HE染色步骤：1冰冻切片固定10～30s2稍水洗1～2s3苏木精液染色60℃30～60s4流水洗去苏木精液5～10s51%盐酸乙醇1～3s6稍水洗1～2s7促蓝液返蓝5～10s8流水冲洗15～30s9%曙红液染色30～60s10蒸馏水稍洗1～2s1180%乙醇1～2s1295%乙醇1～2s13无水乙醇1～2s14石炭酸二甲苯2～3s15二甲苯Ⅰ2～3s16二甲苯Ⅱ2～3s17中性树胶封固;注：第14步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇;染色结果：细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色;4．12切片脱水透明切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖;如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色;切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水;石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去;染色评定标准：1切片完整,厚度4-6微米,厚薄均匀,无皱褶无刀痕；2染色核浆分明,红蓝适度,透明洁净,封裱美观;4 染色结果编辑细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色;细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色;胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色;着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变;例如,很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染;胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深;Masson染色,用于显示组织中纤维的染色方法之一;试剂：Regaud 氏苏木精：苏木精1g,95%酒精10ml,甘油10ml,蒸馏水80ml;将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用;Masson丽春红酸性复红液：丽春红,酸性复红,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml; %冰醋酸水溶液：冰醋酸 ml,蒸馏水100 ml;1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g,蒸馏水100 ml;苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g,蒸馏水98 ml,冰醋酸2 ml;1%光绿水溶液：光绿 1g,蒸馏水100 ml;Masson三色法步骤1．石蜡切片脱蜡至水;2．铬化处理或去汞盐沉淀甲醛固定的组织此步可略;3．依次自来水和蒸馏水洗;4．用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min;5．充分水洗,如过染可盐酸酒精分化;6．蒸馏水洗;7．用Masson 丽春红酸性复红液5-10min;8．以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻;9． 1%磷钼酸水溶液分化3-5min;10. 不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min;11．以%冰醋酸水溶液浸洗片刻;12．95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固;结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色如光绿液染色为绿色,胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色;体会与说明：1．控制好染色步骤;2．组织固定起着很重要的作用,根据不同的固定液可延长或缩短染色时间; 3．%冰醋酸水溶液洗,可使色调清晰鲜艳;4．磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制, 肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可;天狼猩红染色试剂配制1天狼星红饱和苦昧酸液 O．5％天狼星红10ml,苦味酸饱和液90ml;2天青石蓝液天青石蓝B1．25g．铁明矾1．25g,蒸馏水250ml;溶解煮沸、待冷却过滤加入甘油30ml,然后再加入浓盐酸0．5ml;染色步骤1中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水;2人大青石蓝液染5一lOmin;3蒸馏水洗3次;4天狼星红饱和苦昧酸浓染15-30min5无水乙醇直接分化与脱水;Devil二甲苯透明,中性树胶封固;注意事项1细胞核里染色可以用Harris苏木素染色液谈染;2染色封固后的切片,须及时用偏光显微镜进行观察和照相已保持鲜艳的色彩注：在偏光显微镜下可以观察到四种类型的胶原纤维;l型胶原纤维：紧密排列,显示很强的双折光性,呈黄色或红色的纤维oll型胶原纤维：显示弱的双折光,呈多种色彩的疏松网状分布;皿型胶原纤维：显示弱的双折光,呈绿色的细纤维;lv型胶原纤维：显示弱的双折光的基膜,呈淡黄色;免疫组化步骤ABC法1;4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液4℃中过夜;蜡块制作;切片,贴片;清洗5min×3后；2;加入配好的%的过氧化氢甲醇溶液甲醇80ml＋ 100ml＋30%过氧化氢30min,以消除内源性过氧化物酶的影响,清洗5min×3；3;加入配好的% Triton X10030% Triton X100＋ 100ml30min,以增加细胞的通透性,清洗5min×3；4;加入用血清稀释液牛血清白蛋白＋ 100ml＋叠氮纳稀释的一抗,4℃存放24-48h；吸去抗体,洗5min×3；5;加入稀释的的二抗,室温孵育2h;洗5min×3；6;加入ABC复合物之类的抗体,室温孵育2h,洗5min×3；蒸馏水迅速冲三次；7;加入显色液,进行免疫组织化学显色,时间一般不超过30min,可不时在显微镜下进行观察,待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液,用蒸馏水迅速冲三次后加入终止反应；8;梯度酒精脱水之后,封片,拍照;免疫组化SP法步骤：SPstreptavidin-perosidase法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法.按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等;按染色步骤可分为直接法又称一步法和间接法二步、三步或多步法；按结合方式可分为抗原—抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶PAP法和亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物ABC法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法等,其中SP法是最常使用的方法;一般的sp法步骤啊,具体如下：1.烤片,68℃,20分钟,2. 常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min3.阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min,PBS冲洗3X5min；4. 抗原修复:置枸橼酸缓冲液PH 中用煮沸95℃,15－20min,自然冷却20min 以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温,PBS冲洗3X5min;5. 正常羊血清工作液封闭,37℃10 min,倾去勿洗.6. 滴加一抗4℃冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5min用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照；滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS 冲洗3X5min;8. DAB/ H2O2反应染色,自来水充分冲洗后,苏木素复染,常规脱水,透明,干燥,封片;免疫组化Elivision二步法：1石蜡切片置于67℃烘箱中,烘片2小时,脱蜡至水,用的PBS冲洗三次,每次3分钟3×3’;2取一定量pH=柠檬酸盐缓冲液,加入微波盒中,微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档微波处理10分钟,取出微波盒流水自然泠却,从缓冲液中取出玻片,先用蒸馏水冲洗两次,之后用PBS冲洗2×3’;注：不是所有的抗体都需要微波修复的,视具体情况而定3每张切片加1滴3% H2O2,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性;PBS冲洗3×3’;4除去PBS液,每张切片加1滴相应的第一抗体相应稀释倍数,室温下孵育2小时;5PBS冲洗3×5’;除去PBS液,每张切片加1滴聚合物增强剂试剂A,室温下孵育20分钟;PBS冲洗3×3’;6除去PBS液,每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物试剂B,室温下孵育30分钟;PBS冲洗3×5’7除去PBS液,每张切片加1滴新鲜配制的DAB液,显微镜下观察5分钟;8苏木素复染,%HCl分化,自来水冲洗,蓝化,切片经梯度酒精脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封固,晾干后观察;注：即用型第二代免疫组化Elivision plus广谱试剂盒,购自福州脉新生物技术开发有限公司;包括：生物素化抗兔二抗、亲和素Reagent A、生物素－辣根过氧化物酶Reagent B、二氨基联苯胺DAB脱钙剂的配置10%EDTA的配置：1加热水浴锅到65℃2称取NaOH11g加到900mlddH2O中3再加入EDTA-Na2100g至水中；4水浴加热,搅拌至透明溶解5加入Na2HPO46g,NaH2PO4,NaCl9g;蒸馏水定容至1000ml 6调节pH值至~,室温或4度保存。