模式植物-拟南芥

拟南芥叶肉原生质体分离条件的优化

基于绿色荧光蛋白瞬时表达的植物亚细胞定位方法_于一帆

溶液配制1、纤维素酶解液：2、PEG4000溶液（一次配置可以保存五天，但是最好现用现配，每个样品需100μl PEG4000溶液，可根据实验样品量调整溶液配置总量）3、W5 溶液4、MMG溶液5、WI溶液拟南芥原生质体制备转化方法整理一、

拟南芥原生质体的提取和转化(1)取4周后抽薹前的叶片，切成1mm宽的长条，置于甘露醇溶液（称1.82g D-甘露醇于20ml双蒸水中）；共需叶片约90片；(2)将步骤1中细条捞出，置于酶解液中；避光，23℃,40-50rpm摇床上酶解3小时

实验1拟南芥室内培养观察与农杆菌转化拟南芥

实验四、农杆菌转化烟草和拟南芥

拟南芥原生质体制备转化操作流程主要试剂1. 纤维素酶解液：试剂15ml酶液体系1．1-1.5﹪Cellulase R10 (YaKult Honsha)0.225g干粉2．0.2-0.4﹪Mecerozyme R10 (YaKult Hon

拟南芥原生质体制备制备酶解液10 ml1．取幼嫩拟南芥叶片，使用新的单面刀片将叶片切为0.5 mm-1 mm大小。（用胶带把下表皮沾掉，效果更好。放一小培养皿里面降解）2．材料侵入10 ml酶解液中，暗培养2 h-2.5 h，至原生质体完全

采用PEG介导拟南芥叶片原生质体瞬时表达法。具体方法如下：1）在MS培养基上用无菌牙签点种拟南芥种子，萌发后待根长至1-3厘米（2周左右），移栽到营养土:蛭石为1:1的培养土中，置于培养箱，温度22℃，光照16h，湿度70%，培养2-3周；

大提质粒1．单菌落接种到5 ml含抗生素的LB培养液中（试管体积应比培养液至少大4倍；试管不应盖得太紧；转速应很剧烈）。2．当OD600=0.6时倒入含抗生素的250 ml LB培养液，37℃300 r/min培养约14-18 h。3. 4

拟南芥原生质体转化实验每次做大反应（用于CO-IP）最多做8管，每管需3 ml 原生质体溶液，浓度为106 ，10 ml 酶液需要40片叶子。小反应用于用于做蛋白定位，每管需200 μl 原生质体溶液叶片的选取：，取刚刚完全展开，叶面光滑，

10 5 mM β-Mercaptoethanol1ml 75mM β-Mercaptoethanol 母液11 用 0.45μm 滤膜过滤后使用过滤2. PEG4000 溶液（一

植物生理学报 Plant Physiology Journal 2014, 50 (3): 351~357351收稿 2013-11-21 修定 2014-01-12资助国家重点基础研究发展计划(2012CB944803)、浙江省青年科学基

拟南芥原生质体制备转化操作流程主要试剂1. 纤维素酶解液：试剂15ml酶液体系1．﹪ Cellulase R10 (YaKult Honsha) 干粉2． Mecerozyme R10 (YaKult Honsha) 干粉3． mannit

原生质体的培养过程1、细胞壁再生：首先体积膨大，叶绿体重新排列，新的细胞壁开始合成，细胞由 球形变成椭圆形。2、细胞分裂形成细胞团：一般在培养2-3天后细胞质增加，细胞器增殖，RN

电场 诱导微生物原生质体融合育种的优点？ 1、大幅度提高亲本间重组频率2、扩大重组的亲本范围3、集中双亲本优良性状机会更大第二节 微生物原生质体融合育种微生物原生质体融合育种程序（

拟南芥原生质体制备转化方法整理一、土培室播种种植的拟南芥。二、生长良好情况下在未开花前用于取材叶片制备原生质体。三、剪取中部生长良好的叶片用刀片切成0.5 -1 mm宽的叶条。四、将切好叶条掷入预先配置好的酶解液中（每5-10 ml酶解液大

PEG介导拟南芥叶片原生质体瞬时表达方法1.B5培养基上萌发拟南芥种子，待根长至1-3厘米时即可移栽到土里，温室培养，光照12h/12h，150μE。2.准备好一个90mm培养皿，称1.82克D－甘露醇于20ml双蒸水中。培养皿的盖子用来切

2.2.7 拟南芥原生质体制备制备酶解液10 ml1．取幼嫩拟南芥叶片，使用新的单面刀片将叶片切为0.5 mm-1 mm大小。（用胶带把下表皮沾掉，效果更好。放一小培养皿里面降解）2．材料侵入10 ml酶解液中，暗培养3 h-4 h，至原生